卵巢子宮內膜異位囊腫患者外周血Th17、Treg比例變化及意義

吳德慧

(青海紅十字醫院，西寧810000)

卵巢子宮內膜異位囊腫患者外周血Th17、Treg比例變化及意義

吳德慧

(青海紅十字醫院，西寧810000)

目的探討輔助性T細胞17(Th17)、調節性T細胞(Treg)比例及其調控基因在卵巢子宮內膜異位囊腫發生、發展中的作用。方法選擇卵巢子宮內膜異位囊腫患者90例作為觀察組，因單純輸卵管原因導致的不孕癥患者90例作為對照組。采用流式細胞術檢測兩組外周血Th17、Treg占CD4+T細胞比例，計算Th17/Treg。采用qRT-PCR法檢測觀察組異位內膜、在位內膜及對照組在位內膜組織孤獨核受體γ(ROR-γ) mRNA、叉頭狀轉錄因子3(FoxP3)mRNA。采用ELISA法檢測兩組血清白細胞介素17(IL-17)、IL-22、IL-10、轉化生長因子β(TGF-β)。結果觀察組外周血Th17占CD4+T細胞比例、Th17/Treg均高于對照組，Treg占CD4+T細胞比例低于對照組(P均<0.05)。觀察組異位內膜ROR-γ mRNA相對表達量低于觀察組在位內膜和對照組在位內膜(P均<0.05)，觀察組在位內膜ROR-γ mRNA相對表達量低于對照組在位內膜(P<0.05)；觀察組異位內膜FoxP3 mRNA相對表達量高于觀察組在位內膜和對照組在位內膜(P均<0.05)，觀察組在位內膜FoxP3 mRNA相對表達量高于對照組在位內膜(P<0.05)。觀察組血清IL-17、IL-22水平均高于對照組，IL-10、TGF-β水平均低于對照組(P均<0.05)。結論卵巢子宮內膜異位囊腫患者外周血Th17/Treg比例失衡；Th17/Treg比例失衡可能通過調節其下游轉錄因子及細胞因子表達而促進卵巢子宮內膜異位囊腫的發生、發展。

子宮內膜異位癥；卵巢子宮內膜異位囊腫；輔助性T細胞17；調節性T細胞

卵巢子宮內膜異位囊腫是子宮內膜異位癥的常見類型，育齡婦女高發，發病率為7%～12%[1]。目前，關于卵巢子宮內膜異位囊腫的發病機制仍未明確，一般認為是子宮內膜細胞通過輸卵管進入盆腔后定植于卵巢而引起的，其中免疫應答機制在這一過程中發揮了重要作用[2,3]。輔助性T細胞17(Th17)和調節性T細胞(Treg)是兩種重要的CD4+T淋巴細胞。近年來研究發現，Th17、 Treg可能參與卵巢子宮內膜異位囊腫的發生與發展[4]，但具體的免疫調節機制仍不清楚。孤獨核受體γ(ROR-γ)、叉頭狀轉錄因子3(FoxP3)是Th17、Treg調控的下游轉錄因子。IL-17、IL-22、IL-10、轉化生長因子β(TGF-β)是Th17、Treg分泌的細胞因子。本研究探討血清Th17、Treg比例及其調控基因在卵巢子宮內膜異位囊腫發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年11月～2016年11月青海紅十字醫院收治的卵巢子宮內膜異位囊腫患者90例作為觀察組，年齡21～40(31.24±3.52)歲。選擇同期因單純輸卵管原因導致的不孕癥患者90例為對照組，年齡22～41(32.13±3.62)歲。均為中國漢族育齡女性，平素月經規律，月經周期27～35 d。排除心肝腎等臟器功能不全、糖尿病、慢性高血壓疾病、自身免疫性疾病、感染以及近期用藥史者，以及子宮肌瘤、腺肌病者。術前3個月沒有接受促性腺激素釋放激素激動劑或雌孕激素治療。觀察組經病理檢查證實為卵巢子宮內膜異位囊腫，取其異位內膜、在位內膜組織；對照組經病理檢查排除子宮內膜異位癥，取其在位內膜組織；均液氮保存。本研究通過我院醫學倫理委員會批準，患者及其家屬均知情同意。

1.2 外周血Th17、Treg細胞比例檢測 采用流式細胞術。兩組于月經干凈后3～7 d采集空腹外周靜脈血5 mL，取肝素抗凝全血100 μL，即刻進行流式細胞學檢查。首先向抗凝管中加入FITC 標記的CD3抗體、APC-CY7標記的CD8抗體、PE-CY7標記的CD25抗體、PEMAB標記的CD127抗體各10 μL，恒溫孵育20 min；固定后破膜，應用PBS緩沖液洗滌細胞，置于流式細胞儀中檢測外周血Th17、Treg占CD4+T細胞比例(分別記為Th17%、Treg%)，并計算Th17/Treg。

