阿司匹林磷脂復合物的制備及其表征

賀智勇，吳朝花，嚴俊麗，李海志，沈祥春，陶玲#

（1.貴州醫科大學藥學院，貴陽550004；2.貴州省普通高等學校天然藥物藥理與成藥性評價重點實驗室，貴陽 550025）

阿司匹林磷脂復合物的制備及其表征

賀智勇1，2＊，吳朝花1，2，嚴俊麗1，2，李海志1，2，沈祥春1，2，陶玲1，2#

（1.貴州醫科大學藥學院，貴陽550004；2.貴州省普通高等學校天然藥物藥理與成藥性評價重點實驗室，貴陽 550025）

目的：制備阿司匹林磷脂復合物（ASP-PC）并進行表征。方法：以ASP與PC的復合率為指標，采用單因素試驗篩選ASP-PC的制備方法、PC種類、溶劑種類、反應時間、反應溫度、溶劑體積和藥脂比，并進行驗證。采用紫外分光光度法、熱重分析法、X射線衍射法和傅里葉紅外光譜分析對所制ASP-PC進行表征。結果：采用磁力攪拌-冷凝回流法，藥物-大豆磷脂比為1∶3（mol/mol），溶劑為四氫呋喃（50 mL），58℃下反應3 h，所制ASP-PC的平均復合率為83.52%（RSD＝1.16%，n＝3）。與ASP、ASP和PC的物理混合物比較，紫外光譜顯示ASP-PC沒有出現新的吸收峰；熱重分析、X射線衍射分析和傅里葉紅外光譜分析顯示ASP-PC中的ASP與PC發生了相互作用，且ASP-PC在0～300℃范圍內質量變化較小。結論：成功制得ASP-PC，其中ASP與PC復合成功，但仍有微量ASP以晶體形式存在。

阿司匹林；磷脂復合物；制備工藝；光譜學性質

ABSTRACTOBJECTIVE：To prepare aspirin phospholipid complex（ASP-PC）and conduct the characterization.METHODS：Using the combination rate of ASP and PC as index，single factor test was used to screen the preparation method of ASP-PC，PC type，solvent type，reaction time，reaction temperature，solvent volume and drug-lipid ratio.The verification test was conducted.UV spectrophotometry，Thermogravimetric analysis，X-ray diffraction and Fourier transform infrared spectroscopy were used for the characterization of ASP-PC.RESULTS：Magnetic stirring-condensing reflux method was adopted，drug-soybean phospholipids ratio was 1 ∶3（mol/mol），solvent was tetrahydrofuran，reacting for 3 h under 58 ℃.The average combination rate of prepared ASP-PC was 83.52%（RSD＝1.16%，n＝3）.Compared with ASP，physical mixture of ASP and PC，UV spectrum showed that ASP-PC had no new absorption peak.Thermogravimetric analysis，X-ray diffraction and Fourier transform infrared spectroscopy showed the ASP and PC in ASP-PC were interacted；and ASP-PC changed little in quality within 0-300 ℃.CONCLUSIONS：ASP-PC can be successfully prepared，in which，ASP and PC were combined successfully；while there are still trace amounts of ASP in the form of crystals.

KEYWORDSAspirin；Phospholipid complex；Preparation technology；Spectroscopic properties

阿司匹林（Asprin，ASP）又名乙酰水楊酸，在干燥空氣中穩定，遇潮會緩慢水解為水楊酸和醋酸，微溶于水；傳統用于解熱鎮痛、抗炎抗風濕疾病，數年來已廣泛用于抑制血小板聚集，成為心血管疾病的重要基礎治療藥物[1]。另外，其在抑制動脈粥樣硬化、抗腫瘤、防治心肌纖維化[2]等方面的臨床用途也不斷得到擴展。但ASP在抑制環氧酶（COX）活性從而發揮抑制血小板聚集效果的同時，間接導致胃黏膜上皮脫落增加并超過更新速度，使胃黏液減少，引起胃黏膜損傷或加重潰瘍的程度。此外，ASP水溶性差、生物利用度低、胃腸道藥物殘留量高，其酸性直接致胃黏膜損傷，可透過胃腸黏膜上皮脂蛋白膜層，破壞脂蛋白膜的保護作用，使胃酸可逆地彌散到組織中損傷細胞，致毛細血管破損而出血，是導致患者停藥的主要原因[3-4]。提高ASP的生物利用度，可減少藥物在胃腸道的殘留量，減輕藥物對胃腸道的直接刺激作用，對于提高患者依從性、維持心腦血管疾病患者的抗凝治療具有重要意義。

