決明子蒽醌苷對兩腎一夾高血壓大鼠腎損傷的保護(hù)作用

陳建雙 王一帆 李莎莎 于海榮

(承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000)

決明子蒽醌苷對兩腎一夾高血壓大鼠腎損傷的保護(hù)作用

陳建雙 王一帆 李莎莎 于海榮

(承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000)

目的觀察決明子蒽醌苷對兩腎一夾高血壓大鼠的降壓及腎損傷保護(hù)作用。方法復(fù)制兩腎一夾高血壓大鼠模型，隨機(jī)分為模型組、0.2、0.4 g/kg決明子蒽醌苷組及佐芬普利(0.01 g/kg)組。另取10只大鼠作為假手術(shù)組。各給藥組大鼠灌胃給藥8 w，每周末檢測大鼠尾動脈收縮壓。給藥后第57天留取24 h尿液，放免法測定尿β2微球蛋白(MA)含量。頸椎脫臼處死大鼠，以大鼠腎小葉間動脈、入球小動脈中膜厚度與管腔直徑比值、腎小球損傷率及尿β2-MA含量反映大鼠腎損傷程度。放免法檢測腎組織內(nèi)腎素、血管緊張素(Ang)Ⅱ及醛固酮含量。結(jié)果決明子蒽醌苷能明顯降低兩腎一夾高血壓大鼠尾動脈收縮壓(P<0.01或P<0.05)；決明子蒽醌苷組，小葉間動脈、入球小動脈中膜厚度與管腔直徑比值、腎小球損傷率及尿β2-MA含量較模型組明顯降低(P<0.01或P<0.05)；決明子蒽醌苷能明顯減弱兩腎一夾高血壓大鼠腎組織內(nèi)腎素、AngⅡ及醛固酮的表達(dá)(P<0.05)。0.4 g/kg決明子蒽醌苷與佐芬普利(0.01 g/kg)無明顯差異(P>0.05)。結(jié)論決明子蒽醌苷對兩腎一夾高血壓大鼠有顯著降壓及腎損傷保護(hù)作用，該作用與其抑制腎素、AngⅡ及醛固酮表達(dá)有關(guān)。

決明子蒽醌苷；兩腎一夾高血壓；腎損傷；β2微球蛋白；腎素；血管緊張素Ⅱ；醛固酮

決明子為豆科植物決明或小決明的干燥成熟種子，味甘、苦、咸、性微寒，具有清肝明目、潤腸通便等功效〔1〕。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)決明子具有明顯的降壓、降脂、保肝、抗衰老及增強(qiáng)免疫功能等作用。決明子含蒽醌、萘并吡咯酮、脂肪酸、氨基酸和微量元素等多種成分。蒽醌苷是決明子主要功效成分之一，含量約占1%〔2〕。研究證明決明子蒽醌苷對丙酸睪丸酮所致高血壓大鼠有明顯的降壓作用〔3〕。目前國內(nèi)外并無決明子蒽醌苷對腎源性高血壓降壓及腎損傷保護(hù)作用的相關(guān)報(bào)道。本文采用乙醇提取法得到?jīng)Q明子蒽醌苷，觀察其對兩腎一夾高血壓大鼠腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。

1 資料與方法

1.1一般資料 清潔級Wistar雄性大鼠12周齡，體重(200±20)g，購自天津山川紅實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK(津)2010-001。

1.2儀器與藥品 BP-6 無創(chuàng)傷血壓測量系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)；BL-420F生物功能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)；Olympus BX51生物顯微鏡(上海儀圓光學(xué)儀器廠)；石蠟兩用切片機(jī)；哺乳動物手術(shù)器械一套；直徑0.25 mm無菌針灸針。決明子(安國市昌達(dá)中藥材飲片有限公司)；水合氯醛(武漢市和盛化工，批號1005412)；注射用青霉素鈉(華北制藥股份有限公司，批號 Y1001328)；佐芬普利(濟(jì)南富創(chuàng)醫(yī)藥科技有限公司)；腎素、血管緊張素(Ang)Ⅱ、醛固酮及β2微球蛋白(MA)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(武漢博士德生物有限公司)。

