核因子kappa B1和RelA基因多態性與漢族女性卵巢上皮性癌的關系研究

劉紅麗，劉 瑩，郭紅燕

1.361000 福建省廈門市婦幼保健院 林巧稚婦兒醫院婦科 2.100191 北京市，北京大學醫學部病理教研室 3.100191 北京市，北京大學第三醫院婦科

·論著·

*通信作者：郭紅燕，主任醫師；E-mail：bysyghy@163.com

核因子kappa B1和RelA基因多態性與漢族女性卵巢上皮性癌的關系研究

劉紅麗1，劉 瑩2，郭紅燕3*

1.361000 福建省廈門市婦幼保健院 林巧稚婦兒醫院婦科 2.100191 北京市，北京大學醫學部病理教研室 3.100191 北京市，北京大學第三醫院婦科

背景炎癥與腫瘤關系密切，核因子kappa B(NF-κB)信號通路是重要的炎癥通路之一，單核苷酸多態性(SNPs)與疾病易感性亦存在重要關聯，p50/p65復合體是NF-κB信號通路中調節靶基因轉錄的重要分子。目的探討NF-κB1、RelA基因多態性與漢族女性卵巢上皮性癌的關系，以期從分子水平為卵巢上皮性癌的預防和診治提供依據。方法2014年2月—2015年2月選取1999—2010年于北京大學第三醫院、北京腫瘤醫院、北京醫院婦科進行手術治療的漢族卵巢上皮性癌患者286例為病例組。同期選取與病例組年齡匹配的在上述醫院體檢健康的漢族女性302例為對照組。提取研究對象DNA，利用HapMap數據庫中中國北京漢族人群(CHB)NF-κB1、RelA基因包含兩端2 kb鄰近區域的全部SNPs位點的基因分型數據，選擇SNPs位點，NF-κB1基因共確定了4個SNPs位點，分別是rs3774934(A/G)、rs3774938(A/G)、rs230510(A/T)、rs909332(A/T)；RelA基因共確定了3個SNPs位點，分別是rs10896027(C/G)、rs7119750(C/T)、rs11820062(C/T)。采用TaqMan探針法對SNPs位點進行基因分型，根據基因分型數據，構建單倍域圖，推斷每例研究對象的單體型、雙體型情況。結果對照組rs3774934、rs3774938、rs230510、rs909332、rs10896027、rs7119750、rs11820062均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。兩組NF-κB1基因rs3774934、rs3774938、rs230510位點基因型和等位基因頻率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；兩組NF-κB1基因rs909332位點基因型比較，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組NF-κB1基因rs909332位點等位基因頻率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。多因素Logistic回歸分析結果顯示，NF-κB1基因rs3774934、rs3774938、rs230510、rs909332位點基因型均不是卵巢上皮性癌的影響因素(P>0.05)；NF-κB1基因單體型均不是卵巢上皮性癌的影響因素(P>0.05)；NF-κB1基因雙體型GA-GA是卵巢上皮性癌的影響因素(P<0.05)。兩組RelA基因rs10896027、rs7119750、rs11820062位點基因型和等位基因頻率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。多因素Logistic回歸分析結果顯示，RelA基因rs10896027、rs7119750、rs11820062位點基因型均不是卵巢上皮性癌的影響因素(P>0.05)；RelA基因單體型不是卵巢上皮性癌的影響因素(P>0.05)；RelA基因雙體型CC-CC是卵巢上皮性癌的影響因素(P<0.05)。結論NF-κB、RelA基因多態性與漢族女性卵巢上皮性癌易感性具有一定關系，NF-κB1基因雙體型——rs3774934(G>A)和rs3774938(A>G)的GA-GA、RelA基因雙體型——rs7119750(C>T)和rs11820062(C>T)的CC-CC與卵巢上皮性癌的易感性有關。

