頂空毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定阿瑞匹坦原料藥中6種有機(jī)溶劑的殘留量Δ

鄭瑞鳳，楊 晨，任鳳英，賈紅倩，冉 琳，秦其輝，茍小軍，馮 菊（抗生素研究與再評(píng)價(jià)四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/成都大學(xué)四川抗菌素工業(yè)研究所，成都 610052）

頂空毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定阿瑞匹坦原料藥中6種有機(jī)溶劑的殘留量Δ

鄭瑞鳳＊，楊 晨#，任鳳英，賈紅倩，冉 琳，秦其輝，茍小軍，馮 菊（抗生素研究與再評(píng)價(jià)四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/成都大學(xué)四川抗菌素工業(yè)研究所，成都 610052）

目的：建立同時(shí)測(cè)定阿瑞匹坦原料藥中甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃6種有機(jī)溶劑殘留量的方法。方法：采用頂空毛細(xì)管氣相色譜法。色譜柱為DB-624毛細(xì)管柱，程序升溫，進(jìn)樣口溫度為180℃，檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為260℃，載氣為氮?dú)猓獨(dú)饬魉贋?.0 mL/min，分流比為5∶1，頂空進(jìn)樣量為1.0 mL，頂空平衡溫度為80℃，平衡時(shí)間為40 min。結(jié)果：甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為6.052～605.232 μg/mL（r＝0.999 9）、9.987～998.718 μg/mL（r＝0.999 9）、9.998～999.768 μg/mL（r＝0.999 8）、9.986～998.634 μg/mL（r＝0.999 9）、9.991～999.090 μg/mL（r＝0.999 7）、1.461～146.133 μg/mL（r＝0.999 5）；定量限分別為1.782 1、2.079 0、0.749 8、1.777 8、0.223 1、0.607 0 μg/mL，檢測(cè)限分別為0.594 0、0.693 0、0.249 9、0.592 6、0.074 4、0.202 3 μg/mL；精密度試驗(yàn)的RSD＜2.0%，穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)中只檢出丙酮和異丙醇，RSD＜2.0%；加樣回收率范圍分別為99.34%～100.75%（RSD＝0.52%，n＝9）、98.20%～100.24%（RSD＝0.69%，n＝9）、98.07%～100.07%（RSD＝0.84%，n＝9）、99.86%～101.32%（RSD＝0.58%，n＝9）、97.87%～104.02%（RSD＝2.13%，n＝9）、98.26%～100.58%（RSD＝0.75%，n＝9）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于同時(shí)測(cè)定阿瑞匹坦原料藥中6種有機(jī)溶劑的殘留量。

頂空毛細(xì)管氣相色譜法；阿瑞匹坦；有機(jī)溶劑；殘留量

阿瑞匹坦（Aprepitant）是美國(guó)FDA于2003年3月批準(zhǔn)上市的第一個(gè)神經(jīng)激肽1（NK-1）受體拮抗藥，與其他抗嘔吐藥物聯(lián)合使用以預(yù)防腫瘤化療初次或重復(fù)治療過程中出現(xiàn)的急性或遲發(fā)性惡心和嘔吐[1]。與其他止吐神經(jīng)途徑藥不同，阿瑞匹坦能夠維持長(zhǎng)時(shí)間的中樞活性[2-3]，對(duì)許多瘤種導(dǎo)致的惡心和嘔吐均有顯著的抑制作用[4-5]，用藥安全性好，臨床止吐效果顯著[1]。阿瑞匹坦在合成工藝中使用了有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃等有機(jī)溶劑，但是目前國(guó)內(nèi)尚未有關(guān)于測(cè)定阿瑞匹坦原料藥中有機(jī)溶劑殘留量的報(bào)道。鑒于此，本課題組根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典》（四部）“通則0861”[6]及人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議（ICH）有機(jī)溶劑殘留量指導(dǎo)原則[7]，采用頂空氣相色譜法建立了同時(shí)測(cè)定阿瑞匹坦原料藥中上述6種有機(jī)溶劑的殘留量，以期為該原料藥的質(zhì)量控制提供參考[8-10]。

1 材料

1.1 儀器

7890A型氣相色譜儀，包括G1888頂空進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）；KQ-400KDE型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；FA1004型電子分析天平（上海越平儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

