Twist和血管內皮生長因子在非小細胞肺癌組織中的表達及其與臨床病理特征及預后的關系

卓 越 梁 冬

(農墾三亞醫院呼吸科，海南 三亞 572000)

Twist和血管內皮生長因子在非小細胞肺癌組織中的表達及其與臨床病理特征及預后的關系

卓 越 梁 冬

(農墾三亞醫院呼吸科，海南 三亞 572000)

目的探討Twist和血管內皮生長因子(VEGF)蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其與臨床病理特征、患者預后的關系。方法選取經手術切除的非小細胞肺癌患者共76例和癌旁組織為對照，采用免疫組織化學法檢測Twist和VEGF，分析Twist、VEGF與非小細胞肺癌的臨床病理特征、預后的關系。結果Twist和VEGF在非小細胞肺癌中陽性表達率(77.63%和80.26%)明顯高于癌旁組織(27.63%和25.00%)(P<0.05)；非小細胞肺癌中Twist和VEGF的陽性表達與患者的淋巴結轉移相關(P<0.05)；Twist和VEGF陽性表達患者的無病生存率(71.9%和71.7%)低于陰性表達患者(78.9%和81.3%)，但差異無統計學意義(P>0.05)。結論非小細胞肺癌患者標本中出現Twist和VEGF陽性表達可能易發生淋巴結轉移，且陽性表達患者預后較差。

Twist；血管內皮生長因子；非小細胞肺癌；無病生存

非小細胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常見的類型，發病率約占肺癌80%〔1～3〕。腫瘤細胞的轉移和復發侵襲是目前影響肺癌預后不良的重要因素〔4〕。Twist是具有堿性螺旋-環-螺旋(BHLH)結構轉錄因子的成員之一，是上皮-間質轉變過程中的關鍵因子，對腫瘤細胞的凋亡有重要影響，是腫瘤侵襲和轉移的關鍵〔5～10〕。血管內皮生長因子(VEGF)是重要的血管生成促進因子，研究證明VEGF在NSCLC腫瘤組織中的陽性表達率較癌旁組織高〔11，12〕。孫景洲等〔13〕研究顯示VEGF對促進和培養腫瘤細胞的生長有重要作用。本研究觀察Twist和VEGF在NSCLC中的表達及其臨床病理特征和預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取農墾三亞醫院2011年1月至2012年12月經手術切除的NSCLC患者共76例。標本經中性甲醛溶液固定、石蠟包埋制成4 μm厚度切片。男45例，女31例，年齡45～80〔平均(53.53±9.72)〕歲。選取76例配對癌旁組織作為對照組。納入標準：①術前未經過化療及放療；②經過病理學確診為NSCLC〔14〕；③臨床資料完整；④簽署知情同意書及獲得醫院倫理委員會批準。排除：①無明確病理診斷；②合并心、肝、腎和造血系統疾?。虎廴焉锲诤途窦膊』颊?。

1.2試劑和儀器 Twist鼠抗人單克隆抗體、VEGF鼠抗人單克隆抗體(北京中杉金橋生物技術有限公司)，濃度均為1∶50；免疫組化染色劑(深圳中洪博元生物技術有限公司)；磷酸鹽緩沖液(PBS，Thermo Fisher Scientific)；二氨基聯苯胺(DAB)顯色液(北京華越洋生物科技有限公司)。石蠟切片機、烤片機(沈陽譽德電子儀器有限公司)；壓力鍋(日本SANYO公司)；電泳儀(上海伯楷安生物科技有限公司)。

1.3實驗方法 ①免疫組化：標本經二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后進行抗原修復，經過高溫、滅活細胞內過氧化物酶，經PBS沖洗，5 min/次，共3次，經室溫37℃孵育25～30 min，滴加鼠抗人單克隆抗體Twist、鼠抗人單克隆抗體VEGF，保溫盒內4℃過夜，PBS沖洗；②顯色：DAB顯色，按照說明書上嚴格進行，標本經蘇木素復染核；③封片：標本經梯度乙醇脫水，二甲苯透明后用中性樹膠封片。

1.4染色結果判定 細胞核或胞質中出現黃色或棕褐色顆粒為陽性表達，以5個高倍視野(400倍)檢測1 000個腫瘤細胞，陽性細胞比例評分：陽性細胞計數<5%計0分，計數5%～25%計1分，計數26%～50%計2分，計數51%～75%計為3分；>75%計4分；染色強度：細胞中無著色計為0分，淡棕或淡黃色為1分，棕黃色為2分，深棕色為3分。將染色強度和陽性細胞比例積分相乘，<4分者為陰性，≥4分者為陽性。

