液相色譜儀的校準與管理維護

吳文熙

摘要：液相色譜儀作為一種高精密儀器，能夠對物質進行有效分離，進而對其進行檢驗、分析和鑒定。在檢測工作中，為保障儀器測量準確度和靈敏度的影響，需要不斷完善其日常維護工作及計量的校準方法。基于此，文章針對液相色譜儀校準項目與管理維護的方法展開探究，供同行參考。

關鍵詞：液相色譜儀；校準；管理維護

液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而后分析鑒定的儀器。液相色譜儀在不同行業和領域中的應用體現出了較多的優勢，其不會對正常質量分析方面的工作產生影響，并且可以以較高的速率完成分析工作，使檢測樣本不同物質分析工作更加到位。然而液相色譜儀波長準確度是液相色譜儀的一項重要的性能指標，因此計量機構有必要對現有的波長準確度檢定方法進行修補。

1.校準項目分析與校準方法分析

1.1分辨力校準分析

在固定好液相色譜儀（如圖1所示）后，要保證儀器的穩定，然后執行儀器自動調諧命令，命令啟動，向儀器內注入調諧液，直至調諧通過后，再打印調諧報告，對報告中3到6個主要離子峰廢半峰寬進行考察，將半峰寬呈現出的最大值作為儀器的分辨力，計為W1/2。△M=Mn測量-Mn理論，其中等式中的Mn測量表示的是第n個粒子在進行3次測量后得出的平均值，計為u；Mn理論表示的是第n個離子的理論值，計為u。

1.2質量范圍校準分析

根據調諧操作的條件，必須按照校準要求注入符合標準的調諧液到儀器中，再進行調諧和校準操作。在規定范圍內的質荷比中，如可以設定為m/z50—2000，在規定范圍內選擇SCAN模式對全范圍記性掃描，通過分辨力和質量準確性來滿足計量性能的要求，并將要求的最低和最高質荷比范圍作為質量范圍。

1.3信噪比校準分析

在調諧后會確定一個最佳參數，這個參數就是校準參數，利用校準參數選擇C18或者性能相同的色譜柱。ESI正離子，在其中注入10皮克的利血平，并啟動SIM或者MRM模式，從中提取m/z=609的特征離子或者m/z=195的子離子，根據等式可以計算出信噪比也就是S/N=H/H噪聲，在這個等式中，H表示的提取離子顯示出的峰高；H噪聲表示的是基線的噪聲。然后，在ESI負離子中注入100皮克的氯霉素，并啟動SIM或MRM模式，從中提取m/z=321的特征離子或者m/z=152的子離子，根據信噪比計算等式計算出ESI正離子的信噪比。

APCI正離子，在其中注入10皮克的利血平，并啟動SIM或MRM模式，從中提取m/z=609的特征離子或者m/z=195的子離子，并帶入到信噪比計算公式中計算出APCI正離子信噪比。

1.4整機定量分析以及定性重復性分析

根據分析，要按照信噪比的校準條件反復進行6次測量，并分別記錄質量色譜圖中對應峰面積及保存時間，并根據下列公式，對峰面積的校準偏差進行計算定量重復，從保存是兩件計算出相對標準偏差計算定性的重復性。計算公式為：RSD=××100%，其中等式中RSD表示的相對標準偏差；xn表示的是第n次后測量峰面積及保存時間；x表示的是6次測量峰面積及保存時間的算術平均值。

2.管理措施與維護措施分析

2.1流動相管理與維護措施分析

一是流動相必須在0.45微米的微孔濾膜中進行2到3次的真空抽濾，再利用超聲儀進行超聲45分鐘到60分鐘，然后才能在流動相進行使用。

二是甲醇等有機溶劑必須保證為色譜純，其中可用堿或酸對流動相的pH值進行調節，但范圍要控制在2-7.5內。其中水必須使用去離子水，使用期限不能超過2天，逾期后要進行重新配制。

三是流動相的瓶口不能用密封帶封死，要保證內外壓力平衡。不能隨便更換流動相的借口，如果棕瓶固定為誰，那么白瓶就要固定為甲醇，流動相的流速要控制在每分鐘3.0mL范圍內。