1.3兩腎一夾高血壓大鼠模型復(fù)制及分組 Wistar大鼠80只，術(shù)前24 h禁食，自由飲水。以10%水合氯醛(3.5 ml/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，大鼠腹部脫毛，消毒皮膚，于劍突下1.5 cm處沿腹正中線切開，于左腎門處游離腎動脈，隨機(jī)取10只作為假手術(shù)組，其余70只在腎動脈下穿入無菌絲線，把直徑為0.25 mm的針灸針與腎動脈血管長軸緊貼平行放置，用無菌絲線結(jié)扎腎動脈和針灸針，然后抽出針灸針，造成單側(cè)腎動脈狹窄〔4〕。術(shù)后3 d每日腹腔注射青霉素鈉預(yù)防感染，并于術(shù)后24 h禁食不禁水，此后自由進(jìn)食和飲水。術(shù)后第4周末測量大鼠尾動脈收縮壓，達(dá)150 mmHg 以上者視為造模成功。將造模成功大鼠50只，隨機(jī)分為模型組，蒽醌苷(0.2、0.4 g/kg)決明子蒽醌苷組及佐芬普利組(0.01 g/kg)，每組10只，各給藥組大鼠1次/d連續(xù)灌胃給藥8 w，給藥容積為10 ml/kg體重，溶劑為生理鹽水。模型組與假手術(shù)組給予等體積生理鹽水。

1.4標(biāo)本采集 各組大鼠用藥后第57天，留取24 h尿液，用于測定尿β2-MA；頸椎脫臼處死后摘取右腎，由腎被膜層向腎門冠狀切開，將腎臟一分為二，取一半用4%甲醛溶液固定，常規(guī)脫水石蠟包埋，置成5 μm的連續(xù)切片，分別行HE和彈力纖維染色。另一半制成腎組織勻漿，測定腎素、AngⅡ及醛固酮含量。

1.5尾動脈壓測量 用藥后每周末采用BP-6無創(chuàng)血壓測量系統(tǒng)檢測大鼠尾動脈收縮壓。

1.6腎組織損傷病理學(xué)觀察 顯微鏡高倍鏡下觀察腎組織切片，利用十字標(biāo)尺，測量小葉間動脈和入球小動脈中膜厚度和管腔直徑，計(jì)算二者比值以反映腎內(nèi)小動脈血管重塑程度。鏡下計(jì)數(shù)病變腎小球(腎小球毛細(xì)血管塌陷、腎小球萎縮、硬化、壞死等)數(shù)目，計(jì)算全組織切片腎小球損傷率〔5〕。

1.7尿β2-MA、腎組織腎素、AngⅡ及醛固酮含量測定 放免法檢測尿β2-MA含量；將腎組織用0.9%生理鹽水配成10%勻漿，低速離心(3 000 r/min)20 min，取上清液放免疫法測定腎素、AngⅡ及醛固酮含量，按試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)應(yīng)用軟件行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1各組尾動脈收縮壓比較 模型組大鼠尾動脈收縮壓較假手術(shù)組明顯升高(P<0.01)，決明子蒽醌苷組大鼠血壓明顯低于模型組，自用藥后第2周末差異顯著(P<0.05或P<0.01)，0.4 g/kg決明子蒽醌苷組與佐芬普利組無明顯差異(P<0.05)，見表1。

2.2各組腎損傷程度比較 模型組大鼠腎組織切片小葉間動脈與入球小動脈中膜厚度與管腔直徑比值、腎小球損傷率及尿β2-MA含量較假手術(shù)組明顯增大(P<0.01)，決明子蒽醌苷組上述各指標(biāo)較模型組明顯減小(P<0.05或P<0.01)，0.4 g/kg決明子蒽醌苷組與佐芬普利組無明顯差異(P<0.05)，見表2。

