亞甲基四氫葉酸還原酶C677T基因多態性與H型高血壓的關系

張瑩瑩，梁蓉，郭緒昆

(天津市胸科醫院，天津300222)

亞甲基四氫葉酸還原酶C677T基因多態性與H型高血壓的關系

張瑩瑩，梁蓉，郭緒昆

(天津市胸科醫院，天津300222)

目的探討亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)C677T基因多態性與H型高血壓的關系。方法273例高血壓患者，其中H型高血壓(血漿Hcy≥10 μmol/L)185例(觀察組)、非H型高血壓88例(對照組)。取兩組空腹靜脈血，用PCR-RFLP方法觀察MTHFR C677T基因多態性。采用logistic回歸分析MTHFR C677T基因型與H型高血壓的關系。結果觀察組、對照組MTHFR C677T基因型CC分別為31、35例，CT分別為104、45例，TT分別為50、8例，C等位基因分別為166、115例，T等位基因分別為204、61例，兩組CC、TT基因型及C、T等位基因分布比較P均<0.01。logistic回歸分析結果顯示，MTHFR C677T基因型突變(OR=2.645，95%CI：1.737～4.025，P<0.01)是H型高血壓的獨立危險因素。結論MTHFR C677T基因型TT是H型高血壓發病的獨立危險因素。

H型高血壓；亞甲基四氫葉酸還原酶；同型半胱氨酸；基因多態性

高血壓為遺傳及環境因素共同作用致病，發病機制相當復雜。高同型半胱氨酸血癥(HHcy)是高血壓、動脈粥樣硬化的重要危險因素[1]。伴有血漿同型半胱氨酸(Hcy)水平升高的原發性高血壓，定義為H型高血壓。我國有2億高血壓患者，H型高血壓患者高達75%[2]。H型高血壓患者心腦血管事件發生率約為單純高血壓患者的5倍，為正常人的25～30倍[3]。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)為Hcy代謝過程的關鍵酶，編碼該酶的基因位點突變常導致血漿Hcy水平增高。目前，國內外研究對MTHFR C677T基因多態性與HHcy及高血壓的相關性尚存在一定爭議[4～8]。本研究旨在探討MTHFR C677T基因多態性與H型高血壓發病的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年8～10月在天津市胸科醫院門診就診的高血壓患者273例，其中H型高血壓(血漿Hcy≥10 μmol/L)185例(觀察組)、非H型高血壓88例(對照組)。高血壓診斷標準為收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓>90 mmHg。排除標準：肝、腎功能不全；自身免疫性疾病；繼發性高血壓；近3個月使用過影響Hcy藥物，如葉酸、甲氨蝶呤、維生素B6、維生素B1等。觀察組男107例、女78例，年齡(63.0±8.0)歲，BMI(25.4±4.5)kg/m2，收縮壓(153.0±10.0)mmHg，舒張壓(93.5±11.0)mmHg，吸煙103例，糖尿病48例，LDL-C(2.94±1.03)mmol/L，尿酸(330.7±89.6)μmol/L，膽固醇(4.46±1.15)mmol/L，甘油三酯(1.71±1.34)mmol/L。對照組男46例、女42例，年齡(61.2±7.6)歲，BMI(24.7±5.7)kg/m2，收縮壓(120.0±11.0)mmHg，舒張壓(78.8±8.0)mmHg，吸煙45例，糖尿病30例，LDL-C(2.86±0.80)mmol/L，尿酸(294.1±72.8)μmol/L，膽固醇(4.51±0.87)mmol/L，甘油三酯(1.77±1.31)mmol/L。兩組收縮壓、舒張壓、尿酸水平比較P均<0.01。本研究經醫院倫理委員會批準，所有研究對象簽署知情同意書。

1.2 MTHFR C677T基因多態性分析 取兩組空腹靜脈血5 mL，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，采用百泰克離心柱法DP5802提取全血基因組DNA。采用PCR-RFLP方法檢測MTHFR C677T基因多態性。MTHFR基因C677T引物序列中正義鏈為5′-CCTTGAACAGGTGGAGGCC-3′，反義鏈為5′-CAAAGAAAAGCTGCGTGAT-3′。PCR反應條件：94 ℃預變性8 min，94 ℃ 60 s，62 ℃ 60 s，72 ℃ 60 s，共35個循環，最后于72 ℃再延伸7 min。反應結束，MTHFR基因擴增產物經限制性內切酶Hinf酶切(大連寶生物工程有限公司)，酶切產物經2%瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色，紫外透射燈上顯像并拍照記錄結果。根據電泳條帶確定基因型。MTHFR基因酶切后可產生3種基因型，無突變野生CC型產生195 bp片段，突變雜合子CT型產生195、130、65 bp片段，突變純合子TT型產生130、65 bp片段。

1.3 統計學方法 采用SPSS18.0統計軟件。采用Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢測樣本的群體代表性。計數資料比較用χ2檢驗；多因素分析采用二元logistic回歸。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢測結果 MTHFR C677T基因型在兩組內分布頻率符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(P均>0.05)。

2.2 兩組MTHFR C677T基因多態性比較 見表1。

表1 兩組MTHFR C677T基因多態性比較(例)

2.3 MTHFR C677T基因型與H型高血壓的關系 以是否患H型高血壓為因變量，以MTHFR C677T基因型由CC→CT→TT有序變化、尿酸水平、甘油三酯水平、性別、年齡等為自變量，帶入logistic回歸模型，分析結果顯示MTHFR C677T基因型突變(OR=2.645，95%CI：1.737～4.025，P<0.01)為H型高血壓發病的獨立預測因子。

