肝細胞癌中性肽鏈內切酶和二肽基肽酶IV表達水平對手術切除術后患者預后的影響

牛福勇，李福榮

肝細胞癌中性肽鏈內切酶和二肽基肽酶IV表達水平對手術切除術后患者預后的影響

牛福勇，李福榮

目的探討肝癌組織中性肽鏈內切酶（NEP）和二肽基肽酶IV（DPPⅣ）表達水平對肝細胞癌（HCC）患者肝癌切除術后預后的影響。方法選擇2008年1月～2013年7月北京第301醫(yī)院肝膽外科行肝癌切除治療的HCC患者42例，選擇同時期檢查的42例肝良性腫瘤患者肝組織作為對照。采用免疫組化法檢測NEP和DPPⅣ。采用 Kaplan-Meier法進行無復發(fā)生存（RFS）曲線和總生存（OS）曲線繪制，采用 Cox比例風險回歸模型進行多因素分析，確定影響RFS和OS的因素。結果NEP和DPPⅣ蛋白均定位于HCC細胞胞漿；HCC組織NEP蛋白陽性率為78.6%（33/42），DPP Ⅳ蛋白陽性率為71.4%（30/42），NEP和PP Ⅳ蛋白雙陽性率為54.8%（23/42），均顯著高于正常組織【2.4%（1/42）、4.8%（2/42）和 0.0%（0/42），P＜0.05】；經(jīng)單因素和多因素分析顯示，腫瘤分化、NEP 表達、DPPⅣ表達、NEP和DPPⅣ共表達、復發(fā)、癌細胞遠處轉移是影響HCC患者RFS和OS的獨立危險因素；生存曲線顯示，HCC組織NEP陽性、DPPⅣ陽性和NEP/DPPⅣ均陽性表達者RFS和OS顯著縮短，預后差。結論NEP和DPPⅣ表達水平是HCC患者預后不良的危險因素。

肝細胞癌；中性肽鏈內切酶；二肽基肽酶IV；免疫組化；預后

作者單位：719000 陜西省榆林市第一醫(yī)院肝膽外科

中性肽鏈內切酶（Neutral endopeptidase，NEP）是存在于細胞膜表面的II型膜蛋白，是含鋅金屬肽酶M13家族中重要一員[1～3]。有研究指出，NEP在不同組織中的表達及活性變化與某些疾病的發(fā)生和預后存在一定的關聯(lián)[4～6]。二肽基肽酶IV（Dipeptidyl peptidase IV，DPPⅣ）是一種膜結合蛋白，其活性酶是一種具有二肽肽酶活性的同源二聚體[7]。有文獻報道，DPPⅣ在甲狀腺癌、乳腺癌和胃癌等的侵襲和轉移中發(fā)揮著重要作用[8，9]。本研究采用免疫組化染色法檢測了HCC組織NEP和DPPⅣ表達水平，以探討其對HCC切除術患者無復發(fā)生存（Recurrence-free survival，RFS） 和總生存（Overall survival，OS）的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2008年1月～2013年12月本作者在北京301醫(yī)院肝膽外科進修期間診治的行手術切除治療的HCC患者42例，男23例，女19例；年齡32～76歲，平均年齡（57.3±18.2）歲。HCC診斷按照世界衛(wèi)生組織《HCC診斷標準》[10]，腫瘤分化參照Edmondson分級標準[11]，腫瘤分期參照美國癌癥聯(lián)合會第七版標準[12]。切除標準符合外科腫瘤完整切除、邊緣未發(fā)現(xiàn)癌組織、局部受侵犯淋巴結清掃的標準，手術邊緣＞1cm。選擇同時期檢查的42例肝良性腫瘤患者作為對照。本研究獲得北京第301醫(yī)院和我院醫(yī)學倫理學委員會批準，所有研究對象簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 采用免疫組化SP法檢測HCC腫瘤組織NEP和DPPⅣ表達（上海通蔚科技有限公司）。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用x2檢驗。采用 Kaplan-Meier法進行無復發(fā)生存曲線和總生存曲線繪制，采用 Cox比例風險回歸模型進行多因素分析，確定影響RFS和OS的因素。檢驗水準為α=0.05，即P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 HCC組織和正常肝組織NEP和DPPⅣ表達情況 癌組織NEP和DPPⅣ蛋白呈棕黃色陽性表達，均定位于HCC細胞胞漿（圖1）。在42例HCC癌組織中，NEP蛋白陽性33例（78.6%），DPPⅣ蛋白陽性30例（71.4%），NEP和PPⅣ蛋白雙陽性23例（54.8%），而在正常肝組織則分別為1例（2.4%、2例（4.8%）和0例（0%，P＜0.05）。

