磁定量免疫層析法降鈣素原試劑盒性能評估研究

李小俠 ,張 華△ ,奚逢瑜 ,駱志義 ,張利俠

1.陜西省人民醫院檢驗科(西安 710068),2.陜西省納米生物醫學檢測工程研究中心(西安 710077)

·臨床檢驗·

磁定量免疫層析法降鈣素原試劑盒性能評估研究

李小俠1,張 華1△,奚逢瑜1,駱志義2,張利俠1

1.陜西省人民醫院檢驗科(西安 710068),2.陜西省納米生物醫學檢測工程研究中心(西安 710077)

目的： 評價磁定量免疫層析法降鈣素原(PCT)檢測試劑盒的臨床性能。方法： 以梅里埃VIDAS PCT試劑盒為參比試劑，對PCT檢測試劑盒進行精密度、線性范圍、方法學一致性的比對研究。結果：PCT檢測試劑盒批內低值和高值的變異系數(CV)分別為6.67%(0.49ng/ml)和4.39%(4.89ng/ml)，總精密度為7.26%(0.48ng/ml)和4.74%(4.91ng/ml)，滿足精密度檢測要求。試劑盒線性范圍具有良好的線性梯度關系(r2=0.9989)。方法學比對試驗結果顯示，PCT試劑盒檢測結果與VIDAS檢測結果具有良好的相關性，相關系數r2=0.9668，臨床參考值0.5ng/ml和2ng/ml的檢測結果與VIDAS的符合率為94.5%和93.6%，表明兩者具有很好的一致性。結論：PCT檢測試劑盒與VIDAS試劑盒在臨床應用上具有等效性，可用于臨床診斷及療效監控。

降鈣素原(Procalcitonin,PCT)是一種由116個氨基酸組成，分子量為127000的糖蛋白，主要由甲狀腺濾泡細胞分泌。正常生理條件下，人體內PCT的水平很低，一般小于0.1ng/ml[1]。當發生細菌、真菌感染或全身炎癥反應時，PCT在血液中的水平升高。因此，PCT被認為是一個理想炎癥診斷標志物[2]。目前，定量檢測PCT的方法主要有電化學發光法和酶聯熒光分析法[3]，但是都需要昂貴的試劑和設備，不適合的急診檢測和現場檢測。本研究對西安金磁PCT磁定量免疫層析試劑盒進行性能評估，以了解該試劑盒是否能滿足臨床檢測的需求。

材料與方法

1 儀器與試劑 VIDAS酶聯免疫熒光分析儀，VIDAS降鈣素原定量測定試劑盒(批號XX)，梅里埃；磁定量免疫分析儀(型號GM-MICTv2)，降鈣素原檢測試劑盒(金磁微粒免疫層析法)(批號：161880和171821)，由西安金磁納米生物技術有限公司提供。

2 精密度檢測 選擇低值和高值兩個水平的質控血清，低值樣本濃度在臨界值(0.5ng/ml)附近，高值質控樣本濃度為病理值，對兩個批次的金磁生物PCT試劑盒進行測試。對每個濃度樣本每天用兩個批次的金磁生物PCT試劑盒進行測試，每批分別檢測低值和高值質控血清，每個水平重復2次，連續檢測20d，收集數據，分別計算批內精密度和總精密度，以變異系數(CV，%)表示[4]。

3 線性范圍分析 根據CLSEP6A文件的要求，收集高值血清樣本和低值血清樣本，高值選擇線性范圍上限血清樣本，要求無溶血、脂血和黃疸等干擾物質；低值選擇為線性范圍下限的血清樣本，同樣要求無溶血、脂血和黃疸等干擾物質。然后將高值樣本和低值樣本以10∶0、9∶1、8∶2、7∶3……3∶7、2∶8、1∶9、0∶10的比例分別混合制備形成11個濃度水平的PCT檢測樣本。對金磁生物PCT試劑盒進行檢測，每份樣本重復檢測3次，計算平均值并進行回歸方程的擬合[5]。

4 方法學比對試驗 收集2016年10月109例臨床血清樣本，樣本均來源于陜西省人民醫院門診和住院患者中疑似細菌感染的患者，無溶血、脂血和黃疸等樣本。樣本同時使用金磁生物PCT試劑盒和VIDAS PCT檢測試劑進行檢測，收集數據，進行相關性分析。選擇臨床意義參考值0.5ng/ml和2ng/ml為閾值，對檢測結果進行符合性分析。

結 果

1 精密度檢測結果 金磁生物PCT試劑盒161880批次檢測的低值和高值質控血清精密度檢測結果均值(CV)分別為0.49ng/ml和4.89ng/ml，變異系數(CV)分別為6.67%和4.39%。 171821批次低值和高值質控血清檢測結果均值為0.48ng/ml和4.92ng/ml，變異系數分別為7.85%和5.17%。低值和高值質控血清總精密度均值為分別為0.48ng/ml和4.91ng/ml，變異系數為7.26%和4.74%。

