侵襲性葡萄胎患者外周血中TNF、DC、NIH、ET-1、leptin表達情況及其臨床意義

王 蘭，嚴麗梅

侵襲性葡萄胎患者外周血中TNF、DC、NIH、ET-1、leptin表達情況及其臨床意義

王 蘭，嚴麗梅

目的研究侵襲性葡萄胎患者外周血中TNF、DC、NIH、ET-1、leptin表達情況及其表達水平在臨床中的意義。方法選取2013年5月至2016年7月于我院婦產科就診的46例侵襲性葡萄胎患者作為治療組，同期45例健康婦女作為對照組。比較治療組患者化療前后及對照組患者外周血TNF、DC、NIH、ET-1、leptin水平。結果治療組化療前血漿TNF、INH、ET-1、leptin水平明顯高于對照組，血漿DC計數明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。化療后,治療組血漿INH、ET-1、leptin水平明顯低于化療前，但仍顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；血漿DC計數低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。化療后12個月內，有3例患者復發，與對照組比較，未復發組患者的TNF水平、DC計數差異無統計學意義(P>0.05)，而復發組DC計數明顯低于未復發組(P<0.05)，復發組DC計數明顯低于對照組(P<0.05)。DC、INH、ET-1、leptin水平相關性分析發現，侵襲性葡萄胎與DC、INH、ET-1、leptin水平呈正相關(P<0.05)。結論侵襲性葡萄胎化療前后血漿DC、INH、ET-1、leptin水平的檢測對患者病情的評估、預后預測等有重要意義。

侵襲性葡萄胎；化療；腫瘤壞死因子；樹突狀細胞；抑制素；瘦素；內皮素-1

0 引言

侵襲性葡萄胎是指子宮以外或子宮肌層內出現葡萄胎組織。主要在葡萄胎清除后6個月內發生，不規則陰道出血是其主要的臨床表現。約1%～5%的部分性葡萄胎和18%～29%的完全性葡萄胎會進展為妊娠滋養細胞腫瘤(Gestational trophoblastic neoplasia,GTN)。作為一種多肽細胞因子，腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor，TNF)是由單核-巨噬細胞產生的，在多種疾病的病理生理過程中均發揮重要的作用。樹突狀細胞(Dendritic cell，DC)與腫瘤發生發展密切相關，是體內已知的專職免疫抗原提呈細胞。抑制素(Inhibin，NIH)與滋養細胞浸潤、分化和增殖、胎盤細胞增生密切相關。內皮素-1(Endothelin-1，ET-1)是內源性物質中血管收縮功能最強的一種，是一種縮血管多肽，其由血管內皮細胞分泌[1-2]。瘦素(Leptin)是螺旋細胞因子家族的成員，是脂肪細胞肥胖基因的產物，是最早發現的脂肪因子。研究表明，TNF、DC、NIH、ET-1、leptin與腫瘤療效、預后密切相關[3-5]。本研究對侵襲性葡萄胎患者進行血清TNF、DC、NIH及血漿ET-1、leptin檢測，并分析其表達情況與臨床療效、預后的關系。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究選取2013年5月至2016年7月于我院婦產科就診的46例侵襲性葡萄胎確診患者作為治療組。所有患者均經病史詢問，X線、B超、β-HCG等檢查確診。所有患者均為低危型。同時選擇45例同期健康婦女作為對照組。并排除慢性免疫性疾病、重要臟器(心、肺、肝、腎等)疾患和合并其他腫瘤患者。所有患者血常規及肝、腎功能正常。兩組患者的年齡、產次、身高、體重等指標比較差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

1.2 實驗方法

1.2.1 化療方案 46例侵襲性葡萄胎患者化療方案主要采用單藥化療為主，放線菌素D，500 μg/d，1個療程為5 d，療程間隔為9 d；或氟尿嘧啶28～30 mg/(kg·d),1個療程為8～10 d，療程間隔為12～14 d。如骨髓抑制出現Ⅱ度以上時，則皮下注射3～5 μg/kg的粒細胞集落刺激因子(Granulocyte colony stimulating factor，G-CSF)直至WBC≥10×109/L，患者血清HCG<2.9 U/L則繼續鞏固治療1～3個療程后停止化療。如單藥化療出現耐藥者，則給予聯合方案化療或更換另一種單藥方案。

