干細胞轉錄因子O C T4、SO X2在食管鱗癌中的表達及與預后的關系

張暉，周順軍，胡文聰

（四川省攀枝花市第二人民醫院，四川 攀枝花 617068）

干細胞轉錄因子O C T4、SO X2在食管鱗癌中的表達及與預后的關系

張暉，周順軍，胡文聰

（四川省攀枝花市第二人民醫院，四川 攀枝花 617068）

目的探討干細胞轉錄因子Sry相關HMG盒2（SOX2）、八聚體結合轉錄因子4（OCT4）在食管鱗癌中的表達變化及與患者臨床特征、預后的關系。方法采用免疫組織化學SP法檢測77例手術后經病理學證實為食管鱗癌的手術標本（食管癌組）和40例癌旁組織標本（癌旁組織）中SOX2、OCT4蛋白的表達水平，并分析其與患者臨床特征、預后的關系。結果食管癌組織中的SOX2蛋白、OCT4蛋白陽性表達率分別為63.64%和77.92%均高于癌旁組織的17.50%和15.00%，且差異具有統計學意義（P＜0.05）；食管癌組織中的SOX2蛋白、Oct4蛋白在低分化、淋巴結轉移患者中呈高表達（P＜0.05）；食管癌組織中的SOX2蛋白陽性表達患者的3年隨訪中位生存期24個月低于陰性患者的30個月（χ2=4.072，P=0.044）；OCT4蛋白陽性表達患者的中位生存時間21個月低于陰性患者33個月（χ2=4.880，P=0.037）。結論SOX2、OCT4蛋白在食管癌組織中高表達，并且與患者的分化程度、轉移及預后有關。

Sry相關HMG盒2；八聚體結合轉錄因子4；食管鱗癌；表達；預后

隨著人們的物質生活水平提高，飲食上多高脂肪高蛋白，使我國食管癌漸呈高發狀態，也使我國逐漸成為世界上食管癌高死亡率的國家[1]。相關研究顯示，食管癌與生活、飲食習慣有密切的關系，不良的生活、飲食習慣可增加食管癌的發生風險[2]。在我國，食管癌常見的類型為鱗癌，早期不易發現、侵襲性強、進展迅速、容易耐藥、容易復發。多數患者在早期僅有咽下哽咽等不適感，但可自行緩解甚至消失，導致患者未重視從而錯過早期最佳治療時間。對食管鱗癌的常規治療可以使瘤體縮小，甚至消失，但不能使腫瘤治愈，說明在瘤體組織中有一些腫瘤細胞可以逃避藥物作用，表明有腫瘤干細胞的存在。現代研究已經清楚干細胞轉錄因子Sry相關HMG盒2（stem cell transcription factor Sry related HMG box 2，SOX2）、八聚體結合轉錄因子4（eight dimer binding transcription factor 4，OCT4）等干細胞轉錄調控因子參與了胚胎干細胞及原始生殖細胞的自我更新過程，大量研究表明，OCT4、SOX2等在腫瘤組織中有表達[3]。為了進一步研究干細胞轉錄調控因子對食管鱗癌的表達及治療的重要意義，筆者探討了OCT4、SOX2在食管鱗癌中的表達及與臨床預后的關系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取四川省攀枝花市第二人民醫院手術后經病理學證實為食管鱗癌的77例患者的癌組織手術標本（食管癌組）和40例癌旁組織標本（癌旁組織）。食管癌組77例患者。男49例、女28例；年齡39～79歲，平均（63.8±12.7）歲；分化程度：高分化 14例、中分化17例、低分化46例；根據2009年美國癌癥聯合會（AJCC）TNM分期標準：Ⅰ期17例、Ⅱ期19例、Ⅲ期20例、Ⅳ期21例；發生淋巴結轉移40例。癌旁組織40例患者。男29例、女11例；年齡41～75歲，平均（64.8±10.5）歲。兩組患者的年齡、性別構成差異無統計學意義（P＞0.05）具有可比性。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準 所有納入對象的組織標本均來源于本院手術切除后經病理學證實為食管癌組織或癌旁組織；患者術前未接受過放療、化療等治療；患者的各項臨床病理特征、術后隨訪情況均具有良好的數據記錄；本研究獲得研究對象的知情同意。

1.2.2 排除標準 術前具有放化療病史的患者；合并其他惡性腫瘤疾病的患者；各項資料不完整的患者。

1.3 方法

1.3.1 組織標本采集 在標本離體后迅速進行組織標本的采集。首先觀察大體標本并進行拍照，確認腫瘤的部位及范圍，然后將癌及癌旁組織切成多塊直徑為0.5 cm左右的組織小塊并分塊裝進帶有編號的滅菌凍存管，立即放進液氮轉移罐。