阿瑞匹坦原料藥（四川抗菌素工業(yè)研究所化學(xué)部自制，批號(hào)：151101、151102、151103）；甲醇對(duì)照品（批號(hào)：106007）、乙醇對(duì)照品（批號(hào)：111727）、丙酮對(duì)照品（批號(hào)：100014）、異丙醇對(duì)照品（批號(hào)：101040）、甲基叔丁基醚對(duì)照品（批號(hào)：101995）、四氫呋喃對(duì)照品（批號(hào)：108101）均購自德國(guó)Merck公司，純度均≥99.8%；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細(xì)管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm）；升溫程序：45℃保持8 min，然后以15℃/min升溫至220℃；進(jìn)樣口溫度：180℃；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度：260℃；載氣：氮?dú)猓坏獨(dú)饬魉伲?.0 mL/min；分流比：5∶1；頂空進(jìn)樣量：1.0 mL；頂空平衡溫度：80℃；平衡時(shí)間：40 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃對(duì)照品各100.0 mg，分別置于10 mL量瓶中，加DMF定容，搖勻，得單一對(duì)照品貯備液；分別吸取上述單一對(duì)照品貯備液3.0、5.0、5.0、5.0、5.0、0.72 mL，置于同一50 mL量瓶中，加DMF定容，搖勻，即得混合對(duì)照品貯備液；精密量取上述混合對(duì)照品貯備液2.5 mL，置于10 mL量瓶中，加DMF定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約0.1 g，精密稱定，置于10 mL頂空瓶中，精密加入DMF 2.0 mL，超聲（功率：200 W，頻率：40 kHz，下同）處理5 min使之溶解，加蓋密封，即得。

2.2.3 空白溶液 以DMF為空白溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞1.5；理論板數(shù)以甲醇峰面積計(jì)為18 000，甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃的保留時(shí)間分別為3.521、4.591、5.287、5.508、6.396、8.128 min。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測(cè)定無干擾。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液各5.0、2.5、1.0、0.5、0.1 mL，置于同一10 mL量瓶中，加DMF定容，搖勻，制成系列混合對(duì)照品溶液。取上述系列混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)有機(jī)溶劑質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程與線性方程見表1。

表1 回歸方程與線性范圍Tab 1 Regression equations and linear ranges

2.5 定量限（LOQ）與檢測(cè)限（LOD）考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得LOQ；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得LOD，結(jié)果見表2。

表2 LOQ與LOD測(cè)定結(jié)果Tab 2 Results of LOQ and LOD（μg/mL）

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃峰面積的RSD分別為0.53%、0.45%、0.40%、0.44%、0.66%、0.40%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：151101）適量，分別于室溫下放置0、1、2、4、6 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚和四氫呋喃均未檢出，只檢出丙酮和異丙醇，其峰面積的RSD分別為0.72%、0.55%（n＝5），表明供試品溶液在室溫下放置6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取樣品（批號(hào)：151101）適量，共6份，各約0.10 g，分別置于10 mL頂空瓶中，各加入2.0 mL DMF，超聲處理5 min使之完全溶解，加蓋密封，搖勻，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算有機(jī)溶劑的殘留量。結(jié)果，甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚和四氫呋喃均未檢出，只檢出丙酮和異丙醇，其殘留量的平均值分別為0.05%、0.07%，RSD分別為1.70%、1.14%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：151101）適量，共9份，每份約0.10 g，精密稱定，分別置于10 mL頂空瓶中，各加入低、中、高質(zhì)量的待測(cè)有機(jī)溶劑對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表3。

2.10 樣品有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定

精密稱取3批樣品各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算樣品有機(jī)溶劑殘留量，結(jié)果見表4（“-”表示未檢出）。

3 討論

3.1 頂空平衡時(shí)間的選擇

本試驗(yàn)曾考察了不同的頂空平衡時(shí)間（10、20、30、40、50、60 min）時(shí)的色譜峰面積，結(jié)果當(dāng)平衡時(shí)間超過40 min后其峰面積基本不再增加，說明在40 min時(shí)各待測(cè)有機(jī)溶劑已在氣液兩相間達(dá)到平衡，故本試驗(yàn)選擇40 min作為頂空平衡時(shí)間[11]。

表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 3 Results of recovery tests（n＝9）

表4 樣品有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定結(jié)果（n＝3，%）Tab 4 Results of residual organic solvents determination of samples（n＝3，%）

3.2 頂空平衡溫度的選擇

本試驗(yàn)也考察了不同的頂空平衡溫度（70、80、90、100、110℃）時(shí)的色譜峰面積，結(jié)果隨著平衡溫度升高，色譜峰面積不斷增大。考慮到溫度過高，可能引起頂空瓶的密封性下降及揮發(fā)性物質(zhì)的熱降解影響測(cè)定結(jié)果，且待測(cè)有機(jī)溶劑在80℃條件下能全部能檢出，故本試驗(yàn)選擇80℃作為頂空平衡溫度。

