白細胞介素17單核苷酸多態性及血漿水平與慢性丙型肝炎感染的相關性研究

陳興壯，紀海容

（海南省三亞市中醫院 檢驗科，海南 三亞 572000）

白細胞介素17單核苷酸多態性及血漿水平與慢性丙型肝炎感染的相關性研究

陳興壯，紀海容

（海南省三亞市中醫院 檢驗科，海南 三亞 572000）

目的探討白細胞介素17（IL-17）單核苷酸多態性及血漿水平與慢性丙型肝炎感染的相關性。方法將200例慢性丙型肝炎患者作為觀察組，150例體檢健康者作為對照組。采用TaqMan檢測系統提取檢測IL-17 SNPS基因組DNA；采用Elisa檢測法測定IL-17水平。對比兩組研究對象IL-17 rs8193036及rs2275913位點等位基因及基因型分布；對比兩組研究對象IL-17多態性與HCV基因型的關系；對比兩組研究對象IL-17水平。結果觀察組IL-17 rs8193036位點等位基因C、T分布，IL-17 rs2275913位點等位基因A、G分布多于對照組，差異無統計學意義（P＞0.05）。觀察組IL-17 rs8193036位點CC、CT及TT基因型分布，RS2275913基因型AA、AG及GG分布多于對照組，差異無統計學意義（P＞0.05）。觀察組患者IL-17水平（98.73±28.65）高于對照組（70.27±18.53），差異有統計學意義（P＜0.05）。結論IL-17水平的升高可能是慢性丙型肝炎感染的因素之一。

白細胞介素17；血漿水平；慢性丙型肝炎

慢性丙型肝炎（chronic hepatiits C，CHC）是一種由丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）引起的疾病，該病具有傳染性和易于發展為慢性疾病的特點[1]。據2011年世界衛生組織統計，該病在全世界的患者總數高達1.3億～1.7億人，且該病每年的病死人數超過3 500萬人[2]。目前，慢性丙型肝炎的研究機制探討尚不清楚。就現存研究范圍來講，對該病的機制研究主要集中在白細胞介素28B（IL-28B）上，對白細胞介素 17（Interleukin-17，IL-17）與該病關系的報道較少。米寅等[3]在對IL-28B基因多態性與丙型肝炎易感性的關系中指出，中國人群IL-28B rs8099917的基因多態性在一定程度上影響著丙型肝炎的發生。叢瑞等[4]在研究中指出，IL-28B對我國丙型肝炎患者的自發清除影響不顯著。與此同時，南月敏等[5]在研究中指出，目前關于IL-17與CHC患者感染的機制研究十分不清楚。因此本研究旨在探索IL-17單核苷酸多態性及血漿水平與CHC感染的相關性，為日后CHC機制探索提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取海南省三亞市中醫院2012年4月-2016年4月收治的CHC患者200例作為觀察組。其中，男性121例，女性79例，年齡21～82歲，平均（36.2±0.7）歲。同時選取150例體檢健康者作為對照組。其中，男性78例，女性72例，年齡23～76歲，平均（34.5±1.2）歲。兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 納入標準

所有患者符合①②③中的1項，且同時符合④⑤項。①感染CHC病毒超過6個月；②發病時間不明確，既往無肝炎病史，但通過肝組織病理檢查確定為慢性肝炎者；③患者癥狀體征及實驗室檢查、影像學檢查結果可確診為丙型肝炎患者；④所有患者血清抗HCV抗體及HCV-RNA檢測結果顯示為陽性，且HCV RNA定量檢測不超過15 IU/ml；⑤所有患者均未接受過干擾素聯合抗病毒藥物治療[6]。

1.3 排除標準

①患者合并其他類型肝炎者；②患者合并人類免疫缺陷病毒感染；③患者同時伴有惡性腫瘤等嚴重疾病者；④患者伴有嚴重心腦系統疾病及其他血液系統疾病者；⑤患者伴有精神意識障礙者；⑥患者為妊娠期或哺乳期婦女。