1.3.2 免疫組織化學法 切片，烤片；脫蠟及復水；1份30%過氧化氫H2O2加10份蒸餾水，室溫10 min，蒸餾水洗3次，每次3 min；微波修復；將切片自然冷卻至室溫，PBS洗滌3次；封閉，5%BSA，室溫20 min，甩去多余液體；滴加一抗，37℃，1 h，或者4℃過夜；PBS洗滌3次，每次3 min；滴加二抗，37℃，15～30 min；PBS洗滌3次，每次3 min；滴加SABC，37℃，30 min；PBS 洗滌 3 次，每次 5 min；1 ml蒸餾水中分別滴加顯色劑，混勻；DAB顯色劑配置好后，滴加于切片，室溫，鏡下檢測反應時間（約5 min）；自來水沖洗干凈，過蒸餾水；蘇木素復染2 min，自來水沖洗；脫水；樹膠封片，鏡檢。

1.4 免疫組織化學判斷標準

免疫組織化學結果判定：SOX2、OCT4蛋白的陽性著色表達于細胞核，呈黃色、棕黃色、褐色顆粒，本研究采用光鏡下度每一張切片每一個視野中的陽性著色細胞數、著色強度進行評分的半定量方法進行評價；根據著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例＜10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數51%～75%為3分、陽性細胞數所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分≤3分為陰性、＞3分為陽性。

1.5 統計學方法

采用SAS9.0軟件進行數據分析，正態分布的計量指標采用均數±標準差（±s）表示，百分或構成比率比較采用χ2檢驗；生存分析采用kaplan-meier法，生存中位時間比較采用log-rank秩檢驗法；P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組SO X2蛋白、O C T4蛋白陽性表達

食管癌組中的SOX2蛋白、OCT4蛋白陽性表達率分別為63.64%和77.92%均高于癌旁組織中的17.50%和 15.00%，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1和圖1。

2.2 食管癌組SO X2蛋白、O C T4蛋白陽性表達與患者的臨床病理特征的關系

食管癌組中的SOX2蛋白、OCT4蛋白在低分化、淋巴結轉移患者中呈高表達（P＜0.05），見表2、3。

2.3 食管癌組中SO X2蛋白、O C T4蛋白陽性表達與患者預后生存的關系

食管癌組中的SOX2蛋白陽性表達患者的3年隨訪中位生存期24個月低于陰性表達患者的30個月（χ2=4.072，P=0.044）（見圖 2）；OCT4 蛋白陽性表達患者的中位生存時間21個月低于陰性患者33個月（χ2=4.880，P=0.037）（見圖 3）。

表1 SO X2蛋白、O C T4蛋白陽性表達比較 例（%）

表2 食管癌組中SO X2蛋白表達與患者的臨床病理特征的關系

表3 食管癌組中O C T4蛋白表達與患者的臨床病理特征的關系

圖1 SO X2蛋白和O C T4蛋白陽性表達 （SP×400）

圖2 SO X2蛋白不同表達患者的生存函數圖

圖3 O C T4蛋白不同表達患者的生存函數圖

3 討論

在我國每年大約有25萬人新確診為食管癌，食管癌因此越來越受到人們的關注和研究[4]。食管癌的組織學分型包括鱗狀細胞癌、腺癌和未分化癌。其中以鱗狀細胞癌最為多見，未分化癌雖較少見但惡性程度最高，以腺癌最為少見。食管癌的病因包括食物中亞硝酸鹽刺激、身體的創傷和炎癥、環境的污染及食品的污染等[5]。近年來越來越多的研究顯示吸煙、飲酒也是引起食管癌的常見原因[6]，患者類型呈男性多于女性，且40歲以上男性是高發人群。由于食管癌早期癥狀不明顯，不易被發現，所以在臨床中患者一旦確診為食管癌往往已是中晚期，已失去最佳治療時機，手術效果并不理想，復發率非常高，使食管癌患者術后5年存活率往往不足10%[7]。故食管癌早期發現早期治療是非常重要的步驟，但是由于目前常用腫瘤標志物對食管癌缺乏特異性及敏感性，導致食管癌的早期發現陷入困難[8]。因此尋找新的對食管癌有特異性和敏感性的腫瘤標志物、了解食管癌生物特點將有利于食管癌的早期發現和有利于探尋新的生物治療靶點，為提高食管癌患者的生存時間和生活質量帶來巨大的影響[9]。