磷脂（Phospholipid，PC）復合物是指藥物與PC以一定的配比關系結合而成的復合物。PC主要成分為磷脂酰膽堿，由于其兩親性的特性而成為藥物遞送系統領域的一種特殊載體[5-6]，可以改善藥物的溶解度和藥物的釋放速率。PC復合物和胃腸液之間具有較低的界面張力，可以促進藥物透膜轉運，提高藥物較低的膜滲透率[7]，從而改善口服藥物的滲透和吸收[8]，提高藥物的生物利用度，減少藥品不良反應，甚至起到一定的損傷修復作用等。因此，本研究旨在篩選具有較高復合率的ASP-PC復合物（簡稱ASP-PC）的制備工藝并進行表征，以期在ASP-PC基礎上，為制備溶解性能改善、生物利用度提高、胃腸道副作用減輕的阿司匹林新遞送系統奠定基礎。

1 材料

1.1 儀器

D/Max-2200型全自動X射線衍射儀（日本理學電機公司）；Nicolet 6700型傅里葉變換紅外分析儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）；Q50型熱重分析儀（美國Waters公司）；UV-5800PC型紫外分光光度（UV）計（上海元析儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

ASP原料藥[阿拉丁試劑（上海）有限公司，批號：D1316056，純度：99%]；注射用大豆PC（批號：20140702，磷脂酰膽堿含量：≥90%；批號：20140703，磷脂酰膽堿含量：≥80%）和注射用蛋黃PC（批號：20150101，磷脂酰膽堿含量：≥80%）均購自上海太偉藥業有限公司；四氫呋喃（天津市科密歐化學試劑有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 ASP-PC的制備及復合率的測定

ASP和PC按照一定比例溶于適量的有機溶劑中，一定溫度條件下攪拌反應一定時間后，減壓回收有機溶劑；加入適量石油醚，充分溶解后，經0.22μm微孔濾膜過濾；濾液回收石油醚，真空干燥得到ASP-PC，－20℃冷凍保存。收集濾膜上殘余沉淀，干燥12 h并稱質量，得到未復合的ASP的量，計算復合率。復合率＝（ma－mb）/ma×100%，式中，ma為ASP的初始投藥量，mb為未復合ASP的量。

2.2 單因素試驗篩選處方工藝

2.2.1 制備方法 根據文獻[9]以及預試驗結果，設定ASP與PC比例為1∶3（mol/mol）、四氫呋喃50 mL，考察不同制備方法（室溫1 000 r/min磁力攪拌12、24 h；冰浴150 W超聲0.5、1 h；58℃下冷凝回流，1 000 r/min磁力攪拌2、3 h）對ASP-PC復合率的影響。不同制備方法對ASP-PC復合率的影響結果見表1。

表1 不同制備方法對ASP-PC復合率的影響Tab 1 Effects of different preparation methods on the combination ratio ofASP-PC

由表1可知，采用磁力攪拌-冷凝回流法，溫度為58℃，反應時間為3 h時，所制ASP-PC復合率最高。

2.2.2 PC種類 按“2.2.1”項下條件制備ASP-PC，考察不同種類PC（磷脂酰膽堿含量≥80%的大豆PC、磷脂酰膽堿含量≥90%的大豆PC和磷脂酰膽堿含量≥80%的蛋黃PC）對ASP-PC復合率的影響。結果顯示，所制ASP-PC的復合率分別為54.56%、83.56%、54.20%，由此確定PC為磷脂酰膽堿含量≥90%的大豆PC。