四是流動相中禁用以下物品：三氯苯、四氫呋喃、氯仿、亞甲基氯、甲苯；而且要慎重使用以下物品：乙醚、丙酮、四氯化碳、異丙醚等，避免這些化學物品腐蝕柱塞密封圈。

五是當流動相性質為緩沖鹽時，緩沖溶液在與有機溶劑發生轉換前要用5甲醇對泵設備記性清洗，防止鹽類物質對機相中結晶的損壞和泵設備組件的損壞。緩沖溶液的濃度要低于每升0.5摩爾，盡量不要超過色譜柱的酸堿性范圍。為了防止腐蝕流路，CI—的濃度要控制在每升0.1摩爾以下。另外，高濃度的緩沖鹽會降低活塞和密封墊的使用壽命，所以在長時間使用高濃度緩沖鹽時，要用10異丙醇溶液對泵設備背面的結晶物質進行沖洗，最后再用0.45微米的異丙醇濾膜進行2到3次反復過濾。

六是當泵壓力超過6000psi上限范圍時，要檢查泵頭和過濾白頭及保護柱芯是否有損壞。

2.2排氣泡管理與維護措施分析

一是快速清洗閥不宜擰的過松，一般擰2圈左右比較適應，過松會導致流動相從清洗閥部位快速通過流進泵頭，從而引起設備報警。

二是在使用快速清洗閥時，不能對幾個通道同時按比例進行排氣泡，要一個一個通道進行，否則會造成設備損壞。

2.3自動進樣器管理與維護分析

在對自動進樣器進行養護時，可以每天按照甲醇：水=1：1的比例配制溶液洗針，并保證在洗針前要檢查一下洗針瓶中是否有50甲醇洗液。

2.4樣品處理分析

一定要保證測定樣品在流動相中呈易溶特質，否非在會結晶造成色譜柱堵塞。最好使用與流動相能夠溶解的樣品，而且樣品或標準溶液在進樣處理前，必須使用0.45微米的濾膜進行過濾，去除其中的微粒雜志物質，樣品中不能含有強堿性、強酸性類物質，但可以利用預處理柱去除其中具有較強極性或存在的不可逆吸附物質。

2.5色譜柱管理與維護分析

使用儀器自帶的色譜柱時，應及時的將換下的色譜柱應物質極性密封。而且用完后要將原來使用的色譜柱安裝好。換色譜柱時必須在有流動相流出的情況下進行，防止空氣進入到色譜柱。而且液相色譜儀的使用時間不宜過長，而且每個泵通道以及整體的流路一定要用甲醇進行沖洗后再保存，防止結晶對儀器造成污染。

2.6檢測器管理與維護分析

如果檢測的紫外或可見燈長期處于打開狀態，那么要保證溶液要劉晶檢測池、若不需要做樣，可以將燈關閉。一般檢測器的登要在有溶液連續流動后的幾分鐘才能打開，否則流動池中會產生氣泡，將無法通過校準。檢測氣的鎢等不要經常進行開關，這樣會降低燈的使用壽命，如果經常使用儀器，可隔幾天進行開關一次。檢測池清洗時要用100異丙醇沖洗整個流路，如果不能進行可以用10或者5的稀硝酸沖洗45分鐘到60分鐘，然后用清水沖洗干凈。

3.結束語

總之，液相色譜儀的科學管理和正確使用維護，是獲得良好色譜分離效果和延長儀器使用壽命的前提和基礎。所以在日常使用中，每位使用人員都要在實踐中不斷總結。既要制定嚴謹科學的檢定校準方法又要盡量滿足客戶的需求，使檢定校準方法向著快捷、實用、科學的方向發展。

參考文獻：

[1]潘曉靜.高效液相儀器的管理與維護研究[J].科技與企業，2015（19）：222-222.

[2]吳少敏，張雅芝，殷博昊.高效液相色譜的使用與維護[J]. 實驗室科學，2017，14（3）：183-186.