卵巢腫瘤；多態性,單核苷酸；漢族；NF-κB；RelA

根據國家癌癥中心2015年公布的統計數據，卵巢癌的病死率為22.5%，仍高居我國婦科生殖道惡性腫瘤的首位[1]。越來越多的研究證實了炎癥在腫瘤惡性進展中的介導和推進作用，核因子kappa B(NF-κB)信號通路是重要的炎癥通路之一；NF-κB是Rel蛋白家族〔包括c-Rel、p50/p105(NF-κB1)、p52/p100(NF-κB2)、p65(RelA)及RelB 5個成員〕的成員[2]。通常所說的NF-κB指的是p50/p65復合體，大多數p50/p65復合體以異二聚體形式存在，其分別由NF-κB1、RelA基因編碼。p50/p65復合體從抑制性分子中釋放，進入細胞核，調節靶基因的轉錄，廣泛參與調控免疫應答、細胞凋亡、細胞生長等多個基因的表達。有研究表明，NF-κB信號通路參與了卵巢上皮性癌的發生和發展[3-5]，而且不同程度地影響腫瘤細胞對化療的敏感性及患者的預后[6-7]。單核苷酸多態性(SNPs)是指人類基因組核苷酸序列中單個堿基的序列存在差異，并在人群中的分布頻率>1%，被認為是與疾病易感性和藥物反應有關的重要因素，其與卵巢癌的發生、發展、化療耐藥、預后評估方面的相關性研究也是目前國際上婦科腫瘤基因組學研究的重點[8-10]。本研究旨在探討NF-κB1、RelA基因多態性與漢族女性卵巢上皮性癌的關系，以期從分子水平為卵巢上皮性癌的預防和診治提供實驗依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2014年2月—2015年2月選取1999—2010年于北京大學第三醫院、北京腫瘤醫院、北京醫院婦科進行手術治療的卵巢上皮性癌患者286例為病例組。年齡25～82歲，平均年齡(54.6±11.8)歲；雌激素受體(ER)狀態：陽性63例，陰性59例，缺失164例；孕激素受體(PR)狀態：陽性49例，陰性70例，缺失167例；CA125情況：正常(≤35 U/L)23例，升高216例，缺失47例；腫瘤最大直徑：≤5 cm 131例，>5 cm 136例，缺失19例；臨床分期：Ⅰ期43例，Ⅱ～Ⅳ期213例，缺失30例；淋巴結轉移情況：有淋巴結轉移113例，無淋巴結轉移158例，缺失15例；遠處轉移情況：有遠處轉移96例，無遠處轉移177例，缺失13例。納入標準：(1)漢族；(2)術后經病理學檢查證實為卵巢上皮性癌。同期選取與病例組年齡匹配的在上述醫院體檢健康的女性302例為對照組。年齡27～79歲，平均年齡(53.0±12.0)歲。納入標準：(1)漢族；(2)無現患腫瘤或惡性腫瘤病史。研究對象均簽署知情同意書，本研究獲得北京大學醫學部倫理委員會的批準。

1.2 研究方法

1.2.1 一般資料收集 收集研究對象一般資料，包括年齡、BMI、初潮年齡、絕經年齡、初產年齡、絕經狀態、生育史、一級親屬腫瘤家族史、吸煙史等。其中連續或累積吸煙6個月或以上者為有吸煙史。

1.2.2 提取DNA 病例組DNA提取自甲醛溶液固定、石蠟包埋切片的非腫瘤組織，對照組DNA提取自外周血白細胞，使用酚-氯仿-異戊醇抽提液進行提取。

1.2.3 選擇SNPs位點 將HapMap數據庫中中國北京漢族人群(CHB)NF-κB1、RelA基因包含兩端2 kb鄰近區域的全部SNPs位點的基因分型數據(NF-κB1：Chr4，103、639、518-103、759、506；RelA：Chr11，65、176、393-65、188、951)上傳至Haploview軟件中。在“Minimum minor allele freq.”錄入框中輸入0.05，選擇最小等位基因(MAF)>5%的SNPs進行連鎖不平衡(LD)分析。采用Confidence intervals方法劃定兩個基因相關范圍內的blocks，選取1%為單體型頻率下限，確定SNPs位點。NF-κB1基因共確定了4個SNPs位點，分別是rs3774934(A/G)、rs3774938(A/G)、rs230510(A/T)、rs909332(A/T)；RelA基因共確定了3個SNPs位點，分別是rs10896027(C/G)、rs7119750(C/T)、rs11820062(C/T)。

1.2.4 基因分型及質量控制 采用TaqMan探針法對SNPs位點進行基因分型，其中TaqMan探針和引物由Applied Biosystems公司合成并授權使用，HT7900實時熒光定量PCR儀購自美國應用生物系統公司。

每次基因分型實驗，384孔板中均設置有陰性對照和陽性對照，若≥15%的樣本分型失敗則整板分型結果棄用。多個SNPs位點分型均失敗的DNA樣本棄用。選取3%樣本進行重復檢測，由2名研究員在不知道分組的情況下分別進行結果判讀，兩次結果的吻合率在99%以上。

1.2.5 單倍域圖及單體型的構建 根據基因分型數據，采用Haploview軟件分別推算病例組和對照組NF-κB1、RelA基因單個SNPs位點的D′和r2，然后構建單倍域圖。采用SAS 9.1 PROC HAPLOTYPE程序，根據最大似然算法(EM算法)推斷每例研究對象的單體型、雙體型情況。記錄研究對象NF-κB1、RelA基因單個SNPs位點、單體型、雙體型情況。其中NF-κB1基因的單體型分別為：rs3774934(G>A)和rs3774938(A>G)的GG、GA，rs230510(A>T)和rs3774938(A>G)的AA，其他；雙體型分別為：rs3774934(G>A)和rs3774938(A>G)的GA-GG、GG-GG、GA-GA，rs3774934(G>A)和rs909332(A>T)的AA-GG，rs230510(A>T)和rs3774938(A>G)的AA-GA，rs909332(A>T)和rs230510(A>T)的AA-AA，其他。RelA基因單體型分別為：rs7119750(C>T)和rs11820062(C>T)的CC、TT、TC，rs7119750(C>T)和rs10896027(C>G)的CT；雙體型分別為：rs7119750(C>T)和rs11820062(C>T)的CC-TT、CC-CC、TT-TT、CT-TT、CT-CT及rs10896027(C>G)和rs11820062(C>T)的CC-CT，其他。