2 線性范圍結果 以濃度為橫坐標，以檢測信號值的平均值為縱坐標，繪制濃度與檢測信號的散點圖并進行線性擬合，得到擬合方程為Y=87.3612X-0.3687，相關系數r2=0.9989，符合臨床上的線性范圍。

3 對比結果分析和符合率研究 以梅里埃VIDAS PCT試劑盒檢測結果為X軸，金磁生物PCT試劑盒檢測結果為Y軸，做相關性散點圖分析如圖1。線性回歸方程為Y=0.9593X+0.0291，相關系數r2=0.9668，兩者相關性良好。

圖1 梅里埃 VIDSA和金磁生物PCT試劑相關性分析圖

109例臨床樣本以0.5ng/ml為臨界值進行定性統計，結果顯示金磁生物PCT試劑盒與VIDAS試劑盒的總體符合率為94.5%，見表1；以2.0ng/ml位臨界值進行定性統計，結果顯示金磁生物PCT試劑盒與VIDAS試劑盒的總體符合率為93.6%，見表2。

表1 以0.5ng/ml為臨界值對金磁生物PCT試劑盒檢測結果的定性分析結果(例)

表2 以2.0ng/ml為臨界值對金磁生物PCT試劑盒檢測結果的定性分析結果(例)

討 論

近年來，PCT作為一個敏感性較高的炎癥指標，已經成為與細菌性感染引起的炎癥反應特異性的檢測指標，尤其是用于鑒別細菌性感染所致的全身炎癥反應綜合征(Systemic inflammatory response syndrome，SIRS)以及膿毒癥。最新的《降鈣素原(PCT)急診臨床應用的專家共識》指出降鈣素原可被推薦用于細菌感染性膿毒癥的診斷、分層、治療監測和預后評估[5]。

目前，國內市場用于PCT檢測的方法主要為化學發光法和酶聯熒光法，該類方法具有很好的靈敏度和寬的檢測范圍，但都需要昂貴的檢測設備和試劑，對于快速檢測和床旁檢測的使用受限。金磁生物的PCT檢測試劑盒采用雙抗體夾心法、免疫層析法和磁定量檢測技術相結合，可以定量檢測人血清或血漿中的PCT含量[6]。本研究對該試劑盒的性能進行評估，結果表明在檢測范圍內具有良好的精密度，在試劑盒標識的檢測范圍內具有很好的線性梯度關系，可以滿足臨床檢測需求。特別是在檢測的過程中引入納米微顆粒磁定量技術，能更好的保證檢測過程的穩定性，有較好的應用前景。為驗證該套檢測體系的檢測效能，以目前多家醫院檢驗科常規采用的梅里埃VIDAS PCT檢測系統為參比系統，收集109例臨床血清樣本進行兩種方法學比對和符合性分析，結果表明，金磁生物的PCT試劑盒與VIDAS的試劑盒具有良好的相關性，相關系數r2=0.9668。血中PCT含量低于0.5ng/ml通常可排除膿毒血癥；而介于0.5ng/ml至2ng/ml之間時，被認為可能是膿毒血癥；而高于2ng/ml則認為是膿毒血癥或是SIRS。在參考值為0.5ng/ml和2ng/ml時，金磁生物的PCT試劑盒與VIDAS的試劑盒符合率分別為94.5%和93.6%，研究顯示這兩種方法具有較好的一致性。金磁生物的PCT檢測方法使用免疫層析結合納米磁微粒技術，而VIDAS的PCT檢測方法使用熒光免疫方法，兩種方法在檢測結果的差異尚需進一步研究。

綜上所述，金磁生物的PCT試劑盒具有操作簡便，耗時短，不需要昂貴的儀器設備，便于進行急診檢驗和床旁檢驗。同時，該試劑盒與VIDAS試劑盒的檢測結果具有較高的符合率，分析性能基本滿足臨床檢測要求。

[1] Philipp S,Werner A，Beat M. Procalcitonin for diagnosis of infection and guide to antibiotic decisions: past,present and future[J]. BMC Medicine,2011,9(107):1-9.

[2] Alexander K,Matthias B,Mirjam C,etal. Prognostic value of procalcitonin in respiratory tract infections across clinical settings[J].Critical Care,2015,19(74):1-11.

[3] 劉秋平,劉 穎,周 偉,等. PCT及T淋巴細胞亞群在老年衛生保健相關性肺炎并發呼吸衰竭中的診斷價值[J]. 陜西醫學雜志,2015,44(5):550-551.

[4] National Committee for Clinical Laboratory Standard. Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods; Approved Guidelines-second edition[S]. Wayne: PA,CLSI/NCCLS document EP05-A2,2003.

[5] 降鈣素原急診臨床應用專家共識組. 降鈣素原(PCT)急診臨床應用的專家共識[J]. 中華急診醫學雜志,2012,9(21): 944-948.

[6] 白翠林. hsCRP、PCT檢測在老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期的臨床應用[J]. 陜西醫學雜志,2015,44(7):925-926.

△通訊作者

@降鈣素原 @磁定量檢測 @免疫層分析

R446

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.11.044

(收稿：2017-04-12)