遏云茶中當歸的質量研究

程慶兵，劉 靜，汪海宣，苗仁華，葉紅兵

（合肥市食品藥品檢驗中心，安徽 合肥 230000）

遏云茶中當歸的質量研究

程慶兵，劉 靜，汪海宣，苗仁華，葉紅兵

（合肥市食品藥品檢驗中心，安徽 合肥 230000）

目的以當歸對照藥材和阿魏酸、蒿本內酯為指標，研究并完善處方中當歸的質量標準。方法采用薄層色譜法（TLC）為定性鑒別方法；HPLC法測定其中阿魏酸含量。結果不同批次遏云茶中當歸對照藥材和阿魏酸、蒿本內酯斑點清晰，分離度好，結果一致。含量測定阿魏酸平均含量為40 ug·g-1，回收率為100.1%，RSD=1.8%。結論定量定性方法準確、專屬性強、重復性好。

遏云茶；質量標準；薄層色譜；高效液相色譜

遏云茶主要作用為疏風清熱，利喉開音，其中當歸、生地等藥材行血中之滯；去瘀生新之功效。中醫認為當歸主治咳逆上氣。現已證明，當歸成分正丁烯夫內酯和藁本內酯對氣管平滑肌具有松弛作用；適用于咽部粘膜肥厚，咽后壁淋巴細胞濾泡增生[1]。遏云茶作為安徽省中醫藥大學第一附屬醫院制劑室生產的院內制劑，其質量的主要環節沒有完整的理化和儀器檢驗，由生產者憑經驗控制，增加了質量的不可控性。查閱相關文獻和期刊，均沒有這方面的記載和報道，故建立遏云茶的質量標準有非常重要的意義。

1 材 料

戴安U-3000高效液相色譜儀（DAD檢測器，chrome leon7.2軟件）；超聲波清洗器（Fisherbrand FB15065）；XPE-205電子分析天平（Mettler Toledo）；CAMAG TLC VISUALIZER薄層成像系統（瑞士卡瑪）；CAMAG LIONMAT5半自動點樣儀（瑞士卡瑪），IKA A11 basic中藥打粉機，硅膠G薄層板（Merck、青島海洋、煙臺信德）。

阿魏酸對照品（中檢院；110773-201614；含量為99.6%）；蒿本內酯對照品（中檢院；111737-201507）；當歸對照藥材（中國藥品生物制品檢定院；批號：120927-201516）；遏云茶（批號：20150806，20151016，20150526等）；甲醇（GR）；乙腈（GR）；重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜[2]

2.1.1 制備對照藥材溶液與對照品溶液

取當歸（Chinese Angelica）對照藥材0.5 g置于干燥錐形瓶中，加乙醚20 mL，超聲10分鐘，濾過，取續濾液置蒸發皿中，水浴鍋上蒸干，殘渣加乙醇1 mL使其溶解，即得對照藥材溶液。

精密稱取阿魏酸對照品10 mg置10 mL量瓶中，加適量甲醇溶解，并用甲醇稀釋定容搖勻，制成濃度為1 mg/mL的溶液；取蒿本內酯對照品0.1 mL置50 mL量瓶中，精密加入甲醇30 mL，搖勻。取阿魏酸對照品溶液5 mL、蒿本內酯對照品溶液1 mL，混勻，作為混合對照品溶液。

2.1.2 制備供試品溶液

取遏云茶粉末（過藥典四號篩）5 g置于干燥錐形瓶中，加乙醚20 mL，超聲10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使其溶解，作為供試品溶液1；另取遏云茶粉末（過藥典四號篩）5 g置于離心管中，加入1%碳酸氫鈉溶液50 mL，超聲10分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調節pH值至2～3，倒入分液漏斗中，用乙醚20 mL分別振搖提取2次，合并乙醚液于蒸發皿中，置水浴鍋上蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，即得供試品溶液2。

2.1.3 制備陰性供試品溶液

按遏云茶處方比例（除當歸），制成陰性供試品，按2.1.2的方法來分別制備出陰性供試品溶液1和陰性供試品溶液2。

2.1.4 薄層色譜

照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部 通則0502）試驗分別進行如下兩個薄層試驗。

①吸取當歸對照藥材溶液、供試品溶液1和陰性供試品溶液1各5 μL，點于同一硅膠G板（merk）上，以乙酸乙酯-正己烷（1：4）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。如圖1所示，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品顯與之相同顏色的熒光斑點，而陰性供試品在相應的位置上卻無相同顏色的熒光斑點，并且8批不同批號的遏云茶粉末與對照藥材比較均能出現相同Rf值斑點。