3.3 色譜柱的選擇

本試驗(yàn)考察了不同的毛細(xì)管柱（DB-4、DB-624、HP-5）對(duì)色譜分離的影響，結(jié)果顯示采用DB-624毛細(xì)管柱分離效果最好，且靈敏度高，待測(cè)有機(jī)溶劑能達(dá)到基線分離，峰型對(duì)稱美觀，故本試驗(yàn)選用DB-624毛細(xì)管柱為色譜柱。

3.4 溶劑的選擇

阿瑞匹坦原料藥在水中溶解性差，為避免出現(xiàn)樣品包裹有機(jī)溶劑的情況，不宜選擇水作為有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定的溶劑。但阿瑞匹坦原料藥能很好地溶于DMF，且6種待測(cè)有機(jī)溶劑也均能很好地溶于DMF中，在選定的色譜條件下不干擾上述6種待測(cè)有機(jī)溶劑的出峰，故本試驗(yàn)選用DMF作為溶劑[12-13]。

綜上所述，本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于同時(shí)測(cè)定阿瑞匹坦原料藥中6種有機(jī)溶劑的殘留量。

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Simultaneous Determination of 6 Residual Organic Solvents in Aprepitant Raw Material by Headspace Capillary GC

ZHENG Ruifeng，YANG Chen，REN Fengying，JIA Hongqian，RAN Lin，QIN Qihui，GOU Xiaojun，F(xiàn)ENG Ju（Sichuan Provincial Key Laboratory of Antibiotics Research and Re-evaluation/Sichuan Industrial Institute of Antibiotics，Chengdu University，Chengdu 610052，China）

OBJECTIVE：To establish a method for simultaneous determination of 6 residual organic solvents in aprepitant raw material as methanol，ethanol，acetone，isopropyl alcohol，methyl tert-butyl ether and tetrahydrofuran.METHODS：Headspace capillary gas chromatography was adopted.The determination was performed on DB-624 capillary column using temperature programming.The temperature of injector port was 180℃，and flame ionization detector was used with temperature of 260℃.Nitrogen was used as carrier gas with flow rate 3.0 mL/min.The spilt ratio was 5∶1，and head-space injection volume was 1.0 mL.The head-space equilibrium temperature was set at 80℃，and equilibrium time was 40 min.RESULTS：The linear ranges of methanol，ethanol，acetone，isopropyl alcohol，methyl tert-butyl ether，tetrahydrofuran were 6.052-605.232 μg/mL（r＝0.999 9），9.987-998.718 μg/mL（r＝0.999 9），9.998-999.768 μg/mL（r＝0.999 8），9.986-998.634 μg/mL（r＝0.999 9），9.991-999.090 μg/mL（r＝0.999 7），1.461-146.133 μg/mL（r＝0.999 5），respectively.The limits of quantitation were 1.782 1，2.079 0，0.749 8，1.777 8，0.223 1，0.607 0 μg/mL；the limits of detection were 0.594 0，0.693 0，0.249 9，0.592 6，0.074 4，0.202 3 μg/mL，respectively. RSD of precision test was lower than 2.0%.Only acetone and isopropyl alcohol were detected in stability test and reproducibility tests，RSD＜2.0%.Their recoveries were 99.34-100.75%（RSD＝0.52%，n＝9），98.20%-100.24%（RSD＝0.69%，n＝9），98.07%-100.07%（RSD＝0.84%，n＝9），99.86%-101.32%（RSD＝0.58%，n＝9），97.87%-104.02%（RSD＝2.13%，n＝9），98.26%-100.58%（RSD＝0.75%，n＝9），respectively.CONCLUSIONS:The established method is simple，accurate and reproducible，and can be used for simultaneous determination of 6 residual organic solvents in aprepitant raw material.

Headspace capillary gas chromatography；Aprepitant；Organic solvent；Residual

R917

A

1001-0408（2017）24-3426-04

2017-03-16

2017-06-06）

（編輯：劉 柳）

藥食同源植物資源開發(fā)四川省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金（No.10Y201608）；成都大學(xué)校青年基金（No.2015XJZ08）

＊碩士研究生。研究方向：藥物分析。E-mail：1120338663@qq. com

#通信作者：講師，碩士。研究方向：質(zhì)量控制。電話：028-84216044。E-mail：yangchen@cdu.edu.cn

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.24.33