1.2.2 檢測方法和測定時間 測定時間：研究者均在化療前和化療全部療程后進行測定，復發患者在復發時測定。TNF測定：采用放射免疫分析法進行TNF測定。外周血DC計數：采空腹清晨靜脈外周血3 mL分離DC，加3 mL Ficoll液入每份血標本，第2層血細胞的收集在血標本2 000 r/min離心后，加DHK液入血標本后反復離心10 min，速度1 000 r/min，WBC純化后，標本加入RPMI-1640液至2 mL，再將不同梯度濃度的Percoll液離心25 min，離心速度1 700 r/min，取35%～45%之間層，用DHK反復稀釋、離心，將細胞濃度調整為2×106/mL，培養箱中培養36 h后，收集細胞，細胞沉淀物中加入人IgG 10 mg/mL，用PBS沖洗，沖洗后的非黏附細胞即為DC，將DC經Panning數次純化后，鏡下計數DC數目，進一步計算血DC計數。血清NIH測定：采用ELISA法進行檢測，由深圳晶美生物技術有限公司提供試劑，按說明書操作。血漿ET-1、leptin測定：采用放射免疫法進行檢測，由北方免疫試劑研究所提供試劑，按說明書操作。隨訪情況:對所有患者采用電話及門診隨訪的方式隨訪至2016年12月。

2 結果

2.1 治療結果 46例侵襲性葡萄胎患者中有41例患者單藥治療有效，5例患者更換另一種單藥化療有效，3例患者復發。

2.2 兩組患者化療前后血清各項指標比較 化療前治療組血清TNF、INH及血漿ET-1、leptin水平明顯高于對照組(P<0.05)；血漿DC計數明顯低于對照組(P<0.05)。化療后INH、ET-1、leptin水平明顯低于化療前，但仍顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，化療后血漿DC計數低于對照組(P<0.05)。見表2。

2.3 化療后6個月TNF水平和DC計數比較 化療后6個月，有3例患者出現復發，與對照組比較，未復發組患者的TNF水平、DC計數差異無統計學意義(P>0.05)。復發組DC計數明顯低于未復發組和對照組(P<0.05)。見表3。

表1 兩組一般資料比較

表2 兩組化療前后血清TNF、DC、INH，血漿ET-1和leptin水平比較

注：*與對照組比較，P<0.05，#與化療前比較，P<0.05

表3 化療后6個月TNF水平和DC計數比較

2.4 相關性分析 侵襲性葡萄胎患者化療前后進行DC、INH、ET-1、leptin水平相關性分析，結果呈正相關(r=0.568 1、0.685 5、0.623 8，P<0.05)。

3 討論

抗腫瘤中細胞免疫起了非常重要的作用，腫瘤細胞的發生發展與細胞免疫應答觸發階段低下有關[3]。有效的抗腫瘤免疫主要通過誘導T輔助細胞(Th1)的反應進行。DCs是體內最強的抗原呈遞細胞，與腫瘤的關系密切。人體腫瘤微環境中，DCs的數量、功能與腫瘤的預后呈正相關，可刺激特定的腫瘤相關抗原的免疫反應[4]。本研究結果表明，侵襲性葡萄胎患者化療前及復發后血中DC水平低于對照組，提示侵襲性葡萄胎患者體內監控腫瘤的免疫功能低下[5]，且此類患者易出現化療耐受或腫瘤復發[6]。本研究結果顯示，化療后血DC計數較化療前增多，說明化療可恢復一定的機體監控免疫功能，且能殺滅腫瘤細胞。

TNF是一種抗腫瘤壞死因子，參與機體免疫病理損傷。本研究發現，患者血清TNF水平化療前升高，化療后降低，表明TNF參與了滋養細胞腫瘤的發生發展，而化療清除和殺滅腫瘤細胞，使腫瘤因素刺激體內血清中的單核-巨噬細胞產生的TNF明顯下降，保持整個化療期間的低水平狀態[7]。