2.2 不同腫瘤特征HCC組織NEP和DPPⅣ表達情況比較 不同腫瘤分化、肝門淋巴結侵犯、癌細胞遠處轉移、復發(fā)組織NEP表達陽性率存在差異（P＜0.05）；腫瘤分化、癌細胞遠處轉移組織DPPⅣ表達陽性率存在差異（P＜0.05）；腫瘤分化、肝門淋巴結侵犯、癌細胞遠處轉移、復發(fā)組織NEP和DPPⅣ表達陽性率存在差異（P＜0.05，表1）。

表1 不同特征癌組織NEP和DPPⅣ表達（%）比較

圖1 HCC組織NEP和DPPⅣ表達情況（SP，200×）a：HCC組織NEP呈強陽性表達；b：HCC組織DPPⅣ呈強陽性表達；c：HCC組織NEP呈弱陽性表達；d：HCC組織DPPⅣ呈弱陽性表達；e：HCC組織NEP呈陰性表達；f：HCC組織DPPⅣ呈陰性表達

2.3 HCC腫瘤組織NEP和DPPⅣ表達與患者預后的關系 42例 HCC患者 1 a、3 a、5 a的 OS和RFS 分別為 57.1%（24/42）和 52.4%（22/42）、42.9%（18/42）和 38.1%（16/42）及 28.6%（12/42）和 23.8%（10/42）。經(jīng)多因素分析，結果顯示腫瘤分化程度、NEP和DPPⅣ表達強度、NEP和DPPⅣ雙表達、復發(fā)和癌細胞遠處轉移是影響HCC患者OS和RFS的危險因素（表2）。生存曲線顯示，HCC組織NEP和DPPⅣ陽性及NEP和DPPⅣ雙陽性患者OS和RFS顯著縮短，與NEP和DPPⅣ陰性的HCC患者比，OS和RFS差異顯著（P＜0.05，圖2）。

圖2 HCC腫瘤組織抗原不同表達患者OS和RFS比較a：NEP高表達與低表達患者OS曲線；b：NEP高表達與低表達患者RFS曲線；c：DPP IV高表達與低表達患者OS曲線；d：DPP IV高表達與低表達患者RFS曲線；e：NEP和DPP IV高表達與低表達患者OS曲線；f：NEP和DPP IV高表達與低表達患者RFS曲線

表2 影響HCC患者預后的多因素分析

3 討論

本組42例HCC患者臨床特征顯示，不同腫瘤分化、肝門淋巴結侵犯、癌細胞遠處轉移、復發(fā)患者癌組織NEP表達陽性率存在差異（P＜0.05），不同腫瘤分化、癌細胞遠處轉移組織DPPⅣ表達陽性率存在差異（P＜0.05），不同腫瘤分化、肝門淋巴結侵犯、癌細胞遠處轉移、復發(fā)組織NEP和DPPⅣ表達陽性率存在差異（P＜0.05）。研究結果顯示，NEP和DPPⅣ蛋白在HCC組織的表達與上述因素相關，或許凸顯出NEP和DPPⅣ陽性表達在腫瘤分子調控及鑒別診斷方面的重要性。

