大葉桉制劑對燒傷創(chuàng)面細菌的抑制作用

韋曉文，陳曉微，楊雪華，龍燕華，蔣 捷，宋德志，高興新*

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣西 南寧 530021；2.廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室，廣西 南寧 530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院燒傷整形外科，廣西 南寧 530021）

大葉桉制劑對燒傷創(chuàng)面細菌的抑制作用

韋曉文1，陳曉微1，楊雪華1，龍燕華1，蔣 捷1，宋德志2，高興新3*

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣西 南寧 530021；2.廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室，廣西 南寧 530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院燒傷整形外科，廣西 南寧 530021）

目的探討大葉桉制劑對燒傷創(chuàng)面細菌的抑制作用。方法 采用最低抑菌濃度（MIC）和紙片瓊脂擴散法對燒傷創(chuàng)面細菌進行實驗。結(jié)果 紙片瓊脂稀釋法結(jié)果顯示大葉桉對銅綠假單胞菌的抑菌效果表現(xiàn)為3株低敏，構(gòu)成比為75%，1株不敏感，構(gòu)成比為25%；大葉桉對金黃色葡萄球菌抑菌效果表現(xiàn)為1株低敏感，構(gòu)成比為100%。結(jié)論 大葉桉制劑對燒傷創(chuàng)面細菌銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌抑菌效果不明顯。

金黃色葡萄球菌；銅綠假單胞菌；抑制作用

近年來，不合理的廣泛應(yīng)用廣譜抗生素致使燒傷患者的常見的細菌感染的菌種和對抗生素的敏感性發(fā)生了變化，而且耐藥的細菌逐漸的增加，使感染不受控制，導(dǎo)致治療細菌感染越來越困難。[1]

中醫(yī)藥對組織刺激小，無過敏，殺菌力強，對肝腎功能無影響，感染創(chuàng)面植皮不影響植皮成活，并有一定的抗?jié)B血作用[2]。其中以大葉桉比較有代表性。大葉桉性寒味苦，具有消炎止痛、止癢收斂之功效；藥敏試驗具有廣譜抗菌作用，對多種細菌如葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌等均具有較強的抑菌作用，特別對金黃色葡萄球菌極度敏感，有很好的殺菌作用[3]。本研究探討大葉桉對細菌的抑菌作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 植物材料和供試菌種來源

大葉桉枝葉采集于南寧高峰林場，取葉片晾干后做為供試材料。供試菌種由廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供。

1.1.2 主要試劑

牛肉膏-蛋白胨培養(yǎng)基①固體培養(yǎng)基成品。②肉湯培養(yǎng)基成品。

1.2 方法

1.2.1 菌液、大葉桉制劑制備

在無菌條件下，用接種環(huán)刮取菌種接種到無菌肉湯中，放在37°溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。用1000 mL蒸餾水和50 g大葉桉干葉煮沸，制備成45 mL的大葉桉制劑。

1.2.2 細菌計數(shù)

采取平板計數(shù)法。取菌液用0.9%的無菌生理鹽水進行10倍系列稀釋后，取1 mL置90 MM空培養(yǎng)基后，加入12 mL的固體培養(yǎng)基混勻。混勻后放在37°恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。

1.2.3 MIC測定

用二倍稀釋法測MIC。取7支無菌試管，標(biāo)1～7號，分別加入1 mL無菌肉湯培養(yǎng)基。1～7號試管分別加入稀釋1000倍的菌液0.1 mL，混勻后放在37°溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)24 h后，取1～7號試管的0.2 mL混合液分別放入直徑為60 mm的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后，觀察固體培養(yǎng)基有無細菌生長。無細菌生長的最小濃度為細菌的最小抑菌濃度[5]。

1.2.4 K-B紙片擴散法

用無菌棉簽蘸取實驗菌液，均勻的涂抹整個固體培養(yǎng)基，在無菌環(huán)境下取沾有大葉桉制劑的圓濾紙片（直徑為6.0 mm，蘸取制劑10 μL），貼在固體培養(yǎng)基上。在37°溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，用尺子量取抑菌直徑[6]。

2 結(jié) 果

2.1 大葉桉制劑對燒傷創(chuàng)面細菌的MIC

本次實驗主要菌種以銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌為主。在MIC測定中，固體培養(yǎng)基均出現(xiàn)細菌的生長，提示稀釋后濃度的大葉桉對銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌無明顯的抑菌濃度，故后續(xù)實驗棄用。

