超高效液相色譜-串聯質譜法檢測糧食中的玉米赤霉烯酮

楊燕

[摘要]本研究建立了以固相萃取凈化樣品、超高效液相色譜-三重四級桿質譜法（UPLC-MS/MS）測定糧食中玉米赤霉烯酮的檢測方法。試樣以1%乙酸乙腈-水（84∶16，V/V）作為提取溶劑，經固相萃取凈化柱凈化濃縮，乙腈和水做流動相，經C18柱分離，以多反應監測（MRM）模式進行定量定性分析，以外標法定量。結果表明，該檢測方法在1.0～100.0ng/mL范圍內線性關系良好，相關系數R>0.999，樣品回收率在84.2%～107.6%，相對標準偏差（RSD）在1.7%～6.5%，能滿足當前糧食中玉米赤霉烯酮的檢測要求。

[關鍵詞]玉米赤霉烯酮;超高效液相色譜-串聯質譜法;固相萃取

中圖分類號：TS207.4 文獻標識碼：A DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.202009

玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）是由鐮刀菌產生的雌激素類真菌毒素，是污染糧食種類最廣泛的真菌毒素之一[1]，玉米、小麥等糧食及其谷物制品中都可能檢測到玉米赤霉烯酮[2]。玉米赤霉烯酮具有較弱的雌激素作用，人和動物食用被玉米赤霉烯酮污染的食物或飼料后會導致雌激素水平提高，造成生殖系統機能紊亂，危害人體健康。該毒素還具有肝毒性、免疫毒性及細胞毒性，在外部條件誘導下還會致癌[3-4]。玉米赤霉烯酮的毒性及污染受到世界各國的重視，各國都制定了糧食及谷物制品中玉米赤霉烯酮含量的限量標準。例如，法國規定植物油和谷類中玉米赤霉烯酮檢測限量不得超過200μg/kg;俄羅斯規定硬質小麥、面粉中玉米赤霉烯酮檢測限量不得超過1 000μg/kg;意大利規定谷物和谷物產品中玉米赤霉烯酮檢測限量不得超過100μg/kg;巴西規定玉米中玉米赤霉烯酮檢測限量不得超過200μg/kg;我國《食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）[5]中規定玉米、小麥等谷物及其制品中玉米赤霉烯酮限量指 標≤60μg/kg，《飼料衛生標準》（GB 13078—2017） [6]中規定玉米赤霉烯酮限量指標≤0.5mg/kg。

測定糧食谷物食品中玉米赤霉烯酮的方法很多，有薄層色譜法[7]、酶聯免疫吸附測定法（ELISA）[8]、膠體金免疫層析法[9]、（超）高效液相色譜法[10]（紫外檢測高效液相色譜法、免疫親和柱-熒光檢測高效液相色譜法）、高效液相色譜-串聯質譜法、氣相色譜法[11]等。其中，薄層色譜法重現性差，靈敏度低;酶聯免疫吸附測定法和膠體金法操作簡便、快速，適用于糧食企業大批樣品的現場快速檢測，但特異性差;氣相色譜法具有靈敏度高、測量準確等特點，但檢測速度不如液相色譜法快，所以較少應用于霉菌毒素檢測;（超）高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯質譜法適用于實驗室內精確定量。當前較常用的測定糧食中玉米赤霉烯酮含量的方法有免疫親和柱-熒光檢測高效液相色譜法，但現有普遍使用的免疫親和柱-熒光檢測高效液相色譜法存在前處理復雜、耗時長，人為因素引入誤差的風險高等問題。為此，本研究通過試驗，建立采用226多功能固相萃取柱進行凈化處理，以超高效液相色譜-串聯質譜（UPLC-MS/MS）檢測糧食中玉米赤霉烯酮的方法。該方法操作簡單快速、檢測靈敏度高、重現性好、定性定量兼顧，與高效液相色譜-串聯質譜法相比快速省時、準確可靠。

1 材料與方法

1.1 樣品與試劑

玉米、小麥、稻谷等樣品：市售;玉米赤霉烯酮標準品：濃度為100μg/mL，青島普瑞邦生物工程有限公司。

乙腈色譜純：賽默飛世爾科技（中國）有限公司;純水：屈臣氏集團（香港）有限公司。

1.2 主要儀器和設備

1290-6470型高效液相色譜-三重串聯四級桿質譜：安捷倫科技有限公司;MV5型多通道平行濃縮儀（氮吹儀）：北京萊伯泰科儀器股份有限公司;HC-3018型離心機：安徽中科中佳科學儀器有限公司;IKA型漩渦混合器：北京聯合科力科技有限公司;BLH-5601型錘式旋風磨（全自動）：浙江伯利恒儀器設備有限公司;MCF226型赤霉烯酮固相凈化柱、玉米赤霉烯酮免疫親和柱：青島普瑞邦生物工程有限公司;有機微孔濾膜（0.22μm）：天津市津騰實驗設備有限公司。

2 試驗方法

2.1 樣品前處理

玉米樣品經錘式旋風磨粉碎后，稱取5.0g于50mL離心管中，加入20mL1%乙酸乙腈-水混合液（84∶16，V/V），渦旋混勻1min，置于旋轉混合器上震蕩提取1h，然后以10 000r/min離心2min，上清液待凈化。

吸取8mL上清液過PriboFast、MCF226固相凈化柱，取4mL凈化液45℃氮吹至近干，用1mL乙腈-水（20∶80，V/V）復溶，渦旋混勻后待UPLC-MS/MS分析。

2.2 標準溶液配制

標準儲備液：將濃度為100.0μg/mL的玉米赤霉烯酮標準溶液用乙腈定容配制成濃度為1 000.0ng/mL的標準儲備液，于-20℃保存。

標準工作使用液：移取適量體積的標準儲備液至不同的10mL容量瓶中，用乙腈-水（20∶80，V/V） 定容，得到濃度分別為1μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、 50μg/L、100μg/L的標準溶液。

基質標準使用液：分別取上述各濃度標準溶液1mL于離心管中氮吹至近干，用1mL空白基質溶液復溶，得到濃度分別為1μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L的基質標準溶液，臨用現配。

2.3 儀器工作條件

2.3.1 色譜條

C18色譜柱（2.1mm×100mm，1.7μm）;柱溫：40℃;流速：0.4mL/min;進樣量：5μL;流動相及洗脫梯度見表1。