青刺果莖段微繁殖研究

鄭鵬　張玥

摘要 以MS、WPM、SHb、1/2MS為基本培養基，附加相同濃度的激素，將青刺果莖段置于不同溫度條件下進行培養。結果表明，青刺果無法誘導愈傷組織或胚狀體，主要原因可能是培養基不適合；取材時間、部位不正確。

關鍵詞 青刺果；莖段；微繁殖

中圖分類號 S567.9 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）14-0053-01

青刺果別名青刺尖、打油果，生長于海拔1 800～3 200 m的山坡、荒地、房前屋后，是一種藥用、食用兼備的特有經濟作物[1]。本項目對青刺果莖段進行組織培養，以期為青刺果種質資源的遺傳改良奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗概況

試驗在麗江師范高等專科學校園藝技術校內實驗室進行。試驗所需外植體為野生青刺果母株上的一年生新枝，于2016年11月3日上午在天氣晴朗時采自云南省麗江市周邊山上。新采的外植體用濕報紙包裹，防止水分流失，取樣后立即保藏于4 ℃冰箱中。

1.2 培養基條件

以MS、WPM、SHb、1/2MS為基本培養基，附加相同濃度的激素，并置于不同溫度條件下進行培養。培養基中蔗糖濃度均為30 g/L，瓊脂濃度均為8.0 g/L，pH值5.7～5.8；培養基在121 ℃條件下滅菌15～20 min后冷卻備用。光照時間晝夜交替為12 h。

1.3 試驗方法

2016年11月3日，從麗江周邊山上取野生青刺果一年生枝健壯部位，剪去花蕾、葉片，剪成長2～3 cm帶有2～3個莖刺的莖段，用洗滌劑清洗后，用流水沖洗10 min。將沖洗好的莖段放入燒杯中移至無菌工作臺，先用75%酒精消毒50 s，無菌水沖洗2次，再用0.2%次氯酸鈉溶液浸泡30 min，無菌水沖洗3次，分別置于MS、WPM、SHb、1/2MS培養基中，并分別置于13、18、22 ℃條件下進行培養。每個培養瓶中放3個外植體，1周后觀察記錄培養基內莖段生長情況。

將野生青刺果莖段分別接種在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L、WPM+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L、SHb+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L培養基中，并分別置于13、18、22 ℃條件下進行培養，1周后觀察記錄培養基內莖段生長情況[2-3]。

2 結果與分析

青刺果接種到MS、WPM、SHb、1/2MS培養基中，并分別置于13、18、22 ℃溫度條件下培養2周后，經觀察可知，青刺果莖段沒有生長跡象，隨著培養時間的延長，青刺果逐漸被污染。

將野生青刺果莖段分別接種在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L、WPM+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L、SHb+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L培養基中，并分別置于13、18、22 ℃溫度條件下培養2周后，經觀察可知，青刺果莖段也沒有生長跡象，隨著培養時間的延長，青刺果也逐漸被污染。

3 結論與討論

組織培養作為一種無性繁殖方式，不僅繁殖系數高，而且具有較高的遺傳穩定性，能夠很好地保持材料性狀已經獲得的遺傳增益[4]。

該試驗結果表明，將野生青刺果植物莖段分別培養在MS、WPM、SHb、1/2MS培養基中以及添加了6-BA（0.5 mg/L）、NAA（0.5 mg/L）激素的MS、WPM、SHb、1/2MS培養基中，其莖段不產生愈傷組織，也無生長的跡象，說明野生青刺果植物莖段不適合在MS、WPM、SHb、1/2MS培養基中以及添加了6-BA（0.5 mg/L）、NAA（0.5 mg/L）激素的MS、WPM、SHb、1/2MS培養基中生長。

此外，野生青刺果植物莖段隨著培養時間的延長，自身逐漸產生菌，導致青刺果莖段無法生長，其原因可能與本試驗的消毒處理方法有關。下一步，應優化消毒程序，更換消毒試劑。導致野生青刺果植物莖段無法生長的另外一個重要原因就是取材時節不適宜，取材的時間是11月，正是處于青刺果盛花期，但青刺果開花期較早，春節前后即開花，花期1～2個月[5]，此期有可能青刺果莖段處于生長末期，外植體對誘導反應遲鈍或無反應[6]。對于青刺果莖段培養失敗的另一原因可能是木本植物的位置效應比較明顯，不同取樣部位，培養結果不一[7-8]。

4 參考文獻

[1] 范志遠，習學良，歐陽和，等.青刺果的植物學特性及其人工栽培技術[J].西部林業科學，2005（4）：47-52.

[2] 張宇，蔣召雪.野生青刺果研究綜述[J].西昌學院學報（自然科學版），2007（3）：34-36.

[3] 鄭鵬，張玥.我國青刺果研究進展[J].安徽農業科學，2011（24）：14624-14625.

[4] 楊曉紅，林洋，于建軍.短梗胡枝子優良單株組培快繁技術研究[J].北京農學院學報，2015，30（2）：59-62.

[5] 和瓊姬，和加衛，王宇萍，等.青刺果研究概述[J].中國農學通報，2016，32（7）：74-78.

[6] 鄭春明，羅君琴，呂偉德.植物組織培養技術[M].杭州：浙江大學出版社，2011：64-65.

[7] 王水琦.植物組織培養技術[M].北京：中國輕工業出版社，2008：59-60.

[8] 楊建華，范志遠，李淑芳，等.青刺果育苗技術[J].林業實用技術，2012（1）：28-29.