在自然界中，生物所表現出獨特的形狀都是由于基因轉錄和翻譯的結果。轉錄和翻譯可以使基因控制蛋白質合成，毫無誤差的完成基因的表達，整個過程中任何一點細微偏差，都將導致不可預知的缺陷或疾病[10]。真核生物轉錄過程中有多重蛋白質因子協助參與，它是多基因協同作用的復雜過程。轉錄因子定位于細胞核中，不僅參與機體器官及血管生成，還對細胞凋亡起到調控作用，更可對癌基因、抑癌基因及細胞凋亡的相關分子進行調節，從始至終干預細胞生長發育，最終導致腫瘤的發生及轉移，所以，針對單基因的治療不能夠有效地抑制腫瘤的生長。相關研究表明，腫瘤組織一般具有以下的表型特征：具有向正常組織侵襲和轉移的能力；可持續性促進腫瘤血管生成；復制潛力有限性；可程序性逃避細胞凋亡；對生長抑制信號不敏感性；呈自給自足性生長。因此說，食管癌發病的分子機制也與很多因素、很多基因的改變相關，其中包括人乳頭瘤狀病毒、細胞周期調控異常、抑癌基因丟失或失活、角蛋白及原癌基因的激活。目前，國內外多對P53、P21、Rb、P16等抑癌基因的失活以及 cyclinD1、H-ras、EGF、myc等原癌基因的激活從而導致患者食管癌發病進行研究。目前，對于食管癌腫瘤干細胞的研究比較少，已有的研究在細胞水平探討了SOX-2及OCT等干細胞因子在促進食管癌細胞增殖、分化或者凋亡等病理過程中的作用，認為高表達的干細胞因子是促進癌細胞持續性病變的核心因素，但關于組織水平的研究較少，同時本次研究在探討組織水平相關分子變化的同時，揭示了其與患者遠期臨床預后的關系。SXO2和OCT4基因是維持胚胎干細胞（ESC）特性的核心物質，是胚胎干細胞分化發育成為各種功能細胞不可缺少的影響因子，并且目前已經證實，兩者在多種腫瘤發生發展中起到了重要作用[11]。SXO2與OCT4能夠相互結合，形成一個復合體，這個復合體可以以一種高度序列特異性的方式與靶基因進行結合，控制轉錄表達。本研究運用免疫細胞化學的方法檢測SOX2蛋白、OCT4蛋白表達情況，并分析其表達與臨床預后的關系。結果發現食管癌中的SOX2蛋白、OCT4蛋白陽性表達率均高于癌旁組織，并且食管癌組中的SOX2蛋白、OCT4蛋白在低分化、淋巴結轉移患者中呈高表達。食管癌患者出院后的隨訪中發現，食管癌組中的SOX2蛋白陽性表達患者的3年隨訪中位生存期低于陰性患者，OCT4蛋白陽性表達患者的中位生存時間低于陰性患者。縱觀筆者的研究可以得出SXO2和OCT4基因在食管癌干細胞生物學特性維持及腫瘤轉移中有重要的作用，進一步深入研究SXO2和OCT4基因與食管癌發生發展的關系，將有助于了解食管癌的發生及復發機制，具有一定的臨床意義，以期為食管癌的早期發現早期治療做出貢獻。

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（張蕾 編輯）

Expressions of OCT4 and SOX2 in esophageal squamous cell carcinoma and their relationships with clinical prognosis

Hui Zhang,Shun-jun Zhou,Wen-cong Hu
(The Second People's Hospital of Panzhihua City,Panzhihua,Sichuan 617068,China)

ObjectiveTo investigate the expressions of stem cell transcription factor Sry related HMG box 2(SOX2)and eight dimer binding transcription factor 4 (OCT4)in esophageal squamous cell carcinoma and their relationships with clinical characteristics and prognosis.MethodsThe expression levels of SOX2 and OCT4 proteins were detected by immunohistochemical SP method in 77 cases of esophageal squamous cell carcinoma(esophageal cancer)tissues and 40 cases of paracancerous tissues(adjacent tissues),and their correlations with the clinical features and prognosis of the patients were analyzed.ResultsThe positive expression rates of SOX2 protein and OCT4 protein in the esophageal cancer tissues(63.64%and 77.92%respectively)were significantly higher than those in the adjacent tissues(17.50%and 15.00%respectively,P＜0.05).SOX2 protein and OCT4 protein were highly expressed in the esophageal cancer tissues of the patients with poorly-differentiated cancer and lymph node metastasis(P＜0.05).In the patients with positive expression of SOX2 protein in the esophageal carcinoma tissues,the median survival time during the three-year follow-up was 24 months,which was significantly shorter than that(30 months)of the SOX2 negative patients(χ2=4.072,P=0.044).The median survival time of the patients with positive OCT4 protein expression(21 months)was significantly shorter than that(33 months)of the OCT4 negative patients(χ2=4.880,P=0.037).ConclusionsSOX2 and OCT4 proteins are highly expressed in esophageal cancer,and correlated with the degree of differentiation,metastasis and prognosis.

Sry related HMG box 2;eight dimer binding transcription factor 4;esophageal squamous cell carcinoma;expression;prognosis

R735.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.13.011

1005-8982（2017）13-0058-05

2016-11-28