房顫患者射頻消融術前后血漿miR-150表達水平的變化

李冰,盧慧

(大連醫科大學附屬第一醫院，遼寧大連116011)

房顫患者射頻消融術前后血漿miR-150表達水平的變化

李冰,盧慧

(大連醫科大學附屬第一醫院，遼寧大連116011)

目的探討射頻消融術前后血漿miR-150表達水平的變化。方法檢測60例不同類型房顫患者(房顫組，其中陣發性、持續性和永久性房顫患者分別為26、19和15例)左心房內徑、左室射血分數、腦鈉尿肽(BNP)、超敏C-反應蛋白(hs-CRP)、D-二聚體水平，不同類型房顫各觀察指標的差異；應用實時熒光定量PCR技術檢測20例健康體檢者(對照組)以及不同類型房顫患者射頻消融術前后血漿miR-150表達水平。結果術前不同類型房顫患者左心房內徑、左室射血分數、BNP、hs-CRP、D-二聚體水平差異有統計學意義(P均<0.05)。對照組血漿miR-150相對表達量為1.00±0.00，房顫組射頻消融術前血漿miR-150相對表達量為0.35±0.06，與對照組比較，房顫組術前血漿miR-150相對表達量下降(P<0.05)。術前陣發性房顫、持續性房顫和永久性房顫血漿miR-150相對表達量分別為0.53±0.08、0.24±0.07和0.19±0.04，術后相對表達量分別為1.53±0.14、1.67±0.21和0.51±0.13，與術前比較，相同類型房顫射頻消融術后血漿miR-150相對表達量均表達上升(P均<0.05)。結論血漿miR-150可能參與了房顫發病機制的調控并與房顫病情發展密切相關，可作為房顫診斷、治療和預后判斷的輔助指標。

心房顫動；miRNA-150；射頻消融術

心房顫動簡稱房顫，是臨床上最常見的心律失常之一，發病率隨年齡的增長而逐漸增高[1]。Haissaguerre等[2]通過肺靜脈節段性消融的手段治療房顫并獲得了重大突破。但是射頻消融術后房顫復發仍是治療的最大困擾，對于房顫根治始終沒有徹底有效的方法，主要是由于其發病機制還不清楚。某些遺傳因子能夠增加房顫發生的易感性，尤其是miRNA的異常表達是房顫發生易感的一個關鍵因素。目前已發現多種miRNA與心血管疾病相關，它們在房顫發生與維持的過程中發揮著重要作用[3]。這些miRNAs在不同程度上參與心房的電重構和結構重構，是房顫發生與發展中重要的調控因子[4]。因此，我們就射頻消融術前后患者血漿miR-150表達水平的變化進行了研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年3月～2016年1月在我院行射頻消融術的60例心房顫動患者(房顫組)，男34例、女26例，年齡(64.55±6.34)歲，其中陣發性、持續性和永久性房顫患者分別為26、19和15例。房顫組患者均有常規心電圖或24 h動態心電圖支持房顫診斷。排除標準：年齡>80歲，甲狀腺功能亢進,糖尿病,血壓控制不良者,左心室功能減低(左室射血分數<40%)，嚴重冠狀動脈疾病,肝、腎功能障礙，急慢性感染性疾病，心肌結構性病變，伴有惡性腫瘤。本研究服用β受體阻滯劑、血管緊張素轉換酶抑制劑、血管緊張素受體抑制劑或是他汀類的患者不影響入選。選擇同期我院體檢中心的健康體檢者20例作為對照組，男11例、女9例，年齡(63.78±5.35)歲；均無明顯循環系統、呼吸系統、消化系統、生殖泌尿系統疾病，其年齡、性別與房顫組比較無統計學差異(P均>0.05)。本研究涉及的被測試者都已告知了研究目的，并簽署了知情同意書。

1.2 血液標本采集及存儲 房顫患者行射頻消融術前抽取外周靜脈血3 mL，對照組同期體檢抽取外周靜脈血3 mL，分別置于EDTA抗凝管中，4 h內分離血漿，1 500 r/min離心15 min，吸取上清液放于經高壓過的EP管中，儲存在-80 ℃冰箱備用。房顫患者射頻消融術后復轉為竇性心律，術后一個月內無復發。術后一個月按術前同樣標準采血保存。

1.3 心臟結構功能及生化指標檢測 射頻消融術前，經心臟彩超檢查獲取房顫患者左心房內徑和左室射血分數，經血液生化分析儀獲取房顫組患者血漿腦鈉尿肽(BNP)、超敏C-反應蛋白(hs-CRP)、D-二聚體水平。

1.4 血漿miR-150表達檢測 采用PCR法，對照組健康體檢時檢測血漿miR-150表達，房顫組射頻消融術前及術后一個月檢測血漿miR-150表達。利用德國凱杰公司RNA提取試劑盒提取總RNA,將提取出的RNA在微量核酸測定儀上測定其濃度和純度，挑選出260/280比值在1.8～2.0之間的樣品進行反轉錄實驗，不符合要求的樣品需要重新提取RNA。反轉錄后進行實時熒光定量PCR,反應條件：95 ℃ 6 min;95 ℃ 12 s,62 ℃ 40 s,組內重復3次取平均值，以Ct值表示，miR-150的相對表達量用2-ΔΔCt表示。

2 結果

2.1 術前不同類型房顫心臟結構功能及生化指標比較 術前不同類型房顫患者左心房內徑、左室射血分數、BNP、hs-CRP、D-二聚體水平差異有統計學意義(P均<0.05)。見表1。