2 結果

2.1 一般資料比較 兩組年齡分布、絕經年齡、初產年齡、一級親屬腫瘤家族史發生率比較，差異無統計學意義(P>0.05)；病例組BMI、初潮年齡、絕經前期所占比例、有生育史率小于對照組，吸煙率大于對照組，差異有統計學意義(P<0.05，見表1)。

2.2 對照組SNPs位點的Hardy-Weinberg平衡檢驗 對照組rs3774934、rs3774938、rs230510、rs909332、rs10896027、rs7119750、rs11820062均符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=2.591、2.205、1.315、1.462、2.127、1.368、1.387，P=0.143、0.146、0.982、0.809、0.584、0.916、0.825)。

2.3 NF-κB1基因單個SNPs位點、單體型、雙體型與卵巢上皮性癌的關聯分析

表1 兩組一般資料比較

注：a為χ2值；b表示對照組、病例組分別有41、26例未絕經；c表示對照組、病例組分別有9、39例沒有生育史，其初產年齡記為12.0歲

2.3.1 NF-κB1基因單個SNPs位點與卵巢上皮性癌的關聯分析 兩組NF-κB1基因rs3774934、rs3774938、rs230510位點基因型和等位基因頻率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；兩組NF-κB1基因rs909332位點基因型比較，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組NF-κB1基因rs909332位點等位基因頻率比較，差異無統計學意義(P>0.05，見表2～5)。

以組別為因變量(賦值：對照組=0，病例組=1)，NF-κB1基因rs3774934(賦值：GG=0，AG=1，AA=2)、rs3774938(賦值：AA=0，AG=1，GG=2)、rs230510(賦值：AA=0，AT=1，TT=2)、rs909332(賦值：AA=0，AT=1，TT=2)位點基因型為自變量，年齡(賦值：≤55歲=0，>55歲=1)、BMI(賦值：≤23.0 kg/m2=0，>23.0 kg/m2=1)、絕經狀態(絕經前期=0，絕經后期=1)、生育史(賦值：有生育史=0，無生育史=1)、一級親屬腫瘤家族史(賦值：無=0，有=1)、吸煙史(賦值：無=0，有=1)為混雜因素，進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，NF-κB1基因rs3774934、rs3774938、rs230510、rs909332位點基因型均不是卵巢上皮性癌的影響因素(P>0.05，見表6)。

2.3.2 NF-κB1基因單體型與卵巢上皮性癌的關聯分析 以組別為因變量(賦值：對照組=0，病例組=1)，NF-κB1基因單體型(賦值：GG=0，AA=1，GA=2，其他=3)為自變量，年齡(賦值：≤55歲=0，>55歲=1)、BMI(賦值：≤23.0 kg/m2=0，>23.0 kg/m2=1)、絕經狀態(絕經前期=0，絕經后期=1)、生育史(賦值：有生育史=0，無生育史=1)、一級親屬腫瘤家族史(賦值：無=0，有=1)、吸煙史(賦值：無=0，有=1)為混雜因素，進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，NF-κB1基因單體型均不是卵巢上皮性癌的影響因素(P>0.05，見表7)。

2.3.3 NF-κB1基因雙體型與卵巢上皮性癌的關聯分析 以組別為因變量(賦值：對照組=0，病例組=1)，NF-κB1基因雙體型(賦值：AA-GG=0，GA-GG=1，GG-GG=2，AA-GA=2，AA-AA=3，GA-GA=4，其他=5)為自變量，年齡(賦值：≤55歲=0，>55歲=1)、BMI(賦值：≤23.0 kg/m2=0，>23.0 kg/m2=1)、絕經狀態(絕經前期=0，絕經后期=1)、生育史(賦值：有生育史=0，無生育史=1)、一級親屬腫瘤家族史(賦值：無=0，有=1)、吸煙史(賦值：無=0，有=1)為混雜因素，進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，NF-κB1基因雙體型GA-GA是卵巢上皮性癌的影響因素(P<0.05，見表8)。

