頂空毛細管氣相色譜法同時測定阿瑞匹坦原料藥中6種有機溶劑的殘留量Δ

鄭瑞鳳，楊 晨，任鳳英，賈紅倩，冉 琳，秦其輝，茍小軍，馮 菊（抗生素研究與再評價四川省重點實驗室/成都大學四川抗菌素工業研究所，成都 610052）

頂空毛細管氣相色譜法同時測定阿瑞匹坦原料藥中6種有機溶劑的殘留量Δ

鄭瑞鳳＊，楊 晨#，任鳳英，賈紅倩，冉 琳，秦其輝，茍小軍，馮 菊（抗生素研究與再評價四川省重點實驗室/成都大學四川抗菌素工業研究所，成都 610052）

目的：建立同時測定阿瑞匹坦原料藥中甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃6種有機溶劑殘留量的方法。方法：采用頂空毛細管氣相色譜法。色譜柱為DB-624毛細管柱，程序升溫，進樣口溫度為180℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為260℃，載氣為氮氣，氮氣流速為3.0 mL/min，分流比為5∶1，頂空進樣量為1.0 mL，頂空平衡溫度為80℃，平衡時間為40 min。結果：甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃檢測質量濃度線性范圍分別為6.052～605.232 μg/mL（r＝0.999 9）、9.987～998.718 μg/mL（r＝0.999 9）、9.998～999.768 μg/mL（r＝0.999 8）、9.986～998.634 μg/mL（r＝0.999 9）、9.991～999.090 μg/mL（r＝0.999 7）、1.461～146.133 μg/mL（r＝0.999 5）；定量限分別為1.782 1、2.079 0、0.749 8、1.777 8、0.223 1、0.607 0 μg/mL，檢測限分別為0.594 0、0.693 0、0.249 9、0.592 6、0.074 4、0.202 3 μg/mL；精密度試驗的RSD＜2.0%，穩定性、重復性試驗中只檢出丙酮和異丙醇，RSD＜2.0%；加樣回收率范圍分別為99.34%～100.75%（RSD＝0.52%，n＝9）、98.20%～100.24%（RSD＝0.69%，n＝9）、98.07%～100.07%（RSD＝0.84%，n＝9）、99.86%～101.32%（RSD＝0.58%，n＝9）、97.87%～104.02%（RSD＝2.13%，n＝9）、98.26%～100.58%（RSD＝0.75%，n＝9）。結論：該方法簡便、準確、重復性好，適用于同時測定阿瑞匹坦原料藥中6種有機溶劑的殘留量。

頂空毛細管氣相色譜法；阿瑞匹坦；有機溶劑；殘留量

阿瑞匹坦（Aprepitant）是美國FDA于2003年3月批準上市的第一個神經激肽1（NK-1）受體拮抗藥，與其他抗嘔吐藥物聯合使用以預防腫瘤化療初次或重復治療過程中出現的急性或遲發性惡心和嘔吐[1]。與其他止吐神經途徑藥不同，阿瑞匹坦能夠維持長時間的中樞活性[2-3]，對許多瘤種導致的惡心和嘔吐均有顯著的抑制作用[4-5]，用藥安全性好，臨床止吐效果顯著[1]。阿瑞匹坦在合成工藝中使用了有機溶劑甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃等有機溶劑，但是目前國內尚未有關于測定阿瑞匹坦原料藥中有機溶劑殘留量的報道。鑒于此，本課題組根據2015年版《中國藥典》（四部）“通則0861”[6]及人用藥品注冊技術要求國際協調會議（ICH）有機溶劑殘留量指導原則[7]，采用頂空氣相色譜法建立了同時測定阿瑞匹坦原料藥中上述6種有機溶劑的殘留量，以期為該原料藥的質量控制提供參考[8-10]。

1 材料

1.1 儀器

7890A型氣相色譜儀，包括G1888頂空進樣器、氫火焰離子化檢測器（美國Agilent公司）；KQ-400KDE型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；FA1004型電子分析天平（上海越平儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