2.2 采用紙片瓊脂稀釋法（表1）

表1 大葉桉的抑菌敏感度（n，%）

3 討 論

本實驗數(shù)據(jù)顯示大葉桉煎劑對燒傷創(chuàng)面的優(yōu)勢菌種銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌的抑制作用較弱。本作者認為，抑菌效果不明顯可能與培養(yǎng)基，大葉桉制劑的有效成分存在著揮發(fā)性、細菌生物被膜關(guān)系等因素有關(guān)。

有報道稱適宜的培養(yǎng)基、接近中性的藥敏試紙、每毫升1.5億個細菌的濃度是實驗室普通細菌藥敏分析實驗取得最佳結(jié)果的必要條件[7]。培養(yǎng)基的選擇，目前應(yīng)用最多的為M-H 瓊脂培養(yǎng)基，作者使用固體肉湯培養(yǎng)基可能是導(dǎo)致大葉桉煎劑對銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌抑制作用較弱的原因。

作者推測可能大葉桉中的有抑菌作用的成分沸點較低，在煎煮過程中揮發(fā)，有相關(guān)的報道，大葉桉揮發(fā)成分中，碳氫化合物占揮發(fā)油總量的20.83%，含氧化合物占78.24%；而在確認的水溶性成分中，皆為含氧化合物[8]。有可能本實驗采集的大葉桉葉的抑菌活性物質(zhì)的濃度較低，作者將取不同季節(jié)的大葉桉葉做對燒傷創(chuàng)面的優(yōu)勢菌種做抑菌實驗，具體機制有待進一步探索。

抑菌效果不明顯可能與細菌生物膜形成有關(guān)系，細菌生物膜（bacterialbi。film，BF）的產(chǎn)生可能起著重要的作用。目前生物膜引起的微生物耐藥明顯增加，約65%的人類細菌感染與生物膜有關(guān)。傳統(tǒng)抗生素治療對細菌生物被膜引起的感染效果欠佳。迄今為止，如何根治細菌生物被膜引起的感染仍然是臨床上相當(dāng)棘手的問題。本實驗中，針對綠膿假單胞菌和金黃色葡萄球菌的藥敏實驗有著不同的結(jié)果，對同一種細菌不同次實驗的而結(jié)果亦有差異，很有可能是由于實驗用細菌形成生物被膜，導(dǎo)致大葉桉制劑的抑菌作用不明顯，難以形成有效的抑菌環(huán)。細菌生物膜在耐藥形成中都發(fā)揮一定作用，但都不是惟一的，可能是多因素協(xié)同作用所致。目前這方面的研究仍然存在很多問題，還需進一步的探討。

總之，本實驗的實驗結(jié)果顯示大葉桉煎劑對燒傷創(chuàng)面的優(yōu)勢菌銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用不明顯，其具體機制有待進一步研究。

[1] 孫文科.燒傷感染細菌分布及耐藥情況的分析[J].中國醫(yī)藥指南.2013(28):399-400.

[2] 崔文華,劉光亮,李堯賓,張進海.積雪草治療燒傷的止痛、防瘢痕療效觀察[J].中國臨床康復(fù).2002(06):839.

[3] 楊作錦,王巧玲.大葉桉煎劑治療燙傷療效觀察[J].基層醫(yī)學(xué)論壇.2005(08):765-766.

[4] 肖芙蓉,符永健,賈 杰.大葉桉煎劑的毒性研究[J].海南醫(yī)學(xué),2001,12(5):64-65.

[5] 趙 敏,譚鋼文,唐小異,龍靈芝,周 源.十種中藥提取物與抗生素合用對銅綠假單胞菌最小抑菌濃度影響的體外實驗[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版).2011(04):80-83.

[6] 譚 瑤,趙 清,舒為群,陳 浩.K-B紙片擴散法藥敏試驗[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床.2010(20):2290-2291.

[7] 李晉華.對普通細菌藥敏試驗影響因素分析[J].現(xiàn)代診斷與治療.2013(15):3502-3503.

[8] 田玉紅,劉雄民,周永紅,秦榮歡(2006)大葉桉葉揮發(fā)性成分的提取及分析[J].中國藥學(xué)雜志.2006(18):1436-1437.

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ISSN.2095-8242.2017.051.9981.02

本文編輯：趙小龍

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