陜西咸陽地區無償獻血者抗-HCV檢測及RIBA確證分析

王建利，孫蕊娟，胡曉衛

1. 陜西省中醫醫院(西安 710003)，2.陜西省咸陽市干部保健局(咸陽 712000)，3.陜西省咸陽市中心血站(咸陽 712046)

陜西咸陽地區無償獻血者抗-HCV檢測及RIBA確證分析

王建利1，2，孫蕊娟3，胡曉衛1△

1. 陜西省中醫醫院(西安 710003)，2.陜西省咸陽市干部保健局(咸陽 712000)，3.陜西省咸陽市中心血站(咸陽 712046)

目的：了解咸陽地區無償獻血者丙肝感染情況。方法：使用不同酶聯免疫吸附試劑對咸陽市2015-2016年90588人次的無償獻血者標本進行丙肝抗體進行初篩，并對初篩陽性的血液標本進行RIBA確證檢測，比較不同廠家對抗-HCV的確診陽性率以及抗-HCV的S/CO值與確證結果的相關性。結果：期間咸陽市無償獻血者共90588人，初檢陽性率為0.41%(369人)，經RIBA實驗進行確診，確診符合率為59.35%(219人)；ELISA-1檢測抗-HCV的陽性率0.28%，ELISA-2檢測抗-HCV陽性率0.34%，兩者比較差異有統計學意義(χ2= 14.78，P=0.00)；ELISA-1試劑確證陽性符合率77.52%和 ELISA-2試劑確證陽性符合率59.58%之間比較有統計學差異(χ2= 20.78，P=0.00)；ELISA-1試劑抗-HCV S/CO>10.0樣本的確證陽性符合率較高(99.30%)，差異有統計學意義(χ2= 87.03，P=0.00)；ELISA-2試劑的抗-HCV S/CO>10.0的樣本的確證陽性符合率100.00%，與ELISA-1試劑相比較差異有統計學意義(χ2= 209.47，P=0.00)；抗-HCV RIBA確證試驗陽性標本的核抗原的條帶陽性比例較高(85.39%)，而條帶NS的陽性比例最低(34.25%)。結論：咸陽地區無償獻血人群中HCV初篩陽性率呈中態流行趨勢。

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus ，HCV)是導致慢性肝臟疾病的主要原因之一。有報道全國丙肝的發病率14.96/10萬，陜西省的發病率15.98/10萬，略高于全國平均水平[1]。為了進一步加強采供血管理，保證臨床輸血安全，最大限度地降低經輸血傳播HCV的風險，我們對咸陽市無償獻血者的HCV檢測結果進行分析，現報告如下。

對象和方法

1 研究對象 收集2015年1月1日至2016年12月31日在陜西省咸陽地區固定采血點和流動采血點進行無償獻血者為研究對象，獻血前經體檢醫生征詢病史、體檢合格、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、血紅蛋白檢測和HBsAg快速篩查合格，符合無償獻血條件者90588人，獻血者年齡18～55周歲。

2 試劑與儀器

2.1 主要試劑：抗-HCV ELISA 試劑盒：北京萬泰生物科技有限公司(ELISA-1批號：C20150305,C20150711,CS20160302 等)，廈門新創生物科技有限公司(ELISA-2批號： 2015095816,201515803,2015035807) ；丙肝RIBA確證試劑：MP生物醫學亞太有限公司(批號： AD5002,AD5013，AD6001等)。

2.2 主要儀器：Genesis RSP150 全自動加樣儀(瑞士帝肯)，BEPⅢ后處理酶聯免疫分析系統(德國貝林公司)、TENCAN洗板機(瑞士帝肯)、E-STAR全自動酶免分析儀(瑞士HAMILTON)，TS-8轉移脫色搖床(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)。以上儀器設備均經過檢定校準合格，試劑均為國家批批檢合格產品，并在有效期內使用。

3 檢測方法

3.1 初篩檢測:每份血液標本均采用2種不同廠家ELISA試劑進行初篩試驗，抗-HCV檢測方法嚴格按照試劑盒的說明書操作步驟進行操作檢測，記錄各實驗的S/CO比值，S/CO>0.9為陽性，S/CO≤0.9為陰性；2種試劑均為陽性則報告HCV抗體陽性；1種試劑有反應性，則用原有試劑重復檢測2孔。如2孔復測均呈陰性反應，則報告HCV抗體陰性；如均呈陽性反應，或一陰一陽，則報告HCV抗體陽性；初篩陽性的再次進行RIBA確證檢測。