阿瑞匹坦原料藥（四川抗菌素工業研究所化學部自制，批號：151101、151102、151103）；甲醇對照品（批號：106007）、乙醇對照品（批號：111727）、丙酮對照品（批號：100014）、異丙醇對照品（批號：101040）、甲基叔丁基醚對照品（批號：101995）、四氫呋喃對照品（批號：108101）均購自德國Merck公司，純度均≥99.8%；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm）；升溫程序：45℃保持8 min，然后以15℃/min升溫至220℃；進樣口溫度：180℃；檢測器：氫火焰離子化檢測器；檢測器溫度：260℃；載氣：氮氣；氮氣流速：3.0 mL/min；分流比：5∶1；頂空進樣量：1.0 mL；頂空平衡溫度：80℃；平衡時間：40 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 精密稱取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃對照品各100.0 mg，分別置于10 mL量瓶中，加DMF定容，搖勻，得單一對照品貯備液；分別吸取上述單一對照品貯備液3.0、5.0、5.0、5.0、5.0、0.72 mL，置于同一50 mL量瓶中，加DMF定容，搖勻，即得混合對照品貯備液；精密量取上述混合對照品貯備液2.5 mL，置于10 mL量瓶中，加DMF定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約0.1 g，精密稱定，置于10 mL頂空瓶中，精密加入DMF 2.0 mL，超聲（功率：200 W，頻率：40 kHz，下同）處理5 min使之溶解，加蓋密封，即得。

2.2.3 空白溶液 以DMF為空白溶液。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液、空白溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達到基線分離，分離度＞1.5；理論板數以甲醇峰面積計為18 000，甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃的保留時間分別為3.521、4.591、5.287、5.508、6.396、8.128 min。結果表明，其他成分對測定無干擾。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

2.4 線性關系考察

精密吸取“2.2.1”項下混合對照品貯備液各5.0、2.5、1.0、0.5、0.1 mL，置于同一10 mL量瓶中，加DMF定容，搖勻，制成系列混合對照品溶液。取上述系列混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測有機溶劑質量濃度（x，μg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，回歸方程與線性方程見表1。

表1 回歸方程與線性范圍Tab 1 Regression equations and linear ranges

2.5 定量限（LOQ）與檢測限（LOD）考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。當信噪比為10∶1時，得LOQ；當信噪比為3∶1時，得LOD，結果見表2。

表2 LOQ與LOD測定結果Tab 2 Results of LOQ and LOD（μg/mL）

2.6 精密度試驗

取“2.2.2”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、甲基叔丁基醚、四氫呋喃峰面積的RSD分別為0.53%、0.45%、0.40%、0.44%、0.66%、0.40%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：151101）適量，分別于室溫下放置0、1、2、4、6 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚和四氫呋喃均未檢出，只檢出丙酮和異丙醇，其峰面積的RSD分別為0.72%、0.55%（n＝5），表明供試品溶液在室溫下放置6 h內穩定性良好。

2.8 重復性試驗

精密稱取樣品（批號：151101）適量，共6份，各約0.10 g，分別置于10 mL頂空瓶中，各加入2.0 mL DMF，超聲處理5 min使之完全溶解，加蓋密封，搖勻，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算有機溶劑的殘留量。結果，甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚和四氫呋喃均未檢出，只檢出丙酮和異丙醇，其殘留量的平均值分別為0.05%、0.07%，RSD分別為1.70%、1.14%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取樣品（批號：151101）適量，共9份，每份約0.10 g，精密稱定，分別置于10 mL頂空瓶中，各加入低、中、高質量的待測有機溶劑對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表3。

2.10 樣品有機溶劑殘留量測定

精密稱取3批樣品各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品有機溶劑殘留量，結果見表4（“-”表示未檢出）。

3 討論

3.1 頂空平衡時間的選擇

本試驗曾考察了不同的頂空平衡時間（10、20、30、40、50、60 min）時的色譜峰面積，結果當平衡時間超過40 min后其峰面積基本不再增加，說明在40 min時各待測有機溶劑已在氣液兩相間達到平衡，故本試驗選擇40 min作為頂空平衡時間[11]。

表3 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 3 Results of recovery tests（n＝9）

表4 樣品有機溶劑殘留量測定結果（n＝3，%）Tab 4 Results of residual organic solvents determination of samples（n＝3，%）

3.2 頂空平衡溫度的選擇

本試驗也考察了不同的頂空平衡溫度（70、80、90、100、110℃）時的色譜峰面積，結果隨著平衡溫度升高，色譜峰面積不斷增大。考慮到溫度過高，可能引起頂空瓶的密封性下降及揮發性物質的熱降解影響測定結果，且待測有機溶劑在80℃條件下能全部能檢出，故本試驗選擇80℃作為頂空平衡溫度。