表1 各組尾動脈收縮壓比較

與模型組比較:1)P<0.05，2)P<0.01;與佐芬普利組比較:3)P<0.05，4)P<0.01

表2 各組大鼠腎損傷程度、腎組織腎素、AngⅡ及醛固酮含量比較

2.3各組大鼠腎組織腎素、AngⅡ及醛固酮比較 模型組大鼠腎組織腎素、AngⅡ及醛固酮含量較假手術(shù)組明顯升高(P<0.01)，決明子蒽醌苷組上述指標(biāo)較模型組明顯減小(P<0.05或P<0.01)，0.4 g/kg決明子蒽醌苷組與佐芬普利組無明顯差異(P<0.05)，見表2。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)中行大鼠左側(cè)腎動脈縮窄術(shù)，造成單側(cè)組織缺血，由于入球小動脈壁牽張感受器所受牽張刺激減弱及腎小球?yàn)V過率降低，流經(jīng)致密斑的小管液中Na+減少均可刺激近球細(xì)胞腎素釋放增多，激活體內(nèi)的腎素-Ang-醛固酮系統(tǒng)。AngⅡ可使體內(nèi)的微血管廣泛收縮，外周阻力增加，導(dǎo)致大鼠血壓升高；AngⅡ作用于腎上腺皮質(zhì)，使其合成釋放的醛固酮增多，醛固酮可促進(jìn)遠(yuǎn)曲小管和集合管鈉、水重吸收，機(jī)體循環(huán)血量增加，進(jìn)一步促進(jìn)血壓的升高。AngⅡ和醛固酮還可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞促生長因子分泌異常，血管壁平滑肌細(xì)胞增生肥大，細(xì)胞外基質(zhì)增多，血管壁增厚，管腔狹窄〔5，6〕，加重腎組織缺血，進(jìn)一步促進(jìn)體內(nèi)腎素-Ang-醛固酮系統(tǒng)的過度激活，由此形成惡性循環(huán)過程。AngⅡ引起的出球小動脈收縮強(qiáng)于入球小動脈，腎小球?yàn)V過分?jǐn)?shù)增大，高濾過，甚至血漿蛋白質(zhì)的濾出，可造成腎小管的重吸收功能受損。尿β2-MA是反映高血壓早期腎小管功能損傷非常敏感的指標(biāo)之一〔7〕。本研究結(jié)果表明決明子蒽醌苷能明顯延緩高血壓腎損傷進(jìn)程，具有一定的腎損傷保護(hù)作用，且該作用與其抑制大鼠體內(nèi)AngⅡ及醛固酮表達(dá)有關(guān)。

1高艷青，劉 俊.決明子的藥理作用及其研究進(jìn)展〔J〕.中國藥業(yè)，2008；17(8)：63.

2劉 斌，鞏鴻霞，肖學(xué)鳳，等.決明子化學(xué)成分及藥理作用研究〔J〕.藥物評價(jià)研究，2010；33(4)：312-5.

3李續(xù)娥，郭寶江，曾 志.決明子蛋白質(zhì)、低聚糖及蒽醌苷降壓作用的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中草藥，2003；34(9)：842-5.

4戴 勇，彭武建，徐卓佳.兩腎一夾腎性高血壓大鼠模型的改進(jìn)〔J〕.實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)與管理，2006；23(2)：60-2.

5韓 萍，景 麗，張建中，等.兩腎一夾型高血壓大鼠腎臟損傷及血管改變動態(tài)觀察〔J〕.寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011；33(2)：115-7.

6王 雙，萬載陽，唐朝克，等.兩腎一夾型高血壓大鼠重塑血管對血管緊張素Ⅱ反應(yīng)變化及其機(jī)制〔J〕.中國動脈硬化雜志，2003；11(6)：501-4.

7楊 平，余宏偉，魏 彤.卡維地洛對原發(fā)性高血壓患者尿微量蛋白及尿β2微球蛋白的影響〔J〕.臨床薈萃，2012;27(11)：987-9.

〔2016-04-13修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

R541.4

A

1005-9202(2017)19-4752-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.026

河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究青年基金項(xiàng)目(No.C2011149)

陳建雙(1978-)，女，碩士，副教授，主要從事中藥藥理研究。