表1 術前不同類型房顫心臟結構功能及生化指標比較

2.2 術前房顫組與對照組血漿miR-150表達比較 對照組血漿miR-150相對表達量為1.00±0.00，房顫組射頻消融術前血漿miR-150相對表達量為0.35±0.06,與對照組比較，房顫組術前血漿miR-150相對表達量下降(P<0.05)。

2.3 不同類型房顫射頻消融術前后血漿miR-150表達量比較 術前陣發性房顫、持續性房顫和永久性房顫血漿miR-150相對表達量分別為0.53±0.08、0.24±0.07和0.19±0.04，不同類型房顫患者血漿miR-150相對表達量比較有統計學差異(P<0.05)。術后陣發性房顫、持續性房顫和永久性房顫血漿miR-150相對表達量分別為1.53±0.14、1.67±0.21和0.51±0.13；與術前比較，相同類型房顫射頻消融術后血漿miR-150相對表達量均表達上升(P均<0.05)。

3 討論

目前，在心肌梗死和心衰方面已經有傳統經典的檢測項目出現，如肌鈣蛋白、肌紅蛋白、BNP等[5]；但是在心律失常尤其是房顫的診斷方面，缺少有效的實驗室檢查指標進行聯合輔助診斷。近年來，miRNAs在心律失常方面成為研究的熱點[6]，采用miRNAs作為診斷房顫生物學標志物，靈敏度和特異性更好，既可以單獨使用，也可以與心電圖、心臟超聲聯合用于疾病的臨床診斷、治療監測及預后判斷等，且血漿中循環miRNAs的檢測是一種無創性方法，較檢測組織或細胞中的miRNAs更加方便可行[7]。若能發現血漿中靈敏度和特異性較高的miRNAs用于房顫診斷，將對房顫乃至心律失常疾病的診斷、治療及預后意義重大[8]。近年來，miR-150同房顫發生發展研究逐漸深入[9]，但是miR-150在房顫患者射頻消融術前后外周血中的表達變化鮮有報道。

本研究顯示，不同類型房顫患者左心房內徑、左室射血分數、BNP、hs-CRP、D-二聚體水平差異有統計學意義。隨著年齡的增長，房顫患者病情如不能得到有效控制，心房肌細胞容易發生結構改變，可導致高血壓、左房增大等；如果房顫繼續持續發生，則心房肌細胞將產生不可逆的結構破壞，導致左室功能下降，表現為左室射血分數降低、血漿BNP水平增高等；同時血栓形成等并發癥發生的可能性加大。

miR-150定位于人類19號染色體上，是一個長度為22個核苷酸大小的非編碼單鏈RNA[10]。在淋巴結和脾臟等免疫系統中高表達，此外在腹腔、心肌也有所表達。當前尚未有研究證實 miR-150 水平與房顫之間有直接相互作用的機制，但是有報道稱 miR-150 低水平表達與炎癥、心肌纖維化和電重構等關系密切[11]。本研究顯示，房顫患者射頻消融術前血漿miR-150表達較對照組低，術后同術前比較則表達上升，其機制可能與人體細菌感染和炎癥反應有關。miR-150可影響炎癥反應的發生發展，可在某種程度輔助判斷患者的病情嚴重程度及治療效果。有研究證實[12]，膿毒癥患者外周血白細胞中miR-150水平明顯降低，但靶基因腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-10水平上升，且低水平的miR-150預示炎癥反應嚴重且預后差，而炎癥反應可參與房顫的發生發展。Zheng等[13]發現在房顫患者體內CRP水平明顯升高，一般都可超過正常水平的2倍甚至更多，尤其是在持續性房顫和永久性房顫患者體內，CRP水平升高的更為明顯。

miR-150 還可以參與組織纖維化的過程，主要的作用機制是影響組織中膠原的分泌。心肌纖維化導致心臟的結構重構，從而能夠導致房顫發生。有報道稱在糖尿病大鼠模型中發現miR-150水平降低，而其膠原Ⅰ在心肌細胞以及心肌成纖維細胞中表達水平顯著升高。因此 miR-150 可能通過調控膠原Ⅰ從而參與糖尿病心肌纖維化這一病理進程[14]。David 等相關研究報道稱房顫患者同非房顫患者比較miR-150 表達水平降低，血漿中miR-150 在心肌組織中的表達變化與房顫患者心房重構之間存在著很大相關性，證明循環miRNAs 在心肌基因調控方面發揮著重要的作用。miR-150能夠影響心房細胞纖維化，可作為心房顫動易感的實驗室檢測指標，預測和輔助診斷房顫。該研究同時討論了miR-150與房顫發生強度和持續時間之間的劑量反應關系，顯示持續性房顫患者血漿 miR-150表達水平高于陣發性房顫患者；心房組織miR-150 水平與房顫類型無關，提示了房顫患者血漿中miR-150水平與心臟 miR-150 表達可能無關聯。有研究發現外周血miR-150 低水平表達與房顫關聯顯著，低水平miR-150 表達可能會導致心肌纖維化，增加房顫發生的易感性[15]。本研究中，術后血漿miR-150表達水平同術前比較均有所上升，其中陣發性房顫和持續性房顫上升幅度大于永久性房顫，這可能是由于前者病情較輕，術后炎癥消除較快，心臟重構在某種程度上得到緩解，致使血漿miR-150上升較快。

綜上，房顫患者射頻消融術前后血漿miR-150表達變化說明其與房顫發生發展關系十分密切。因此檢測血漿miR-150的表達情況和動態變化作為房顫診斷的輔助指標。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.33.021

R541.7+5

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盧慧(E-mail:luhuiwork@163.com)

2017-01-12)