3.3 色譜柱的選擇

本試驗考察了不同的毛細管柱（DB-4、DB-624、HP-5）對色譜分離的影響，結果顯示采用DB-624毛細管柱分離效果最好，且靈敏度高，待測有機溶劑能達到基線分離，峰型對稱美觀，故本試驗選用DB-624毛細管柱為色譜柱。

3.4 溶劑的選擇

阿瑞匹坦原料藥在水中溶解性差，為避免出現樣品包裹有機溶劑的情況，不宜選擇水作為有機溶劑殘留量測定的溶劑。但阿瑞匹坦原料藥能很好地溶于DMF，且6種待測有機溶劑也均能很好地溶于DMF中，在選定的色譜條件下不干擾上述6種待測有機溶劑的出峰，故本試驗選用DMF作為溶劑[12-13]。

綜上所述，本方法簡便、準確、重復性好，適用于同時測定阿瑞匹坦原料藥中6種有機溶劑的殘留量。

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Simultaneous Determination of 6 Residual Organic Solvents in Aprepitant Raw Material by Headspace Capillary GC

ZHENG Ruifeng，YANG Chen，REN Fengying，JIA Hongqian，RAN Lin，QIN Qihui，GOU Xiaojun，FENG Ju（Sichuan Provincial Key Laboratory of Antibiotics Research and Re-evaluation/Sichuan Industrial Institute of Antibiotics，Chengdu University，Chengdu 610052，China）

OBJECTIVE：To establish a method for simultaneous determination of 6 residual organic solvents in aprepitant raw material as methanol，ethanol，acetone，isopropyl alcohol，methyl tert-butyl ether and tetrahydrofuran.METHODS：Headspace capillary gas chromatography was adopted.The determination was performed on DB-624 capillary column using temperature programming.The temperature of injector port was 180℃，and flame ionization detector was used with temperature of 260℃.Nitrogen was used as carrier gas with flow rate 3.0 mL/min.The spilt ratio was 5∶1，and head-space injection volume was 1.0 mL.The head-space equilibrium temperature was set at 80℃，and equilibrium time was 40 min.RESULTS：The linear ranges of methanol，ethanol，acetone，isopropyl alcohol，methyl tert-butyl ether，tetrahydrofuran were 6.052-605.232 μg/mL（r＝0.999 9），9.987-998.718 μg/mL（r＝0.999 9），9.998-999.768 μg/mL（r＝0.999 8），9.986-998.634 μg/mL（r＝0.999 9），9.991-999.090 μg/mL（r＝0.999 7），1.461-146.133 μg/mL（r＝0.999 5），respectively.The limits of quantitation were 1.782 1，2.079 0，0.749 8，1.777 8，0.223 1，0.607 0 μg/mL；the limits of detection were 0.594 0，0.693 0，0.249 9，0.592 6，0.074 4，0.202 3 μg/mL，respectively. RSD of precision test was lower than 2.0%.Only acetone and isopropyl alcohol were detected in stability test and reproducibility tests，RSD＜2.0%.Their recoveries were 99.34-100.75%（RSD＝0.52%，n＝9），98.20%-100.24%（RSD＝0.69%，n＝9），98.07%-100.07%（RSD＝0.84%，n＝9），99.86%-101.32%（RSD＝0.58%，n＝9），97.87%-104.02%（RSD＝2.13%，n＝9），98.26%-100.58%（RSD＝0.75%，n＝9），respectively.CONCLUSIONS:The established method is simple，accurate and reproducible，and can be used for simultaneous determination of 6 residual organic solvents in aprepitant raw material.

Headspace capillary gas chromatography；Aprepitant；Organic solvent；Residual

R917

A

1001-0408（2017）24-3426-04

2017-03-16

2017-06-06）

（編輯：劉 柳）

藥食同源植物資源開發四川省高校重點實驗室開放基金（No.10Y201608）；成都大學校青年基金（No.2015XJZ08）

＊碩士研究生。研究方向：藥物分析。E-mail：1120338663@qq. com

#通信作者：講師，碩士。研究方向：質量控制。電話：028-84216044。E-mail：yangchen@cdu.edu.cn

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.24.33