NEP的組織定位及作用底物較為廣泛，該蛋白可通過裂解生物活性肽，間接調節(jié)蛋白質的代謝作用，在細胞生長、分化、增殖和凋亡過程中發(fā)揮重要作用。既往，該蛋白主要用于惡性淋巴瘤和急性白血病等血液系統(tǒng)腫瘤的鑒別及診斷，并在非造血系統(tǒng)腫瘤的診斷方面有一定的指導意義[13，14]。DPPⅣ作為一種重要的基質蛋白降解酶，在腫瘤的侵襲、轉移等過程中發(fā)揮重要作用。先前文獻報道顯示，該蛋白在乳腺癌、甲狀腺癌、前列腺癌、子宮內膜癌均有高表達。已有大量文獻報道NEP或DPPⅣ在腫瘤患者預后方面的預測價值[15]。張發(fā)政等研究結果顯示NEP蛋白在肺癌陽性表達與肺癌的臨床分期、組織分化程度及有無淋巴結轉移有關，是影響患者預后的危險因素[16]。張夢真等研究結果顯示DPPⅣ蛋白高表達預示著卵巢上皮性癌患者預后不良[17]。也有研究提示NEP和DPPⅣ蛋白高表達預示著HCC患者預后不良[15]。NEP同樣存在于消化道上皮表面，如肝內膽管細胞膜表面[18，19]。此外，Kim的研究指出肝硬化患者血清NEP活性與血清膽紅素和堿性磷酸酶等呈正相關，提示檢測NEP對疾病的嚴重程度有提示作用[20]。目前，有關NEP和DPPⅣ蛋白對HCC患者預后價值的報道較少。本研究結果顯示，NEP和DPPⅣ蛋白均定位于HCC細胞胞漿。NEP蛋白在HCC的陽性表達率為78.6%，DPPⅣ蛋白為71.4%，與正常組織NEP和DPPⅣ陽性表達率相比差異顯著（P＜0.05）。研究結果說明NEP和DPPⅣ蛋白在癌組織中高表達。此外，42例HCC患者1 a、3 a、5a的 OS 和 RFS 分別為 57.1%（24/42）和52.4%（22/42）、42.9%（18/42） 和 38.1%（16/42）、28.6%（12/42）和 23.8%（10/42）。研究結果還顯示腫瘤分化、NEP表達、DPPⅣ表達、NEP和DPPⅣ均表達、復發(fā)、癌細胞遠處轉移是影響HCC患者OS和RFS的預后因素。

綜上所述，NEP和DPPⅣ表達水平與HCC患者預后相關，NEP陽性、DPPⅣ陽性和NEP和DPPⅣ均陽性表達HCC患者OS和RFS顯著縮短，預后較差。

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（收稿：2016-10-25）

（本文編輯：陳從新）

Implication of neutral endopeptidase and dipeptidyl peptidaseⅣexpression in hepatocellular carcinoma tissues

Niu Fuyong，LiFurong.DepartmentofHepatobiliary Surgery，F(xiàn)irstHospital，Yulin 719000，Shaanxi Province，China

Objective To investigate the implication of neutral endopeptidase （NEP） and dipeptidyl peptidase（DPP） Ⅳ in hepatocellular carcinoma tissues.Methods Cancerous tissues were obtained from 42 patients with hepatocellular carcinoma （HCC） after hepatectomy，and 42 benign liver tissues at the same time were also obtained for control in the Department of Hepatobiliary Surgery，Beijing 301st Hospital between January 2008andJuly2013.TheexpressionofNEPandDPPⅣincanceroustissuesweredetectedby immunohistochemical staining.Patients were checked-up every 3 months after operation.Kaplan-Meier method was used to draw the recurrence-free survival（RFS） curves and overall survival（OS） curves.Cox proportional hazards regression multivariate analysis was performed to determine the influencing factors of RFS and OS.Results NEP and DPP Ⅳ proteins were both located in the cytoplasm of hepatocellular carcinoma cells；The positive rates of NEP protein，DPP Ⅳ protein and double NEP and DPP Ⅳ protein in patients with hepatocellular carcinoma were 78.6%（33/42），71.4%（30/42） and 54.8%（23/42），respectively，all significantly higher than in normal liver tissues[2.4%（1/42），4.8%（2/42） and 0.0%（0/42），P＜0.05]；Multivariate analysis demonstrated that tumor differentiation，NEP expression，DPP Ⅳ expression，NEP and DPPⅣ co-expression，recurrence and metastasis of cancer were the prognostic factors of RFS and OS in patients with HCC；The survival curves showed that RFS and OS were significantly shortened and the prognosis was poorerin patients with NEP or DPPⅣor both of them positive in cancerous tissues.Conclusion The expression of NEP and DPPⅣmight be the risk factors for the poor prognosis in patients with HCC.

Hepatocellular caicinoma；Neutral endopeptidase；Dipeptidyl peptidase Ⅳ；Immunohistochemical staining；Prognosis

10.3969/j.issn.1672-5069.2017.05.013

牛福勇，男，33歲，大學本科，主治醫(yī)師。主要從事腹腔鏡下膽道疾病和肝癌的治療學研究。E-mail:niufuyong1983@163.com