3.2 確證檢測：對初篩試驗陽性者采用HCV重組免疫印跡實驗(RIBA)法進行確證檢測，對抗原(核抗原、NS3-1、NS3-2、NS4、NS5) 進行檢測，RIBA的檢測步驟嚴格按照試劑說明書進行檢測和結果判讀，其條帶強度的判讀和結果，見表1和表2。

4 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件，兩組計數資料的比較采用χ2檢驗或Fisher 精確概率法，以P<0.05為差異為有統計學意義。

表1 RIBA抗HCV反應條帶強度的判讀標準

表2 RIBA抗HCV反應結果的判讀標準

結 果

1 不同年份無償獻血者抗-HCV檢測結果比較 無償獻血者90588人，初檢陽性率0.41%(369例)，其中2015年無償獻血者44866例，初檢陽性率0.40%(181例)，2016年無償獻血者45722例，初檢陽性率0.41%(188例)，不同年份無償獻血者抗-HCV的初檢率之間比較，差異無統計學意義(χ2= 0.03，P=0.96)；初檢結果陽性者經RIBA實驗進行確診，其總的確診符合率59.35%(219例)，2015年確診符合率60.22%(109例)與2016年58.51%(110例)之間比較無統計學差異(χ2= 0.11，P=0.74)，見表3。

表3 2015-2016年咸陽地區無償獻血者抗-HCV檢測結果比較[例(%)]

2 不同廠家ELISA檢測抗-HCV的結果比較

2.1 不同廠家ELISA初篩抗-HCV的結果比較：使用兩個廠家的ELISA試劑對90588名無償獻血標本的抗-HCV進行檢測，其檢測結果一致性的Kappa值0.70；ELISA-1檢測抗-HCV的陽性率0.28%，ELISA-2檢測抗-HCV的陽性率0.34%，不同廠家ELISA抗-HCV的結果比較，差異有統計學意義(χ2=14.78，P=0.00)，見表4。

表4 不同廠家ELISA初篩抗-HCV的結果比較[例(%)]

2.2 不同廠家ELISA初篩陽性者與RIBA確證結果的符合情況：使用兩個不同廠家的ELISA試劑對90588名無償獻血標本的抗-HCV進行檢測篩查，其中抗-HCV陽性者共369例，經 RIBA試驗確證后陽性者共219例，確證陽性符合率為59.35%；其中經ELISA-1試劑檢測陽性者258例，經RIBA確證陽性者200例，確證陽性符合率77.52%，經ELISA-2試劑檢測陽性者209例，經RIBA確證陽性者184例，確證陽性符合率59.58%，兩者之間比較，差異有統計學意義(χ2= 20.78，P=0.00)；經ELISA-1和ELISA-2試劑檢測均為陽性者198例，經RIBA確證陽性者165例，確證陽性符合率83.33%，見表5。

3 不同廠家ELISA檢測抗-HCV的S/CO值與確證結果的相關性 對兩個不同廠家的ELISA試劑對90588名無償獻血標本的抗-HCV的S/CO值進行檢測，對初篩陽性者進行RIBA確證試驗。ELISA-1試劑的抗-HCV陽性者共258例，S/CO>10.0的樣本經 RIBA 確證后的確證陽性符合率99.30%，10>S/CO≥3樣本的確證陽性符合率56.76%，3>S/CO>0.9樣本的確證陽性符合率48.10%，差異有統計學意義(χ2= 87.03，P=0.00)；ELISA-2試劑的抗-HCV陽性者共309名，S/CO>10.0的樣本經 RIBA 確證后的確證陽性符合率100.00%，10>S/CO≥3樣本的確證陽性符合率45.65%，3>S/CO>0.9樣本的確證陽性符合率21.88%，經Fisher 精確概率法檢驗，差異有統計學意義(χ2= 209.47，P=0.00)，見表6。

4 抗-HCV RIBA確證陽性樣本的條帶分布情況 ELISA對無償獻血者的抗-HCV進行篩查，對篩查結果陽性者進行RIBI確證試驗，其中抗-HCV RIBA確證陽性樣本共219例，對其進行條帶種類和強度進行檢測， 其中在219例確證陽性標本中，核抗原的條帶陽性比例最高85.39%，其次為NS4條帶56.16%，條帶NS的陽性比例最低34.25%，見表7。

表5 不同廠家ELISA 試劑抗-HCV篩查陽性者與確證結果的符合情況

表6 不同廠家ELISA 抗-HCV陽性者S/CO值與確證結果的關系

表7 抗-HCV RIBA確證陽性樣本條帶分布情況(例)