2.4 RelA基因單個SNPs位點、單體型、雙體型與卵巢上皮性癌的關聯分析

2.4.1 RelA基因單個SNPs位點與卵巢上皮性癌的關聯分析 兩組RelA基因rs10896027、rs7119750、rs11820062位點基因型和等位基因頻率比較，差異均無統計學意義(P>0.05，見表9～11)。

表2 兩組NF-κB1基因rs3774934位點基因型和等位基因頻率比較〔n(%)〕

表3 兩組NF-κB1基因rs3774938位點基因型和等位基因頻率比較〔n(%)〕

表4 兩組NF-κB1基因rs230510位點基因型和等位基因頻率比較〔n(%)〕

表5 兩組NF-κB1基因rs909332位點基因型和等位基因頻率比較〔n(%)〕

注：-為采用Fisher′s確切概率法

表6 NF-κB1基因單個SNPs位點對卵巢上皮性癌影響的多因素Logistic回歸分析結果

表7 NF-κB1基因單體型對卵巢上皮性癌影響的多因素Logistic回歸分析結果

注：以GG為對照

表8 NF-κB1基因雙體型對卵巢上皮性癌影響的多因素Logistic回歸分析結果

注：以AA-GG為對照

以組別為因變量(賦值：對照組=0，病例組=1)，RelA基因rs10896027(賦值：CC=0，GG=1，CG=2)、rs7119750(賦值：CC=0，CT=1，TT=2)、rs11820062(賦值：CC=0，CT=1，TT=2)位點基因型為自變量，年齡(賦值：≤55歲=0，>55歲=1)、BMI(賦值：≤23.0 kg/m2=0，>23.0 kg/m2=1)、絕經狀態(絕經前期=0，絕經后期=1)、生育史(賦值：有生育史=0，無生育史=1)、一級親屬腫瘤家族史(賦值：無=0，有=1)、吸煙史(賦值：無=0，有=1)為混雜因素，進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，RelA基因rs10896027、rs7119750、rs11820062位點基因型均不是卵巢上皮性癌的影響因素(P>0.05，見表12)。

表9 RelA基因rs10896027位點基因型和等位基因頻率比較〔n(%)〕

表10 RelA基因rs7119750位點基因型和等位基因頻率比較〔n(%)〕

表11 RelA基因rs11820062位點基因型和等位基因頻率比較〔n(%)〕

表12 RelA基因單個SNPs位點對卵巢上皮性癌影響的多因素Logistic回歸分析結果

2.4.2 RelA基因單體型與卵巢上皮性癌易感性的關聯分析 以組別為因變量(賦值：對照組=0，病例組=1)，RelA基因單體型為自變量(賦值：CC=0，CT=1，TT=2，TC=3)，年齡(賦值：≤55歲=0，>55歲=1)、BMI(賦值：≤23.0 kg/m2=0，>23.0 kg/m2=1)、絕經狀態(絕經前期=0，絕經后期=1)、生育史(賦值：有生育史=0，無生育史=1)、一級親屬腫瘤家族史(賦值：無=0，有=1)、吸煙史(賦值：無=0，有=1)為混雜因素，進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，RelA基因單體型不是卵巢上皮性癌的影響因素(P>0.05，見表13)。

2.4.3 RelA基因雙體型與卵巢上皮性癌易感性的關聯分析 以組別為因變量(賦值：對照組=0，病例組=1)，RelA基因雙體型為自變量(賦值：CC-TT=0，CC-CT=1，CC-CC=2，TT-TT=3，CT-TT=4，CT-CT=5，其他=6)，年齡(賦值：≤55歲=0，>55歲=1)、BMI(賦值：≤23.0 kg/m2=0，>23.0kg/m2=1)、絕經狀態(絕經前期=0，絕經后期=1)、生育史(賦值：有生育史=0，無生育史=1)、一級親屬腫瘤家族史(賦值：無=0，有=1)、吸煙史(賦值：無=0，有=1)為混雜因素，進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，RelA基因雙體型CC-CC是卵巢上皮性癌的影響因素(P<0.05，見表14)。

表13 RelA基因單體型對卵巢上皮性癌影響的多因素Logistic回歸分析結果

注：以CC為對照

表14 RelA基因雙體型對卵巢上皮性癌影響的多因素Logistic回歸分析結果

注：以CC-TT為對照

3 討論

炎癥是生物抵抗外界病原體侵入的重要防御機制，越來越多的研究證實炎癥在腫瘤惡性進展中的介導和推進作用[11-13]。腫瘤炎性微環境是近年來腫瘤領域的研究熱點，而NF-κB信號通路是重要的炎癥通路之一，在腫瘤的發生發展中起重要作用。SNPs在基因組中存在廣泛變異，可用作遺傳學上的分子標志物，亦可闡明疾病和基因的關系，探索疾病相關基因。卵巢癌是一種嚴重危害婦女健康、生命的惡性腫瘤，已有多項研究證實，在卵巢癌組織中NF-κB相關蛋白高表達[14]。本研究通過病例對照研究設計，以NF-κB1、RelA基因為候選基因，利用HapMap CHB的SNP分型數據作為SNPs位點的選點依據，共選出NF-κB1基因的4個SNPs位點和RelA基因的3個SNPs位點，在包含286例卵巢上皮性癌患者和302例正常對照的漢族人群，用TaqMan Realtime-PCR方法進行基因分型，對照組進行SNPs位點的Hardy-Weinberg平衡檢驗使其符合代表性和隨機性，利用分型數據和Haploview軟件在病例組和對照組分別進行單倍域的構建，對漢族女性遺傳多態性與卵巢上皮性癌易感性及其進展相關性進行研究，目前在國內國際尚未見類似報道。

