外周血長鏈非編碼RNA在心肌梗死早期診斷中的應用

唐藝加 陳 旸

(四川省醫學科學院 四川省人民醫院心內科，四川 成都 610071)

外周血長鏈非編碼RNA在心肌梗死早期診斷中的應用

唐藝加 陳 旸

(四川省醫學科學院 四川省人民醫院心內科，四川 成都 610071)

目的探討外周血長鏈非編碼RNA(lncRNA)在心肌梗死(MI)早期診斷中的應用。方法選擇2015年11月至2016年2月該院心血管內科收治的MI患者22例為MI組，同期體檢的健康成人15例為對照組，所有研究對象入院后即刻(0 h)采肘靜脈血2管，MI患者在入院后6、12、24、48、72、96 h分別采血一次，得到的血清和血漿分別用于檢測心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)濃度和尿路上皮癌相關抗原(UCA)1表達水平。結果除入院時MI組血清cTnⅠ與對照組比較未見明顯變化(P>0.05)，其余任意時間點上MI組均顯著高于對照組(P<0.05)。MI組血漿中UCA1表達水平在6、12、24、48 h時均顯著低于對照組(均P<0.05)，其余時間兩組差異無統計學意義(均P>0.05)。依據疾病史將患者分為單純MI組(12例)、高血壓MI組(7例)、糖尿病MI組(3例)和聯合患病組(3例)，分析顯示在0、12、72 h時各組UCA1表達水平均無統計學差異(均P>0.05)。結論UCA1能夠作為MI的潛在生物學標志物，其在MI發病后不同時段具有顯著的變化，并且特異性良好，但是目前尚不清楚其作用機制，有待于進一步研究確認。

心肌梗死；長鏈非編碼RNA；尿路上皮癌相關抗原1

目前臨床上以心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)為常用的心肌梗死(MI)標志物〔1〕，但一些心臟疾病如心力衰竭、心房顫動和非心臟疾病如嚴重的慢性腎病、敗血癥等都可以導致cTnⅠ升高，干擾診斷特異性〔2〕。非編碼RNA(ncRNA)是一類不翻譯成蛋白質的RNA，近幾年研究發現這些RNA廣泛參與了大量生理活動的調控和疾病的病理過程〔3〕。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是其中一類長度在200 bp以上的ncRNA〔4〕，研究發現其中一些lncRNA可以在體液中檢測到，也有研究發現某些lncRNA與心臟和血管的功能有密切關系，尿路上皮癌相關抗原(UCA)1〔5〕就是一種兼具上述兩種特性的lncRNA，目前尚無報道其與MI的關系，本研究旨在評價血清中UCA1在MI診斷中的應用價值。

1 材料與方法

1.1臨床資料 選擇2015年11月至2016年2月四川省人民醫院心血管內科收治的MI患者22例作為MI組，年齡41～73〔平均(61.02±11.83)〕歲，其中男14例，女8例，高血壓病史10例，糖尿病史6例，吸煙史11例。納入標準：①符合世界衛生組織(WHO)制定的MI診斷標準〔1〕，即典型的臨床表現、特征性的心電圖變化、血清標志物改變，3者具2即可診斷；②發生MI后2 h內入院，且未進行任何治療；③住院期間無嚴重并發癥發生。排除標準：①心臟疾病史；②惡性腫瘤；③3個月內外科手術史。選擇同期來我院體檢的健康成人15例為對照組，均通過冠狀動脈造影排除冠心病，年齡42～68〔平均(59.58±7.28)〕歲，其中男9例，女6例，高血壓病史6例，糖尿病史2例，吸煙史5例。兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經我院倫理委員會審查通過研究對象均知情同意。

1.2標本采集 研究對象入院后即刻(0 h)采肘靜脈血2管，此外MI患者在入院后6、12、24、48、72、96 h分別采血一次，每次2管，一管即刻送醫院檢驗科檢測cTnⅠ；另一管用抗凝管采集后在室溫下靜置30 min，3 000 r/min離心20 min取上層血漿，用焦碳酸二乙酯(DEPC)處理過的EP管分裝并標記后存放于-20℃冰箱中備用，待樣本收集齊全后統一檢測。

1.3逆轉錄聚合酶鏈反應(PCR)檢測UCA1 將血漿置于冰上解凍，采用Trizol法提取血漿樣本中的總RNA，用去酶水溶解后備用。采用Bio-rad公司的反轉錄試劑盒將RNA逆轉錄成cDNA，逆轉錄步驟：25℃ 5 min，42℃ 30 min，85℃ 5 min，4℃保持。得到的cDNA采用熒光定量PCR(qPCR)的方法檢測UCA1的表達水平，采用Bio-rad公司SsoFast Supermix試劑盒，反應程序：98℃預熱30 s，98℃變性5 s，61℃退火/延伸5 s，讀板，40個循環。反應引物由大連寶生物公司設計合成，上游引物5′-ACGCTAACTGGCACCTTGTT-3′，下游引物5′-TGGGGATTACTGGGGTAGGG-3′。