討 論

血液傳播是HCV感染的主要途徑之一。衛生部頒布實施的《血站技術操作規程》(2015版)規定獻血者丙肝病原學標志物檢測項目，采用檢測試劑1種酶免試劑加1種核酸試劑。本單位目前采用2種酶免試劑加1種核酸試劑，本文章僅討論2種酶免試劑檢測，統計數據顯示本地區2015-2016年HCV抗體初篩陽性率為0.41%。分析同行業不同地區的報道：太原市獻血者2005-2011年抗HCV初篩陽性率為0.71%[1],西安地區獻血者2009-2012年抗-HCV初篩陽性率0.66%[2]，滄州地區無償獻血者抗-HCV初篩陽性率0.58%[3]，大連市無償獻血者血液檢測顯示2006-2010年抗HCV初篩陽性率為0.43%[4]，均高于本地區；寧夏地區無償獻血者抗-HCV初篩陽性率0.38%[5]，溫州地區無償獻血者抗-HCV初篩陽性率0.27%[6]，均低于本地區，整體來看本區域無償獻血人群初篩陽性率在全國居中，與人群丙肝發病率一致。

目前應用的酶聯免疫法檢測丙型肝炎患者的特異性可高于99%，假陽性多發生于丙型肝炎低流行地區人群的抗-HCV檢測。由于不同廠家的酶免試劑所采用的抗原片段不同，在檢測標本時存在質量上的差異[7]，為了了解獻血人群真正的感染率，我們對初篩陽性的標本再次進行RIBA確證檢測，2015-2016年本單位無償獻血人群的丙肝確證陽性率為0.24%，確證陽性和初篩陽性的符合率達59.35%，高于李雪梅報道中濰坊市的38%[8]，莊小獅報道中的浙江湖州市的15.38%[9]。本研究中萬泰的假陽性22.48%，新創的假陽性40.45%；李雪梅[8]報道萬泰的假陽性33.33%，新創的假陽性38.71%；兩個研究結果略有不同，可能與兩個實驗室ELISA檢測灰區范圍不同有關。本研究發現單試劑陽性的確證陽性符合率萬泰為58.3%，新創為17.1%，說明兩種試劑的性能差異明顯。

本研究表3提示我們不論哪種試劑，隨著S/C.O值的增大，確證結果為陽性的概率增大。同時我們的實驗均證實S/C.O值較低時仍然有確證陽性的，因此初篩檢測中的弱陽樣本的復測方案也應慎重選擇。

219例確證標本中核抗原陽性率85.39%，NS3-1陽性率49.77%，NS3-2陽性率55.25%，NS4陽性率56.16%，NS5陽性率34.25%，這種片段的差異是否由人群因素造成我們無法判定，有待大家的共同商榷。

[1] 李之燁,焦冬麗.太原市2005-2011年無償獻血者血液檢測結果分析[J].中國輸血雜志,2013,26(4):376-377.

[2] 肖 進,曹曉莉,趙曉華,等.2009-2012年西安地區無償獻血者血液檢測結果分析[J].中國輸血雜志,2013,26(9):794-795.

[3] 王瑞麗,魏 超,劉樂霞,等.2007-011年滄州地區無償獻血者血液檢測結果與分析[J].中國輸血雜志,2013,26(11):1129-1130.

[4] 劉 穎,王雅卿,王 黎,等.大連市無償獻血者血液檢測結果分析[J].中國輸血雜志,2013,26(3):161-162.

[5] 韓海年,張 偉,張巧云,等.2010-2012年寧夏地區無償獻血血液標本集中檢測結果分析[J].中國輸血雜志,2014,27(4):418-420.

[6] 朱紫苗.溫州地區2007-2012年無償獻血者血液感染性指標檢測結果分析[J].中國輸血雜志,2014,27(1):71-73.

[7] 孟憲軍,史志旭,祝凱捷,等.HCV抗體酶聯免疫診斷試劑的質量評價[J].臨床輸血與檢驗,2008,10(3):245.

[8] 李雪梅,楊春茂,楊春晴,等.獻血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗TP ELISA檢測陽性與確證實驗的對比研究[J].中國輸血雜志,2013,26(6):541-543.

[9] 莊小獅,潘 菲.抗-HCV的ELISA陽性結果與RIBA確證結果比較[J].臨床血液學雜志,2015,28(2):151-153.

△通訊作者

無償獻血者；丙肝抗體；RIBA

R446

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.11.045

(收稿：2017-05-17)