3.1 NF-κB1基因SNPs位點與卵巢上皮性癌的關系 近些年來國際上也有關于NF-κB1基因多態性與各種腫瘤的相關性研究，其中啟動子區-94位插入/缺失多態性比較常見，僅在中國漢族人群中就發現與鼻咽癌、前列腺癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤的發生存在相關性[15-17]，并且在卵巢癌中也證實這種相關性[8]。但DUAN等[9]對該多態性進行meta分析提示，-94位插入/缺失多態性僅與口腔癌、卵巢癌有顯著關聯，而與直腸癌、膀胱癌及腎細胞癌無顯著關聯。NF-κB1基因其他位點多態性與腫瘤的關系也有報道，如有報道rs4648127位點多態性與肺癌易感性有顯著關聯[18]，rs4648068位點多態性與胃癌有顯著相關性[19]。上述研究只是針對NF-κB1單個位點的多態性與腫瘤關系的研究。CHANG等[20]選取歐洲及高加索血統的NF-κB1基因6個代表性位點進行與霍奇金淋巴瘤易感性的研究發現，rs1585215多態性與之顯著相關〔AG vs.AA：OR=2.1，95%CI(1.5，2.9)；GG vs.AA：OR=3.5，95%CI(2.2，5.7)，P=1.7×10-8〕。而美國另一項研究證實rs4648022的多態性與非霍奇金淋巴瘤存在顯著關系[21]。2014年美國卵巢癌協會的一項多中心研究，選取有關NF-κB通路的220個基因的2 282個tagSNP位點，在15 604例患者和23 235例對照中研究其與卵巢癌易感性的關系，其中NF-κB1基因選取8個多態性位點進行分析，僅rs1609993與卵巢癌整體風險相關，但經多因素回歸分析后無統計學意義，最后僅發現白介素(IL-1)基因的rs17561與卵巢透明細胞癌易感性有顯著意義[10]。

本研究結果顯示，NF-κB1基因雙體型GA-GA是卵巢上皮性癌的影響因素，目前尚未發現與之相同雙體型與惡性腫瘤關系的相關報道，有報道rs3774934多態性與非霍奇金淋巴瘤不存在顯著關系[21]，另有報道rs3774938多態性與霍奇金淋巴瘤不存在顯著關系[22]。至于位點的多態性是通過何種途徑影響癌癥的發生，針對某一位點多態性與表型的關系研究較少，有研究提示rs3774934位點多態性與CD44表型相關[23]，而CD44是一種細胞表面跨膜糖蛋白分子，與許多惡性腫瘤的侵襲和轉移密切相關[24-25]。

3.2 RelA基因SNPs位點與卵巢上皮性癌的關系 關于RelA基因遺傳多態性的研究相對少見。有學者研究RelA基因遺傳多態性與肺結核的關系，選取5個SNPs位點，其單個SNPs位點、單體型均未發現顯著關聯[26]。另一項日本關于RelA基因遺傳多態性與精神分裂癥關系研究，選取4個SNPs位點rs7119750(SNP1)、rs11568300(SNP2)、rs2306365(SNP3)和rs11820062(SNP4)，其中SNP1、SNP3和SNP4與精神分裂癥存在顯著關系，在引入混雜因素進行多因素回歸分析后發現SNP3和SNP4與精神分裂癥的這種顯著關系仍存在[27]。本研究結果顯示，兩組RelA基因rs10896027、rs7119750、rs11820062位點基因型和等位基因頻率無差異；多因素Logistic回歸分析結果顯示，RelA基因rs10896027、rs7119750、rs11820062位點基因型均不是卵巢上皮性癌的影響因素，RelA基因單體型不是卵巢上皮性癌的影響因素，RelA基因雙體型CC-CC是卵巢上皮性癌的影響因素；提示同一個SNPs位點在不同疾病發病中的作用不同，即使在同一種腫瘤中，由于人群不同，其作用也可能不同。由于不同人群間基因組的LD圖不同，無法進行單體型和雙體型結果的比較。

理論上說，多位點單體型所包含信息量大于單位點等位基因，而多位點雙體型所包含信息量大于單位點基因型。雙體型可定義為來自兩個參與染色體的單體型所有可能組合的特定變異，等于所有位點上的所有基因型的分層分析和所有單體型的分層分析。因此，有研究認為，當樣本量足夠大時，單體型和雙體型分析應比等位基因和基因型分析更有效[28]。YANG等[29]發現，白介素4中-590C>T和內含子3 VNTR中，單個位點多態性與口咽癌均無顯著關聯，但T、RP1/T、RP1雙體型增加其發病風險，有顯著關聯。再有，LEE等[30]發現，CAPN10基因111單體型與多囊卵巢綜合征(PCOS)風險增加有關，121單體型與PCOS無關聯，而111/121雙體型與PCOS易感性增加的關聯性比任何單體型均高〔OR=3.4，95%CI(2.2，5.2)〕。

