血漿ADMA和血小板膜糖蛋白在急性腦梗死患者中的表達及關系的研究

邱偉慶

山東省萊州市人民醫院神經內科(萊州261400)

血漿ADMA和血小板膜糖蛋白在急性腦梗死患者中的表達及關系的研究

邱偉慶

山東省萊州市人民醫院神經內科(萊州261400)

目的：分析血漿非對稱二甲基精氨酸(ADMA)及血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R對腦梗死的影響及ADMA、CD62P、FIB-R與腦梗死之間的相互關系。方法：收集急性腦梗死患者30例(腦梗死組)及健康體檢者25例(對照組)，采用高效液相色譜法檢測兩組的血漿ADMA水平，流式細胞術檢測血小板表面活性標記糖蛋白CD62P、FIB-R表達。應用直線相關分析法分析腦梗死組血漿ADMA與中風危險因素及血小板膜糖蛋白表達之間的關系，并探討ADMA對腦梗死的影響。結果:急性腦梗死組血漿ADMA濃度、血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R增高，分別與對照組比較，均有統計學差異(P均<0.05)；膽固醇，高血壓，糖尿病，ADMA與腦梗死發病相關，腦梗死患者ADMA濃度與血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R正相關。結論：血漿ADMA及血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R與腦梗死發病有一定相關性，血漿ADMA濃度增高主要通過影響血小板活化引起腦梗死的發生。

近年來，腦梗死的發病率逐漸增高。在腦梗死發病過程中血小板活化起重要作用，臨床可通過檢測患者血漿血小板膜糖蛋白來觀察血小板活化水平。同時，許多研究表明，腦梗死患者血漿非對稱二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine，ADMA)增高。ADMA可作為心腦血管病獨立的危險因子與病死率預測因子[1]。其競爭性與eNOS特異性相結合，從而減少NO生成[2]，因此，其對NO的合成起非常重要的調節作用[3]。本研究旨在觀察急性腦梗死患者血小板膜糖蛋白和ADMA的表達水平，同時觀察其相互關系，為更好地探索腦梗死的發病機制及治療手段提供進一步依據。

資料和方法

1 一般資料 選擇2016年6月至2017年1月間急性腦梗死患者30例(腦梗死組)，男22例，女8例，年齡55～75歲，平均年齡(64.10±11.15)歲，其中吸煙者13例。所選取的病例符合《中國急性缺血性卒中診療指南2014》關于腦梗死的診斷標準[4]，均為初次發病，發病前2周及發病后48h內均未服用任何影響檢測血小板的藥物。排除腦出血、腎功能衰竭、腫瘤、甲狀腺機能減退、長期服用維生素、雌激素等患者。另外選擇我院體檢中心的健康查體者25例(對照組)，男13例，女12例，年齡55～72歲，平均年齡(60.56±5.08)歲，其中吸煙者7例。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P均>0.05)，且排除上述疾病且無血緣關系。

2 檢測方法 使用流式細胞儀(美國BECTON-DICKSON公司)，色譜柱 Kromasil(琛航公司)，高效液相色譜儀(Waters-600E)，RF-10AXL熒光檢測器(日本島津公司)。于入院次日清晨(空腹8 h)留取兩組靜脈血4 ml置于EDTA 真空采血管中，快速加蓋，顛轉混勻5次，10 min之內進行血小板激活和染色，標本在24 h內上機分析，獲取數據。同時采取外周靜脈血5 ml，將其置于EDTA 真空采血管中。室溫靜置30 min，2 500 r/min離心15 min，離心半徑10 cm，留上層血漿置于-80 ℃冰箱保存，以備測量ADMA。將血漿樣品加氰化鉀溶液30 ml，混勻30 s，室溫靜置10 min；加入NDA應用液30 ml，置室溫保持20 min，冰浴終止反應，取50 μl進行HPLC 分析。

3 統計學方法 應用SPSS 15.0統計學軟件，計量資料以均數±標準差表示，采用t檢驗及方差分析(ANOVA)，并行Pearson相關分析。應用Logistic回歸分析對ADMA和其他危險因素與腦梗死的關系進行評估。P<0.05認為有統計學差異。

結 果

1 兩組腹圍、體重指數及合并癥比較 腦梗死組腹圍、膽固醇含量、高血壓、體重指數及糖尿病等指標均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組腹圍、體重指數及合并癥比較