2.2.3 反應溶劑 根據“2.2.1”“2.2.2”項下條件制備ASP-PC，考察不同反應溶劑（四氫呋喃、乙酸乙酯、甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、丙酮）對ASP-PC復合率的影響。結果顯示，所制ASP-PC的復合率分別為83.56%、58.03%、31.39%、14.18%、8.49%、61.90%，由此確定反應溶劑為四氫呋喃。

2.2.4 反應時間 根據“2.2.1”～“2.2.3”項下條件制備ASP-PC，考察不同反應時間（1、2、3、3.5、4 h）對ASP-PC復合率的影響。結果顯示，所制ASP-PC的復合率分別為47.53%、57.32%、83.56%、74.87%、65.28%，由此確定反應時間為3 h。

2.2.5 反應溫度 根據“2.2.1”～“2.2.4”項下條件制備ASP-PC，考察不同反應溫度（30、40、50、58 ℃）對ASP-PC復合率的影響。結果顯示，所制ASP-PC的復合率分別為39.73%、41.81%、57.46%、83.56%，由此確定反應溫度為58℃。

2.2.6 溶劑體積 根據“2.2.1”～“2.2.5”項下條件制備ASP-PC，考察不同溶劑體積（30、50、70、90 mL）對ASP-PC復合率的影響。結果顯示，所制ASP-PC的復合率分別為50.0%、83.56%、59.13%、54.70%，由此確定溶劑體積為50 mL。

2.2.7 ASP與PC比例 根據“2.2.1”～“2.2.6”項下條件制備ASP-PC，考察ASP與PC不同比例（1∶1、1∶2、1∶3、1∶3.5、1∶4，mol/mol）對ASP-PC復合率的影響。結果顯示，所制ASP-PC的復合率分別為12.52%、46.87%、83.56%、84.26%、88.83%，綜合考慮確定ASP與PC比例為1∶3。

2.3 驗證試驗

根據“2.2”項下篩選得到的處方工藝：采用磁力攪拌-冷凝回流法，ASP與PC比例為1∶3（mol/mol），四氫呋喃50 mL，58℃條件下反應3 h，重復3次，制備3批次的ASP-PC。計算得其平均復合率為83.52%，RSD為1.16%（n＝3），說明該工藝穩定、重復性好。

2.4 ASP-PC的光譜學分析

2.4.1 UV分析 將ASP、PC、ASP與PC物理混合物和ASP-PC分別溶于適量無水乙醇中，以無水乙醇為空白對照，在190～400 nm波長范圍內進行UV掃描。結果顯示，與ASP和物理混合物比較，ASP-PC沒有出現新的吸收峰，但吸光度有所減小。這表明ASP-PC中ASP的發色基團結構未發生變化，但可能由于PC的極性鍵與ASP發生了相互作用，導致其吸光度減小。光譜圖見圖1。

2.4.2 熱重分析 采用熱重分析儀對ASP、PC、ASP與PC物理混合物和ASP-PC進行熱重分析，溫度范圍0～300℃。結果顯示，ASP、PC和物理混合物在整個溫度范圍內質量均有所下降，但ASP-PC的質量變化較小，表明ASP與PC極性端結合使得ASP-PC的熔點較原來的化合物有所上升，使ASP穩定性增大。熱重分析圖見圖2。

圖1 紫外吸收光譜圖Fig 1 UV absorbance spectra

圖2 熱重分析圖Fig 2 Thermogravimetric analysis spectra

2.4.3 X射線衍射分析 在室溫下，采用X射線衍射對ASP、PC、ASP與PC的物理混合物和ASP-PC的晶體狀態進行分析。工作電壓40 kV，測試條件Cu靶，工作電流40 mA，掃描范圍0°～80°，掃描速度4°/min。結果顯示，ASP以結晶形式存在；PC表現出無定形的特征；物理混合物表現出ASP結晶的衍射峰，但強度較ASP顯著減弱；ASP-PC中ASP結晶的衍射峰均消失，僅在7.454°、15.721°附近有結晶峰存在，這可能是ASP與PC的極性端之間的相互作用，使部分晶體特征被抑制所致。X射線衍射分析圖見圖3。