1.5隨訪方式 以電話或門診的方式對76例患者進行隨訪，無病生存期(DFS)從手術日至隨訪截止(2014年12月)。將腫瘤復發、轉移及死亡列為事件發生。

1.6觀測指標 比較Twist和VEGF的陽性表達率在NSCLC和癌旁組織中的表達差異，分析Twist與VEGF表達與NSCLC患者臨床病理特征的關系。統計檢查后1年的DFS。

1.7統計學方法 采用SPSS17.00軟件進行χ2檢驗，Spea-rman相關分析，Kaplan-Meier生存曲線分析。

2 結 果

2.1Twist、VEGF在NSCLC組織和癌旁組織的表達 Twist與VEGF蛋白定位于NSCLC細胞的細胞質中，呈現棕黃色顆粒。Twist在NSCLC中陽性表達為59例(77.63%)，VEGF在NSCLC陽性表達為61例(80.26%)。兩者陽性表達率均高于癌旁組織〔21例(27.63%)和19例(25.00%)，χ2=38.106,P=0.000;χ2=46.550,P=0.000〕，見圖1。

圖1 VEGF及Twist在NSCLC中陽性表達(DAB，×100)

2.2Twist、VEGF陰性表達與NSCLC臨床病理特征的關系 Twist和VEGF陽性表達與淋巴結轉移相關(P<0.05)，與患者年齡、性別、腫瘤大小、病理類型、分化程度及TNM分期無明顯相關性(P>0.05)。見表1。

2.3NSCLC組織中Twist、VEGF陽性表達相關性 Twist和VEGF在NSCLC中陽性表達呈正相關(r=0.894，P=0.000)。

2.4Twist、VEGF表達與NSCLC預后的相關性 見圖2、圖3。

表1 Twist、VEGF陽性表達與NSCLC臨床病理特征的關系〔n(%)〕

圖2 Twist表達差異患者的無病生存率

76例NSCLC患者隨訪時間為3～36(中位20)個月。Kaplan-Meier生存曲線結果顯示Twist呈現陽性表達和陰性表達患者隨訪期間無病生存率分別為71.9%和78.9%，二者無統計學差異(P=0.205)；VEGF陽性表達及陰性表達患者無病生存率分別為71.7%和81.3%，二者無統計學差異(P=0.162)。

圖3 VEGF表達差異患者的無病生存率

3 討 論

研究表明〔15〕，腫瘤細胞在長期缺氧情況刺激下，HIF-1α增高從而促使調控血管新生，促使細胞發生上皮間質轉化等途徑適應缺氧，從而促進腫瘤的生長和轉移。腫瘤細胞獲得惡性表型的機制是缺氧的環境下HIF-1α高表達促進細胞分泌VEGF促使血管生成的同時，通過上調Twist促使細胞發生上皮間質轉變〔16〕。由此可見，Twist、VEGF在NSCLC組織中的轉移、侵襲中起著重要作用。本研究顯示Twist、VEGF在NSCLC組織中的陽性表達呈明顯正相關，與相關研究結果一致〔17〕，Twist和VEGF高表達與NSCLC患者淋巴轉移明顯相關，進一步說明Twist和VEGF的高表達可促進NSCLC患者發生淋巴結轉移。閻紅娥等〔18〕研究顯示Twist和VEGF陽性表達與NSCLC患者分化程度相關，VEGF與淋巴結轉移、TNM分期相關；孫景洲等〔13〕研究結果表明Twist和VEGF陽性表達與淋巴結轉移、浸潤深度呈明顯相關性。VEGF與Twist互相影響表達，從而誘導上皮間質轉變，增加了腫瘤細胞轉移侵襲能力而向血管淋巴管發生轉移。但本文結果中顯示Twist和VEGF與臨床分期無關，猜測原因可能與患者病情的特異性及臨床分期不一致有關〔19〕。

綜上所述，Twist和VEGF在NSCLC癌組織標本中表達較高，Twist和VEGF陽性表達患者出現淋巴結轉移較多，且預后較陰性表達患者差，在患者手術預后治療中應結合兩者的檢測結果對患者進行必要的檢測。

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〔2015-07-08修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

R73

A

1005-9202(2017)18-4558-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.057

2014年三亞市醫療衛生創新項目(No.yw1210)

梁 冬(1973-)，女，主任醫師，博士后，碩士生導師，主要從事呼吸內科疾病研究。

卓 越(1979-)，男，主治醫師，主要從事肺癌臨床研究。