2 兩組ADMA及血小板膜糖蛋白表達比較 腦梗死組ADMA表達高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；腦梗死組FIB-R表達高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；腦梗死組CD62P表達高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組血漿ADMA濃度和

注：與對照組比較，*t=4.084，P<0.05；△t=6.427，P<0.05；▲t=8.734，P<0.05

3 腦梗死組危險因素多因素非條件Logistic回歸分析 結果顯示，腹圍、體重指數、膽固醇、高血壓、糖尿病、ADMA與腦梗死的發病有關(P<0.05)。Logistic回歸分析顯示，膽固醇、高血壓、糖尿病、ADMA與腦梗死發病相關，優勢比分別為1.236、3.568、3.969及1.104(P均<0.05)，提示其可作為腦梗死的獨立危險因素，見表3～4。

表3 腦梗死組危險因素與單因素分析

表4 腦梗死組危險因素與多因素非條件Logistic回歸分析

4 腦梗死患者血漿ADMA濃度與血小板膜糖蛋白表達及中風危險因素關系 結果顯示，腦梗死患者血漿ADMA濃度與FIB-R、CD62P、年齡、高血壓呈正相關(P均<0.05)；與腹圍、膽固醇、體重指數、糖尿病、吸煙無相關性(P>0.05)，見表5。

表5 血漿ADMA濃度與血小板膜糖蛋白表達及中風危險因素的關系

討 論

以往研究發現，韓國人群腦梗死患者血漿ADMA濃度升高[5]。另一項研究證實血漿ADMA增高與頸動脈內膜中膜厚度有關[6]。ADMA與腦梗死的發生關系密切，并且可以作為缺血性腦血管病的獨立危險因素[7]。ADMA抑制血管NO生成，而NO可以抑制血小板黏附、聚集，提示了ADMA在腦血管病發病過程中起了重要作用[8]。腦梗死發生發展主要與血小板具有的活化功能有關，血小板膜纖維蛋白原受體表達及GPⅡb/Ⅲa復合物含量增加，可以作為血小板活化的重要標志，FIB-R和CD62p是目前檢測早期和晚期血小板活化程度和功能狀態的特異性標志物[9-11]。

動脈粥樣硬化是腦梗死的主要病因。研究表明，血漿升高的ADMA濃度與腦梗死的危險因素如高脂血癥、糖尿病、高血壓等呈正相關。先前的研究結果顯示，腦梗死患者血漿ADMA濃度高于對照組[12-13]，與本研究結果一致。但僅憑此結果尚不能證明ADMA濃度升高與腦梗死的因果關系。Yoo等[5]研究提示，血漿ADMA濃度升高在腦血管病發病中起重要的角色。ADMA通過影響腦血管血液循環[14]，增加發病危險因素，提高腦血管緊張度[15]。本研究顯示，膽固醇、高血壓、糖尿病等危險因素與腦梗死關系密切，患者血漿ADMA濃度與腦梗死有一定相關性，提示血漿ADMA增高可以作為腦血管病的危險因素之一。同時，本研究顯示，血漿ADMA濃度與高血壓、年齡成正相關，但并未發現血漿ADMA濃度與膽固醇[8]、糖尿病有明顯相關性，同時也未發現患者血漿ADMA濃度與體重指數、吸煙、腹圍等腦血管病危險因素相關性。ADMA通過損害NO依賴的內皮功能起作用，但有別于其他傳統腦血管病的危險因素。因此我們推測ADMA可以作為腦血管病其他傳統危險因素以外的獨立危險因素。

本研究還顯示，腦梗死患者血漿ADMA濃度與血小板膜糖蛋白FIB-R、CD62P成正相關，提示血漿ADMA濃度的增高的同時，血小板膜糖蛋白FIB-R、CD62P也隨之增高。支持血漿ADMA與腦梗死的關聯性部分是通過影響血小板活化功能起作用的。血小板活化可以作為腦血管閉塞的元兇。NO既是舒血管因子，還可以抗血小板的黏附和聚集。ADMA作為內源性eNOS的抑制物，可以減少NO生成。可見，ADMA可能是通過NO依賴的途徑影響腦梗死患者血小板活化功能。因此，我們可以通過減少ADMA的生成，降低血小板活化功能來治療腦梗死。

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(收稿：2017-04-19)

腦梗塞 @非對稱二甲基精氨酸 血小板膜糖蛋白類

R743.33

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.10.043