本研究結果表明，侵襲性葡萄胎患者血清INH水平在化療前明顯高于對照組，化療后明顯降低，但高于對照組。這可能是因為INH主要由滋養層中的滋養細胞合成，滋養細胞腫瘤中滋養細胞過度增生，從而使INH合成明顯增加。正常人體內INH是由卵巢顆粒細胞產生。多項研究提示INH與腫瘤發生發展密切相關。因此，INH是監測滋養細胞腫瘤的良好指標。 本研究發現，化療前后侵襲性葡萄胎患者血清ET-1水平明顯高于對照組，且化療后血清ET-1水平明顯低于化療前。這可能與ET-1病理狀態下大量產生釋放有關。研究發現，ET-1蛋白水平在多種惡性腫瘤中升高，其具有促進血管生成及細胞增殖、浸潤的作用。一項關于卵巢癌的研究顯示，ET-1可以增強卵巢癌的侵襲性和轉移[8]。化療前患者血清ET-1升高符合滋養細胞腫瘤是一種具有豐富血管及強侵襲性的腫瘤的特點，ET-1在其侵襲和轉移的過程中可能發揮了重要的作用。而治療結束后ET-1水平明顯降低，也與腫瘤受到控制相關，說明血清ET-1水平可作為病情監控的指標[9]。而治療后ET-1水平仍明顯高于正常人，可能是由于患者治療結束后，體內病灶仍未完全消失所致。

leptin在生物體中具有廣泛的生物學功能，除了在動物體肥胖與消瘦過程中起作用外，還與腫瘤的發生和發展密切相關。本研究結果顯示，血漿leptin水平在化療前的侵襲性葡萄胎患者中顯著高于對照組。這可能與其在腫瘤組織中促進細胞增殖與分化、增加細胞侵襲性、調節機體免疫反應及促進血管形成等功能密切相關。leptin在乳腺癌和胃癌患者血漿內水平升高[10-11]。本研究結果表明，化療后leptin雖然顯著降低，但仍高于對照組。這可能是由于治療結束時患者體內病灶未完全消失及免疫功能未完全恢復。leptin可能與滋養細胞腫瘤的發生發展密切相關。動態觀察侵襲性葡萄胎患者血漿leptin水平，可監控疾病的變化及轉歸，具有較高的臨床價值。

本研究中相關性分析發現，侵襲性葡萄胎患者血漿DC、INH、ET-1、leptin水平呈顯著正相關。可能的原因是腫瘤患者免疫功能低下，體內INH、ET-1、leptin水平均對免疫系統有調節作用。因此，體內多種因素改變并影響免疫系統正常工作可能是腫瘤發生發展的重要原因。

綜上所述，協同監測侵襲性葡萄胎患者血漿DC、INH、ET-1、TNF和leptin水平，有助于對病情進行評估及預后預測。

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ExpressionofTNF,DC,NIH,ET-1andleptininperipheralbloodofpatientswithinvasivehydatidiformmoleanditsclinicalsignificance

WANG Lan,YAN Li-mei

(Department of Gynecology & Obstetrics,Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

ObjectiveTo study the expression of TNF,DC,NIH,ET-1 and leptin in the peripheral blood of invasive hydatidiform mole patients and its clinical significance.MethodsForty-six patients with invasive hydatidiform mole treated in our hospital from May 2013 to July 2016 were selected as the treatment group,and forty-five healthy women of the same period as control group.The levels of TNF,DC,NIH,ET-1 and leptin in peripheral blood of patients before and after chemotherapy were compared between the two groups.ResultsBefore treatment,the serum levels of TNF,INH,plasma ET-1 and leptin in treatment group were significantly higher than those in control group (P<0.05),and the plasma DC count was significantly lower than that of control group,the difference being statistically significant (P<0.05).Plasma INH,ET-1 and leptin levels were significantly lower after chemotherapy than before chemotherapy,but still significantly higher than control group,and the difference was statistically significant (P<0.05);plasma DC counts after chemotherapy were still lower than that of control group,and the difference was statistically significant (P<0.05).Within 12 months after chemotherapy,3 patients relapsed.Compared with control group,TNF level and DC count of no-relapse patients showed no significant difference (P>0.05),and the count of DC of recurrence group was significantly lower than that of non-recurrence group (P<0.05),DC count of the recurrence group significantly lower than control group (P<0.05).The correlation analysis of DC,INH,ET-1 and leptin showed that invasive hydatidiform mole was positively related to DC,INH,ET-1 and leptin levels (P<0.05).ConclusionDetection of plasma DC,INH,ET-1 and leptin levels in invasive hydatidiform mole before and after chemotherapy is important for the evaluation of disease and prognosis.

Invasive hydatidiform mole;Chemotherapy;Tumor necrosis factor;Dendritic cells;Statin; Leptin;Endothelin-1

2017-03-24

中國醫科大學附屬盛京醫院婦產科，沈陽 110004

國家自然科學基金(81602304)

10.14053/j.cnki.ppcr.201709009