1.4 試劑來源及各指標檢測方法

抗 HCV抗體、HCV RNA、HCV基因型、IL-17 SNPS檢測及IL-17水平測定：抗HCV（上海生物工程技術有限公司），酶聯免疫吸附法（Elisa）；HCV RNA（上海羅氏診斷有限公司），COBAS TaqMan系統；IL-17 SNPS基因組DNA定量分析（美國Thermo公司），NanoDrop 2 000C紫外分光光度儀；IL-17 SNPS檢測提取基因組DNA（美國Applied Biosystems公司），TaqMan檢測系統；IL-17水平測定（美國RapidBiocab公司），Elisa。

以上所有指標檢測完全按照產品說明書進行操作。HCV基因分型參照高英堂等[7]在HCV基因分型芯片的研制和臨床應用中的HCV基因分型芯片技術檢測。

1.5 觀察指標

對比兩組研究對象IL-17rs8193036及rs2275913位點等位基因及基因型分布；對比兩組研究對象IL-17多態性與HCV基因型的關系；對比兩組研究對象IL-17水平。

1.6 統計學方法

均采用SPSS17.0統計軟件進行數據處理，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以頻數（構成比）表示，組間比較使用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組研究對象I L-17等位基因分布

觀察組IL-17 rs8193036位點等位基因C、T分布，IL-17 rs2275913位點等位基因A、G分布多于對照組，差異無統計學意義。見表1。

2.2 兩組研究對象I L-17基因型分布

觀察組IL-17 rs8193036位點CC、CT及TT基因型分布，rs2275913基因型AA、AG及GG分布多于對照組，差異不具有統計學意義。見表2。

2.3 I L-17多態性與H C V基因型的關系

觀察組200例患者全部進行HCV基因型檢測。其中HCV基因I型290例、II型102例、III型4例、IV型4例。HCV基因I型IL-17 rs8193036 T位點及rs2275913 A位點基因分布多于II型，差異不具有統計學意義。HCV基因I型IL-17 rs8193036 C位點及rs2275913 G位點基因分布少于II型，差異不具有統計學意義（見表3）。HCV基因I型IL-17 rs8193036 CC、CT分布及rs2275913 AA分布少于II型，差異無統計學意義。HCV基因I型IL-17 rs8193036 TT分布及rs2275913AG、GG分布多于II型，差異無統計學意義。見表4。

表2 兩組研究對象I L-17基因型分布 例

表3 觀察組I L-17等位基因分布與H C V基因型的關系例（%）

表4 觀察組I L-17基因型分布與H C V基因型的關系 例（%）

2.4 兩組的I L-17水平比較

觀察組IL-17水平高于對照組，差異有統計學意義。見表5。

表5 兩組I L-17水平比較 （±s）

表5 兩組I L-17水平比較 （±s）

組別IL-17水平觀察組（n=200） 98.73±28.65對照組（n=150） 70.27±18.53 t值 10.613 P值 0.000

3 討論

CHC是指由不同病因所引起的肝臟壞死和炎癥，其病程一般均超過6個月[8]。該病的主要發生原因為HCV感染、嗜酒及長期服用肝毒性藥物。CHC的發展過程呈波動型或持續進行型[9]。若治療不當往往可導致肝硬化和肝細胞癌的發生。HCV侵襲人體后所發生的反應機制比較復雜，根據目前研究報道認為丙型肝炎的發生機制與細胞免疫功能異常有關[10]。

本研究在探討IL-17 rs8193036及rs2275913位點等位基因中發現，觀察組IL-17 rs8193036位點等位基因C、T分布及rs2275913位點等位基因A、G分布與對照組差異無統計學意義。同時在IL-17基因型分布比較中得出：觀察組患者IL-17 rs8193036位點CC、CT及TT基因型分布，rs2275913基因型AA、AG及GG分布與對照組差異無統計學意義。這表明IL-17 SNPS與CHC感染無關。在IL-17多態性與HCV基因型關系的探討中得出，HCV基因 I型 IL-17rs8193036C、T位點及rs2275913 A、G位點基因分布與II型差異無統計學意義，HCV 基因 I型 IL-17 rs8193036 CC、CT、TT 分布及rs2275913 AA、AG、GG分布與II型無差異。這表明IL-17多態性與HAV基因型無關。以上全部結果可能受到所選觀察對象種族及例數偏差的影響。該試驗所選觀察對象均為黃種人，并不具有全球人群代表性。同時在樣本例數的確定上受到病源獲取及病源配合的限制，未達到大樣本試驗。因此該部分的結論尚需進一步加以確定。在對比兩組研究對象血漿IL-17水平中得出，CHC患者的IL-17水平高于健康人群組成的對照組。這表明IL-17水平升高可能是感染HCV的重要原因之一。IL-17通過調節人體固有免疫能力及獲得性免疫反應作用于肝臟疾病的進展過程中[11-13]。IL-17的細胞因子對人體的作用具有雙重性。當機體處于急性炎癥狀態時，IL-17可迅速分泌，進而與外來危害物質形成對抗，保護機體不受外源有害物質危害。但是當機體處于其他原因而導致慢性炎癥發生時，IL-17又會參與到慢性疾病的發展過程中，從而與機體免疫保護功能形成對抗[14]。同時，HCV侵襲人體的過程中往往導致CHC的發生[15]。因此IL-17可能是CHC病毒感染的因素之一。