②吸取混合對照品溶液1 μL、陰性供試品溶液2和供試品溶液2各5 μL，分別點于同一硅膠G板（merk）上，以環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4：1：1：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。如圖2所示，供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性供試品則在相應的位置上無相同顏色的熒光斑點，8批不同批號的遏云茶與對照品比較均能出現相同Rf值斑點。

圖1 遏云茶薄層鑒別1

圖2 遏云茶薄層鑒別2

注：9、10為同一批

2.2 阿魏酸含量測定

2.2.1 波長的選擇[2]

參考中國藥典2015年版一部中當歸的含量測定方法以及其他相關文獻資料，本次試驗選擇316 nm作為液相色譜的檢測波長。

2.2.2 色譜條件

流動相：乙腈-0.1%磷酸（17：83）；波長316 nm；WatersSunfier柱；柱溫設為30℃；流速1.0 ml/min；進樣量10 μL；理論塔板數按阿魏酸素峰計算應不低于5000。見下圖1：

圖1 高效液相色譜圖

A：溶劑 B：對照品 C：陰性對照 D：樣品

2.2.3 對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對照品47.24 mg，加甲醇溶解制成對照品儲備液（941.021 μg·mL-1）。

2.2.4 供試品溶液的制備[3]

精密稱取遏云茶細粉5 g置于燒瓶中，精密加入20 mL 70%乙醇，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，并用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，用濾紙濾過取續濾液，精密量取10 mL置蒸發皿中，蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，并用鹽酸調節pH值至2，傾入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次（20，20，15，15 mL），合并提取液，蒸干，用甲醇溶解并定容至5 mL量瓶中，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.5 線性關系分析

精密量取對照品儲備液分別制成濃度為4.705、9.410、18.820、37.640、94.102μg·mL-1的系列濃度。按色譜條件方法進行檢測，求得線形回歸方程：A=0.05469C-0.52266，相關系數r=0.9999。結果表明濃度在4.705 μg·mL-1～94.102 μg·mL-1，范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.2.6 重復性試驗

取批號20150106的樣品，同供試品溶液的制備方法處理，測定阿魏酸峰面積A。重復性良好。

2.2.7 穩定性試驗

精密量取阿魏酸對照品儲備液（941.021 μg·mL-1）1 mL置50 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，于室溫下分時段測定，結果顯示阿魏酸對照品溶液在8小時內較穩定。

2.2.8 計算加樣回收率

取樣品（批號為20150106），取9份，分別精密加入3個梯度量的對照品，再同2.3.2方法處理。結果：平均回收率為100.1%，RSD為1.73%（n=9），此結果表明使用本方法具有較高的準確性。

2.2.9 樣品含量測定

取本品，按2.3.4方法處理，作為供試品溶液。按測定出的阿魏酸峰面積A，計算樣品中阿魏酸的含量，結果見表1。

表1 樣品含量測定結果

3 討 論

3.1 本方法采用了不同廠家，不同批次的硅膠G板，采用上述兩種展開劑，國產普通硅膠G板和進口Merk板在紫外光燈（365 nm）下檢視均斑點清晰明顯，陰性對照沒有干擾，且分離效果更好。選用薄層色譜法對遏云茶中當歸進行薄層定性鑒別，方法可行，斑點清晰，分離效果好，不失為遏云茶中當歸的有效定性鑒別方法。

3.2 本文阿魏酸的含量測定，采用乙醇提取直接進樣，干擾成分多，計算出的阿魏酸含量偏低。可能是由于阿魏酸為有機酸類，而中藥提取液的WM值多偏酸性，使其不易與其他化學成分產生作用而影響其提取轉移率。故采用調節pH值至酸性，再用乙醚提取，從而減少干擾，提高轉移率。

3.3 由于復方中藥成分多樣，而我們分析技術有限，在本文中我們僅對阿魏酸這個單一的成分進行分析，并不能對復方的整體質量進行綜合評價，具有相當的片面性。如果想把中藥整體的研究更加的科學合理，還必須結合處方中的其他味藥材以及藥理試驗、臨床試驗等進行綜合性的評定。

本文建立了遏云茶中當歸的質量控制方法，得出最優色譜條件。本法樣品處理簡單、分析周期短、重現性好、準確性高。

[1] 程樹玲，曾 莉，尹宏怡.利咽開咽茶與遏云茶治療聲音嘶啞251例報告[J].安徽中醫臨床雜志，2004，2(6):8-9.

[2] 中國藥典2015年版[s].一部，2015:133-134.

[3] 王淑美.馮素香，郭亞健，等.腦絡通不同提取工藝中阿魏酸含量變化的研究含量[J].《中藥新藥與臨床藥理》，2007，18(3):238-240.

R284.1

B

ISSN.2095-8242.2017.060.11866.03

本文編輯：劉帥帥