3.3 本研究不足 本課題采取候選基因的研究方法和SNPs的選點策略，對NF-κB1、RelA基因的SNPs位點、單體型、雙體型與卵巢上皮性癌的易感性分別進行了全面的關聯分析。但尚有不足之處：(1)樣本量相對較少，需要繼續擴大樣本量進行分析。(2)僅考慮NF-κB1、RelA基因的遺傳多態性，且選取單體型標簽SNPs，其很可能僅作為1個標簽而存在，而真正發揮作用的是與之連鎖的其他SNPs或該炎癥通路其他相關基因上的多態性位點上的基因-基因交互作用，應進一步擴大基因分析種類和SNPs分型數量。(3)僅選取北京部分漢族人群進行研究，如果資源和條件允許的話，還需要在另一個大的人群中進行重復研究。(4)未進行術后無進展生存期的關聯研究，仍需進一步完善隨訪資料。

綜上所述，NF-κB、RelA基因多態性與漢族女性卵巢上皮性癌易感性具有一定關系，NF-κB1基因雙體型——rs3774934(G>A)和rs3774938(A>G)的GA-GA、RelA基因雙體型——rs7119750(C>T)和rs11820062(C>T)的CC-CC與卵巢上皮性癌的易感性有關。本研究結果對于卵巢上皮性癌的風險預測、防治和治療提供一條新的線索和路徑，但尚需進行大樣本、多地域、多民族廣泛深入的協同研究進一步驗證。

志謝：感謝北京大學醫學部病理教研室田新霞教授、北京腫瘤醫院及北京醫院病理科對本實驗提供樣本支持，感謝本實驗中涉及的500多名正常對照女性和卵巢上皮性癌患者，其對醫學研究的支持是該試驗順利進行的保障。

作者貢獻：劉紅麗進行文章的構思與設計,研究的實施與可行性分析；劉瑩進行數據收集、整理，統計學處理；劉紅麗進行結果的分析與解釋，撰寫論文，進行論文、英文的修訂，負責文章的質量控制及審校；郭紅燕對文章整體負責，監督管理。

本文無利益沖突。

[1]CHEN W,ZHENG R,BAADE P D,et al.Cancer statistics in China,2015[J].CA Cancer J Clin,2016,66(2):115-132.DOI:10.3322/caac.21338.

[2]HANAHAN D,WEINBERG R A.The hallmarks of cancer[J].Cell,2000,100(1):57-70.

[3]SALVATORE C,CAMARDA G,MAGGI C A,et al.NF-kappaB activation contributes to anthracycline resistance pathway in human ovarian carcinoma cell line A2780[J].Int J Oncol,2005,27(3):799-806.

[4]KLEINBERG L,DONG H P,HOLTH A,et al.Cleaved caspase-3 and nuclear factor-kappa B p65 are prognostic factors in metastatic serous ovarian carcinoma[J].Hum Pathol,2009,40(6):795-806.DOI:10.1016/j.humpath.2008.10.019.

[5]HERNANDEZ L,HSU S C,DAVIDSON B,et al.Activation of NF-kappa B signaling by inhibitor of NF-kappaB kinase beta increases aggressiveness of ovarian cancer[J].Cancer Res,2010,70(10):4005-4014.DOI:10.1158/0008-5472.CAN-09-3912.

[6]KELLY M G,ALVERO A B,CHEN R,et al.TLR-4 signaling promotes tumor growth and paclitaxel chemoresistance in ovarian cancer[J].Cancer Res,2006,66(7):3859-3868.DOI:10.1158/0008-5472.CAN-05-3948.

[7]NAKANISHI C,TOI M.Nuclear factor-kappaB inhibitors as sensitizers to anticancer drugs[J].Nat Rev Cancer,2005,5(4):297-309.DOI:10.1038/nrc1588.

[8]FAN Y,YU W,YE P,et al.NFκB1 insertion/deletion promoter polymorphism increases the risk of advanced ovarian cancer in a Chinese population[J].DNA Cell Biol,2011,30(4):241-245.DOI:10.1089/dna.2010.1107.

[9]DUAN W,WANG E,ZHANG F,et al.Association between the NFκB1-94ins/del ATTG polymorphism and cancer risk:an updated meta-analysis[J].Cancer Invest,2014,32(7):311-320.DOI:10.3109/07357907.2014.911881.

[10]CHARBONNEAU B,BLOCK M S,BAMLET W R,et al.Risk of ovarian cancer and the NF-κB pathway:genetic association with IL1A and TNFSF10[J].Cancer Res,2014,74(3):852-861.DOI:10.1158/0008-5472.CAN-13-1051.

[11]OKAZAKI I M,KOTANI A,HONJO T.Role of AID in tumorigenesis[J].Adv Immunol,2007,94:245-273.DOI:10.1016/S0065-2776(06)94008-5.