綜上所述，IL-17水平的升高可能是機體CHC感染的因素之一。但其單核苷酸多態性對CHC患者的影響無明確關系，需進一步進行研究。

[1]許敏,施海燕,蔡衛平,等.丙型病毒性肝炎患者流行及治療現狀調查[J].中華實驗和臨床病毒學雜志,2011,25(2):135-136.

[2]Word Health Organization.Avilable from:http://www.Who.Int/mediacentre/factsheets/fs164/zh/.index.html.

[3]米寅,高英堂,焦曉磊,等.IL-28B基因多態性與丙型肝炎易感性的關系[J].世界華人消化雜志,2013,21(2):182-187.

[4]叢瑞,佟小非,劉三都,等.白細胞介素28B(IL-28B)基因多態性與丙型肝炎病毒(HCV)感染者自發清除的相關性[J].首都醫科大學學報,2012,33(3):326-329.

[5]南月敏,張玉果,孔令波,等.白細胞介素17基因多態性及血漿水平與慢性丙型肝炎病毒感染的關系[J].中華肝臟病雜志,2013,21(6):425-428.

[6]中華醫學會肝病學分會,中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會.丙型肝炎防治指南[J].中華肝臟病雜志,2004,12(4):194-198.

[7]高英堂,陳瑞陽,宋文芹,等.丙型肝炎病毒基因分型芯片的研制和臨床應用[J].中華檢驗醫學雜志,2004,27(10):690-693.

[8]穆彩琴,胡蕾蘋,張璐,等.慢性丙型病毒性肝炎抗病毒治療研究進展[J].中華實驗和臨床病毒學雜志,2013,27(4):310-313.

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（張西倩 編輯）

Correlations of IL-17 single nucleotide polymorphisms and plasma level with chronic hepatitis C infection

Xing-zhuang Chen,Hai-rong Ji
(Clinical Laboratory,Sanya Hospital of Traditional Chinese Medicine,Sanya,Hainan 572000,China)

ObjectiveTo investigate the association between interleukin-17 single nucleotide polymorphisms(SNPs)and plasma levels and chronic hepatitis C infection.MethodsIn this study,200 patients of chronic hepatitis C were included in observation group,150 cases of healthy subjects were enrolled into control group.TaqMan detection system was used to extract genomic DNA for detection of IL-17 SNPs.ELISA was applied to detect IL-17 level.The IL-17 level was compared between the two groups.The alleles and genotype distribution of IL-17 rs8193036 and rs2275913 loci were compared between the two groups.The relationships of IL-17 polymorphisms with the HCV genotypes were analyzed in the two groups.ResultsThe distribution of alleles C and T of rs8193036 locus and alleles A and G of rs2275913 locus inIL-17gene in the observation group was more than that in the control group,but the differences were not statistically significant(P＞0.05).The distribution of CC,CT and TT genotypes of rs8193036 locus and AA,AG and GG genotypes of rs2275913 locus ofIL-17gene in the observation group was more than that in the control group with significant differences(P＞0.05).The level of IL-17 in the observation group(98.73± 28.65)was higher than that in the control group(70.27±18.53),the difference was statistically significant(P＜0.05).ConclusionsElevated IL-17 level may be one of the factors of chronic hepatitis C infection.

IL-17;plasma level;chronic C hepatitis

R512.63

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.13.014

1005-8982（2017）13-0070-04

2016-12-08