1.3 子宮內膜組織ROR-γ、FoxP3 mRNA表達檢測 采用qRT-PCR法。取觀察組異位內膜、在位內膜及對照組在位內膜組織，采用qRT-PCR法檢測ROR-γ、FoxP3 mRNA表達。引物序列參考文獻[5]。先用TRIzol法提取組織中總RNA，按照試劑盒操作說明進行逆轉錄，然后進行qRT-PCR反應。反應條件：95 ℃預變性30 s，95 ℃變性5 s，60 ℃退火34 s，進行40個循環。以GAPDH作為內參，采用2-ΔΔCt法計算ROR-γ、FoxP3 mRNA相對表達量。

1.4 血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β檢測 采用ELISA法。取兩組1.2檢測后的剩余外周血，經3 500 r/min離心10 min，取上清液。采用ELISA法檢測血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平，試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2 結果

2.1 兩組外周血Th17%、Treg%及Th17/Treg比較 見表1。

表1 兩組外周血Th17%、Treg%及Th17/Treg比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 兩組子宮內膜組織ROR-γ、FoxP3 mRNA表達比較 見表2。

表2 觀察組異位內膜、在位內膜及對照組在位內膜ROR-γ、FoxP3 mRNA相對表達量比較

注：與對照組在位內膜比較，*P<0.05，與觀察組在位內膜比較，#P<0.05。

2.3 兩組血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平比較 見表3。

表3 兩組血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

3 討論

在正常女性體內，子宮內膜細胞隨逆流的經血經輸卵管進入盆腔可被機體免疫細胞識別并清除[5]；而在卵巢子宮內膜異位囊腫患者體內，進入盆腔的子宮內膜細胞未被免疫細胞清除，而植入卵巢形成囊腫。Myung等[6]將卵巢子宮內膜異位囊腫的發病分為6個階段：①子宮內膜細胞脫落;②脫落子宮內膜細胞移位至盆腔內；③內膜細胞逃避免疫監視；④內膜細胞黏附;⑤血管生成定植細胞存活；⑥周期性出血，其中免疫因素與卵巢子宮內膜異位囊腫發生有密切關系。

Th17和Treg是兩種重要的CD4+T淋巴細胞，正常情況下機體Th17和Treg存在平衡，當Th17和Treg出現失衡時，可引起一系列免疫反應，引發相應疾病[7]。目前已有研究證實腫瘤、自身免疫疾病、炎癥、感染等均與Th17/Treg失衡有關[8～10]。本研究觀察組Th17%、Th17/Treg高于對照組，Treg%低于對照組，證實卵巢子宮內膜異位囊腫患者體內存在Th17降低和Treg升高。Th17是由Th0細胞分化而成的輔助性T細胞，正常情況下Th17可以分泌IL-17、IL-22等細胞因子，從而發揮免疫調節功能[11]。而Treg則是一種控制體內自身免疫反應性的T細胞亞群，可分泌IL-10、TGF-β，發揮調節免疫反應的功能[12]。本研究觀察組Th17升高，Treg降低，提示卵巢子宮內膜異位囊腫患者存在Th17功能亢進。進一步分析發現，觀察組血清IL-17、IL-22水平顯著高于對照組，IL-10、TGF-β水平顯著低于對照組；其中IL-17、IL-22是Th17的主要效應分子，IL-17可促進T淋巴細胞進一步刺激上皮細胞、成纖維細胞、內皮細胞增殖，刺激巨噬細胞和黏附分子生成[13]。IL-22亦是一種重要的致炎因子，在類風濕關節炎、銀屑病、克羅恩病、強制性脊柱炎中存在IL-22異常升高[14～16]。IL-10、TGF-β是Treg的主要效應分子，可發揮免疫調節和免疫抑制功能。本研究觀察組血清IL-17、IL-22水平升高，IL-10、TGF-β水平降低，是Th17與Treg比例失衡的必然結果。

ROR-γ是Th17調控的重要轉錄因子，可以進一步誘導IL-17分泌并發揮免疫功能[17]。同時研究發現，ROR-γ可以啟動多個信號通路，促進Th17分化，進一步引發炎癥反應[18]。FoxP3是Treg的特異性核轉錄因子，發揮免疫抑制功能[19]。本研究觀察組異位內膜、在位內膜ROR-γ mRNA相對表達量均顯著低于對照組，FoxP3 mRNA相對表達量顯著高于對照組，觀察組異位內膜ROR-γ mRNA相對表達量顯著低于在位內膜，FoxP3 mRNA相對表達量顯著高于在位內膜。提示ROR-γ表達異常升高與FoxP3表達異常降低在卵巢子宮內膜異位囊腫的發生、發展中發揮重要作用。

綜上所述，卵巢子宮內膜異位囊腫患者外周血Th17/Treg比例免疫調節失衡；Th17/Treg比例失衡可能通過調節其下游轉錄因子及細胞因子表達而促進卵巢子宮內膜異位囊腫的發生、發展。

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2017-05-01)