[12]KULBE H,THOMPSON R,WILSON J L,et al.The inflammatory cytokine tumor necrosis factor-alpha generates an autocrine tumor-promoting network in epithelial ovarian cancer cells[J].Cancer Res,2007,67(2):585-592.DOI:10.1158/0008-5472.CAN-06-2941.

[13]WU Y,DENG J,RYCHAHOU P G,et al.Stabilization of snail by NF-kappa B is required for inflammation-induced cell migration and invasion[J].Cancer Cell,2009,15(5):416-428.DOI:10.1016/j.ccr.2009.03.016.

[14]NIESPOREK S,WCICHERT W,SINN B,et al.NF-kappa B subunit p65/RelA expression in ovarian carcinoma:prognostic impact and link to COX-2 overexpression[J].Verh Dtscb Ges Pathol,2007,91:243-249.

[15]ZHOU B,RAO L,LI Y,et al.A functional insertion/deletion polymorphism in the promoter region of NFκB1 gene increases susceptibility for nasopharyngeal carcinoma[J].Cancer Lett,2009,275(1):72-76.DOI:10.1016/j.canlet.2008.10.002.

[16]ZHANG P,WEI Q,LI X,et al.A functional insertion/deletion polymorphism in the promoter region of the NF-κB1 gene increases susceptibility for prostate cancer[J].Cancer Genet Cytogenet,2009,191(2):73-77.DOI:10.1016/j.cancergencyto.2009.01.017.

[17]LI P,GU J,YANG X,et al.Functional promoter -94 ins/del ATTG polymorphism in NFκB1 gene is associated with bladder cancer risk in a Chinese population[J].PLoS One,2013,8(8):e71604.DOI:10.1371/journal.pone.0071604.

[18]SHIELS M S,ENGELS E A,SHI J,et al.Genetic variation in innate immunity and inflammation pathways associated with lung cancer risk[J].Cancer,2012,118(22):5630-5636.DOI:10.1002/cncr.27605.

[19]LU R,GAO X,CHEN Y,et al.Association of an NFκB1 intron SNP (rs4648068) with gastric cancer patients in the Han Chinese population[J].BMC Gastroenterol,2012,12:87.DOI:10.1186/1471-230X-12-87.

[20]CHANG E T,BIRMANN B M,KASPERZYK J L,et al.Polymorphic variation in NFκB1 and other aspirin-related genes and risk of Hodgkin lymphoma[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2009,18(3):976-986.DOI:10.1158/1055-9965.EPI-08-1130.

[21]CERHAN J R,LIU-MARES W,FREDERICKSEN Z S,et al.Genetic variation in tumor necrosis factor and the nuclear factor-kappa B canonical pathway and risk of non-Hodgkin′s lymphoma[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2008,17(11):3161-3169.DOI:10.1158/1055-9965.EPI-08-0536.

[22]CHANG E T,BIRMANN B M,KASPERZYK J L,et al.Polymorphic variation in NFκB1 and other aspirin-related genes and risk of Hodgkin lymphoma[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2009,18(3):976-986.DOI:10.1158/1055-9965.EPI-08-1130.

[23]LIU-MARES W,SUN Z,BAMLET W R,et al.Analysis of variation in NF-kappaB genes and expression levels of NF-kappaB-regulated molecules[J].BMC Proc,2007,1 Suppl 1:S126.

[24]DU L,WANG H,HE L,et al.CD44 is of functional importance for colorectal cancer stem cells[J].Clin Cancer Res,2008,14(21):6751-6760.DOI:10.1158/1078-0432.CCR-08-1034.

[25]SUMIYOSHI Y,YAMASHITA Y,MAEKAWA T,et al.Expression of CD44,vascular endothelial growth factor,and proliferating cell nuclear antigen in severe venous invasional colorectal cancer and its relationship to liver mestastasis[J].Surg Today,2000,30(4):323-327.DOI:10.1007/s005950050594.

[26]CAI L,DENG S L,LIANG L,et al.Identification of genetic associations of SP110/MYBBP1A/RelA with pulmonary tuberculosis in the Chinese Han population[J].Hum Genet,2013,132(3):265-273.

[27]HASHIMOTO R,OHI K,YASUDA Y,et al.Variants of the RelA gene are associated with schizophrenia and their startle responses[J].Neuropsychopharmacology,2011,36(9):1921-1931.DOI:10.1038/npp.2011.78.

[28]ZUO L,WANG K,LUO X.Use of diplotypes-matched haplotype pairs from homologous chromosomes-in gene-disease association studies[J].Shanghai Arch Psychiatry,2014,26(3):165-170.DOI:10.3969/j.issn.1002-0829.2014.03.009.

[29]YANG C M,CHEN H C,HOU Y Y,et al.A high IL-4 production diplotype is associated with an increased risk but better prognosis of oral and pharyngeal carcinomas[J].Arch Oral Biol,2014,59(1):35-46.DOI:10.1016/j.archoralbio.2013.09.010.

[30]LEE J Y,LEE W J,HUR S E,et al.111/121 diplotype of Calpain-10 is associated with the risk of polycystic ovary syndrome in Korean women[J].Fertil Steril,2009,92(2):830-833.DOI:10.1016/j.fertnstert.2008.06.023.