圖3 X射線衍射分析圖Fig 3 X-ray diffraction analysis

2.4.4 傅里葉紅外光譜分析 采用傅里葉紅外光譜儀對ASP、PC、ASP與PC的物理混合物和ASP-PC進行分析，以KBr為參比制劑進行紅外光譜分析，波長范圍400～4 000 cm－1。結果顯示，ASP-PC保留了PC的1 733 cm－1波長處的特征吸收峰，但其寬度以及峰的強度發生了一定的變化；另外，不再保持—COOH基團的特征峰，其吸收峰的形狀和寬度也發生了變化，這可能是ASP當中的某個官能團與PC分子的某些部位發生了相互作用所致。傅里葉紅外光譜圖見圖4。

圖4 傅里葉紅外光譜圖Fig 4 Fourier transform infrared spectra

3 討論

根據Giraud MN等[10]研究表明，通過將ASP與二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC）制備成復合物，可以明顯增加ASP在胃腸道內的吸收，但關于ASP-PC的制備技術的研究尚未見報道。

由于DPPC目前市場價位過高，不利于后期大生產的應用，因此筆者選用了大豆PC和蛋黃PC進行PC種類的考察，結果表明，磷脂酰膽堿含量≥90%的大豆PC所制的ASP-PC復合率最高。反應溶劑考察結果表明，介電常數較小的四氫呋喃中所制的ASP-PC復合率較高，可能是由于溶劑的介電常數大，所產生的反向電勢也大，相應降低了反應物間的作用力，不利于電荷相反的離子間的化合反應[9]。隨著反應時間的增加，所制的ASP-PC復合率在一定范圍內增加，但是當反應時間超過3.0 h后復合率反而有下降的趨勢，這可能是由于反應時間過長、PC不穩定引起的。盡管隨著反應溫度的增加，復合率呈上升的趨勢，但是PC在大于60℃時易氧化變性，因此反應溫度確定為58℃。溶劑體積過大時，ASP與PC的碰撞機會減少，而當溶劑體積過小時，PC濃度過高可能會出現飽和，兩種情況都會降低復合率，綜合考慮確定溶劑體積為50 mL。隨著PC加入量的增加，復合率相應增加，當藥脂比增加到1∶3.5和1∶4時復合率雖然較高，但是與1∶3時比較增加幅度很小。考慮到PC過多會使ASP-PC干燥變慢且成本增加，因此選擇1∶3作為ASP和PC的最佳比例。

通過UV、紅外光譜、X射線衍射和熱重分析可知，ASP和PC的物理混合物只是ASP與PC簡單地加和；而ASP-PC中ASP的羧基特征吸收峰基本消失，且沒有新的化學鍵形成，從而推測ASP羧基上的氧可能與PC的極性端通過偶極-偶極作用力而形成了PC復合物。

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Preparation and Characterization of Aspirin Phospholipid Complex

HE Zhiyong1，2，WU Chaohua1，2，YAN Junli1，2，LI Haizhi1，2，SHEN Xiangchun1，2，TAO Ling1，2
（1.School of Pharmacy，Guiyang Medical University，Guiyang 550004，China；2.Key Laboratory of Natural Medicinal Pharmacology and Drugability in Guizhou Colleges and Universities，Guiyang 550025，China）

R943

A

1001-0408（2017）25-3562-04

2017-02-04

2017-04-05）

（編輯：鄒麗娟）

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.25.28

貴州省普通高等教育科技創新團隊（No.黔教合人才團隊字〔2014〕31）；貴陽市科技計劃項目（No.筑科合同〔20141001〕12號）

＊碩士研究生。研究方向：藥物制劑新技術和新劑型。電話：0851-8841610。E-mail：254964684@qq.com

#通信作者：教授，碩士生導師。研究方向：藥物制劑新技術和新劑型。電話：0851-88416160。E-mail：649511230@qq.com