1.4統計學方法 應用SPSS17.0軟件進行t檢驗、單因素方差分析、χ2檢驗。

2 結 果

2.1兩組cTnⅠ水平比較 與對照組比較，除入院時MI組血清cTnⅠ未見明顯變化(P>0.05)，其余任意時間點MI組均顯著高于對照組(P<0.05)。MI組血清cTnⅠ濃度迅速增加至24 h時達到峰值，并持續至48 h，隨后緩慢下降。見表1。

2.2兩組UCA1水平比較 與對照組比較，MI組血漿中UCA1表達水平在6、12、24、48 h時均顯著降低(均P<0.05)，其余時間兩組差異無統計學意義(均P>0.05)。MI組血漿UCA1表達水平隨時間增加迅速降低，12～24 h時即達到最低值，48 h后開始上升，并迅速恢復至正常水平。見表2。

2.3高血壓及糖尿病對UCA1的影響 依據疾病史將患者分為單純MI組(既無高血壓也無糖尿病，12例)、高血壓MI組(僅有高血壓而無糖尿病，7例)、糖尿病MI組(僅有糖尿病而無高血壓，3例)和聯合患病組(既有高血壓也有糖尿病，3例)。取0、12、72 h的UCA1表達水平進行分析，不同組間在各時間點UCA1表達水平差異均無統計學意義(均P>0.05)。見表3。

表1 兩組不同時間血清cTnⅠ水平比較

表2 兩組不同時間血漿UCA1表達水平比較

表3 不同分組UCA1表達水平比較

3 討 論

MI是在冠狀動脈粥樣硬化的基礎上，由于供血急劇減少甚至中斷導致的相應心肌缺血壞死性疾病。MI發病急驟，發病前常沒有臨床征兆，發病后伴有嚴重的并發癥，尤其是心室顫動和心臟破裂，甚至導致死亡 。我國MI的發病率為45/10萬～55/10萬〔6〕。WHO推薦使用的生物學標志是cTnⅠ，它是cTn家族中特異性存在于心肌中的一種蛋白，具有高度器官特異性，進入血液后能夠長時間存在，檢測窗口長〔7〕。隨著臨床上的廣泛使用，發現cTnⅠ升高除了見于MI外，還可發生在任何導致心肌細胞損傷或通透性改變的疾病和病理狀態下。

自從人類基因組計劃以來，發現人類基因組DNA轉錄為RNA后僅2%可翻譯成蛋白質〔8〕，剩余98%未翻譯成蛋白質的RNA被稱為ncRNA。以往這些ncRNA被認為是“基因噪聲”，然而隨著分子生物學的發展，越來越多的ncRNA被發現與基因表達、轉錄、翻譯具有密切關系，在人體的生長、代謝、疾病的過程中發揮重要作用〔9〕。lncRNA長度超過200 bp，因此具有更復雜的二級結構，目前已發現的功能包括調控細胞周期、凋亡〔10〕。UCA1是在膀胱細胞癌中發現的一種lncRNA，由于其高度表達被作為膀胱癌的潛在生物標志物〔11〕。研究表明其參與了胚胎發育過程，在28 w的妊娠組織中，UCA1在心臟、子宮、膀胱中高表達，而在肝、腎、肺、胃等組織中表達下降〔12〕。而在成人組織中，UCA1僅在心臟和脾臟中表達，且在心臟中的表達水平更高〔13〕。本研究結果表明UCA1在MI中發生了顯著變化，具有作為生物學標志物的潛力，與cTnⅠ相比，檢測窗口期更短，但也提示其可能與病程發展關系更密切，變化更敏感。同時本研究結果還表明UCA1在血漿中的表達水平僅與MI有關，而與這些基礎疾病無關，提示UCA1具有良好的特異性。

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3Su Y，Wu H，Pavlosky A，etal.Regulatory non-coding RNA：new instruments in the orchestration of cell death〔J〕.Cell Death Dis，2016；7(8)：e2333.

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7Pickering JW，Greenslade JH，Cullen L，etal.Validation of presentation and 3 h high-sensitivity troponin to rule-in and rule-out acute myocardial infarction〔J〕.Heart，2016；102(16)：1270-8.

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11Li F，Hu CP.Long non-coding RNA urothelial carcinoma associated 1 (UCA1)：insight into its role in human diseases〔J〕.Crit Rev Eukaryot Gene Expr，2015；25(3)：191-7.

12Daneshvar K，Pondick JV，Kim BM，etal.DIGIT Is a conserved long noncoding RNA that regulates GSC expression to control definitive endoderm differentiation of embryonicstem cells〔J〕.Cell Rep，2016;17(2)：353-65.

13簡 杰，鄭少憶.長鏈非編碼RNA在心肌保護中的作用探討〔J〕.嶺南心血管病雜志，2016;22(4)：481-4.

陳 旸(1975-)，男，碩士，副主任醫師，主要從事老年心臟病學研究。

唐藝加(1975-)，男，碩士，主治醫師，主要從事介入心臟病學研究。

R541.4

A

1005-9202(2017)20-5025-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.20.031

〔2017-01-11修回〕

(編輯 滕欣航)