AssociationofGeneticPolymorphismsinNF-κB1andRelAwithEpithelialOvarianCancerSusceptibilityamongChineseHanWomen

LIUHong-li1,LIUYing2,GUOHong-yan3*

1.DepartmentofGynecology,XiamenMaternalandChildHealthCareHospital,LinqiaozhiWomenandChildren′sHospital,Xiamen361000,China2.DepartmentofPathology,PekingUniversityHealthScienceCenter,Beijing100191,China3.DepartmentofGynecology,PekingUniversityThirdHospital,Beijing100191,China

*Correspondingauthor:GUOHong-yan,Chiefphysician;E-mail:bysyghy@163.com

BackgroundNuclear factor kappa B (NF-κB) signaling pathway is one of the important inflammatory pathways that is closely related to tumor,and single nucleotide polymorphism (SNPs) are also associated with disease susceptibility.P50/p65 complex is an important molecule in NF-κB signaling pathway of regulating transcription of target genes.ObjectiveTo investigate the association of genetic polymorphisms in NF-κB1 and RelA with epithelial ovarian cancer susceptibility among Chinese Han women,so as to provide an experimental basis for the prevention,diagnosis and treatment of epithelial ovarian cancer at molecular level.MethodsFrom February 2014 to February 2015,we selected 286 Chinese Han women with epithelial ovarian cancer who

surgical treatment in Department of Gynaecology of Peking University Third Hospital,Beijing Cancer Hospital,Beijing Hospital from 1999 to 2010 as the case group,and recruited 302 age-matched healthy Chinese Han women underwent physical examination during the same period in the above hospitals as the control group.DNA of the subjects was extracted,SNPs were selected from genotyping data of NF-κB1 and RelA genes of the Chinese Han population in Beijing (CHB) containing all SNPs at the 2 kb neighborhood in the HapMap database.The identified four SNPs in NF-κB1 gene were rs3774934 (A/G),rs3774938 (A/G),rs230510 (A/T),rs909332 (A/T) respectively,and the identified three SNPs in RelA gene were rs10896027 (C/G),rs7119750 (C/T),rs11820062 (C/T) respectively.The SNPs were genotyped by TaqMan probes.Based on the genotyping data,the haplotype block map was constructed.And the haplotype and diplotype of each subject were deduced.ResultsThe rs3774934,rs3774938,rs230510,rs909332,rs10896027,rs7119750 and rs11820062 in the control group met the Hardy-Weinberg equilibrium (P>0.05).The genotypes and allele frequencies of rs3774934,rs3774938,and rs230510 in NF-κB1 gene did not differ significantly between the two groups (P>0.05).There was significant difference in genotype of rs909332 in NF-κB1 gene between the two groups (P<0.05).There was no significant difference in allele frequencies of rs909332 in NF-κB1 gene between the two groups (P>0.05).Multivariate Logistic regression analysis showed that the genotypes of rs3774934,rs3774938,rs230510 and rs909332 in NF-κB1 gene were not the influencing factors of epithelial ovarian cancer (P>0.05);haplotypes of NF-κB1 gene were not the influencing factors of epithelial ovarian cancer (P>0.05);GA-GA diplotype of NF-κB1 gene was an influencing factor of epithelial ovarian cancer (P<0.05).There were no significant differences in genotypes and allele frequencies of rs10896027,rs7119750 and rs11820062 in RelA gene between the two groups (P>0.05).Multivariate Logistic regression analysis showed that genotypes of rs10896027,rs7119750 and rs11820062 in RelA gene were not the influencing factors of epithelial ovarian cancer (P>0.05);haplotypes of RelA gene were not the influencing factors of epithelial ovarian cancer (P>0.05);CC-CC diplotype of RelA gene was an influencing factor of epithelial ovarian cancer (P<0.05).ConclusionGenetic polymorphisms of NF-κB1 and RelA are associated with the susceptibility to epithelial ovarian cancer in Chinese Han women.GA-GA diplotype of rs3774934 (G>A) and rs3774938 (A>G) of NF-κB1 gene and CC-CC diplotype of rs7119750 (C>T) and rs11820062 (C>T) of RelA gene are associated with susceptibility to epithelial ovarian cancer.

Ovarian neoplasms；Polymorphism,single nucleotide；Han nationality；NF-kappa B；RelA

R 737.31

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.00.062

劉紅麗，劉瑩，郭紅燕.核因子kappa B1和RelA基因多態性與漢族女性卵巢上皮性癌的關系研究[J].中國全科醫學，2017，20(33)：4142-4150.[www.chinagp.net]

LIU H L,LIU Y,GUO H Y.Association of genetic polymorphisms in NF-κB1 and RelA with epithelial ovarian cancer susceptibility among chinese han women[J].Chinese General Practice，2017，20(33)：4142-4150.

2017-01-18；

2017-06-30)

(本文編輯：崔麗紅)