3 討論

從1969年McCully首次明確提出Hcy是動脈粥樣硬化重要的潛在致病因素以來，Hcy與心腦血管疾病及高血壓的關系日益受到關注。研究[9～11]表明，Hcy水平升高與心血管疾病有著密切的關系，特別是高血壓合并高Hcy水平者危害更大。一般認為，空腹血漿Hcy水平為5～15 μmol/L，Hcy水平≥16 μmol/L屬于HHcy，對于高血壓患者Hcy>10 μmol/L就應該嚴格加以控制。本研究通過Hcy水平將高血壓患者分組，進行對比分析。

血漿Hcy在體內由甲硫氨酸轉甲基后生成。甲硫氨酸代謝異常會引起血漿Hcy增高。MTHFR是甲硫氨酸代謝的關鍵酶，其C677T基因點突變導致該酶的耐熱性和活性均降低約50%，導致血漿Hcy水平增高。MTHFR C677T基因點突變是否參與了HHcy的形成，并最終引發高血壓尚無定論。本研究結果顯示，兩組人群在MTHFR C677T基因的C、T等位基因分布及基因型分布均存在差異。兩組患者均有3種基因型分布，觀察組CC基因型分布低于對照組，TT基因型分布高于對照組；觀察組T等位基因頻率高于對照組，而C等位基因頻率低于對照組。提示C677T基因的點突變可能與H型高血壓的發病有關。為進一步證實MTHFR C677T基因點突變和H型高血壓發病的關系，本研究以是否患高血壓為因變量，基因型由CC→CT→TT有序變化、尿酸水平、甘油三酯水平、年齡、性別等為自變量，帶入二元logistic回歸模型，分析顯示MTHFR C677T基因型突變為H型高血壓患病的獨立預測因子。HHcy導致動脈粥樣硬化可能與以下機制有關：自身氧化作用、改變內皮細胞的基因表達、抑制一氧化氮合成酶、干擾纖溶酶原的激活位點等直接損傷血管內皮細胞；影響平滑肌細胞的遷移及增殖；誘導內皮細胞表面的血栓調節蛋白減少，導致纖維蛋白原生成纖維蛋白，增強血小板聚集功能和組織因子活性，促進血栓形成；導致脂質代謝紊亂及促進動脈粥樣硬化，促進脂質沉積于動脈壁，使泡沫細胞增加，改變動脈壁糖蛋白分子纖維化結構，促進斑塊鈣化，促進局部巨噬細胞的聚集，從而促進動脈粥樣硬化的發展[9,12]。

本研究同時發現血漿尿酸水平在兩組人群中存在差異。HHcy可導致腎血管的動脈粥樣硬化或全身血管病變，使腎臟對血漿尿酸的清除減少，因此導致血尿酸水平升高[13]。血尿酸在正常水平是抗氧化劑，但在高水平時反而起到促氧化作用，引起內皮功能障礙，加重腎損傷，進一步升高Hcy水平。因此HHcy和高尿酸血癥可以相互促進，共同加劇動脈硬化的形成。本研究進一步證實了上述假設。但Choi等[13]發現代謝綜合征患者血尿酸水平與Hcy并無相關性，考慮與入選人群年齡、糖尿病患者患病比例等因素不同有關。

本研究尚存在樣本量少等一些不足，同時血漿Hcy水平除了受MTHFR C677T代謝影響，還受到多種因素的調節，如蛋白質攝入不足、維生素B12缺乏[14]，及其他代謝酶調節[15]等，機制復雜。因此，H型高血壓發病與MTHFR C677T基因多態性的相關性還需更大規模的流行病學研究。

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CorrelationbetweenMTHFRC677TgenepolymorphismandH-typehypertension

ZHANGYingying,LIANGRong,GUOXukun

(TianjinChestHospital,Tianjin300222,China)

ObjectiveTo explore the relationship between the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) C677T gene polymorphism and H-type hypertension.MethodsA total of 273 consecutive patients with hypertension, including 185 cases of patients with H-type hypertension (observation group, Hcy≥10 μmol/L) and 88 cases of patients with non-H-type hypertension (control group), were enrolled. We collected the fasting venous blood in the two groups, then, the MTHFR C677T gene polymorphism was observed by PCR-RFLP. The relationships between the genotypes of MTHFR C677T and H-type hypertension were analyzed by Logistic regression.ResultsThere were 31 and 35 cases of MTHFR C677T CC genotype in the observation group and control group, and the number of CT genotype was 104 and 45, respectively; the number of TT genotype was 50 and 8, respectively; the number of C allele of the two groups was 166 and 115, respectively; the number of T allele of the two groups was 204 and 61, respectively; Significant difference was found in the distribution of the allelic frequencies of T and C, and CC and TT genotypes between the two groups (P<0.01). Logistic regression analysis showed that MTHFR C677T genotype mutation (OR=2.645, 95%CI: 1.737-4.025,P<0.01) was an independent risk factor for H-type hypertension.Conclusion MTHFR C677T genotype TT is an independent risk factor for H-type hypertension.

H-type hypertension; methylenetetrahydrofolate reductase; homocysteine; gene polymorphism

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.38.003

R544.1

A

1002-266X(2017)38-0008-03

天津市衛生局科技基金資助項目(2013KZ081)。

張瑩瑩(1977-)，女，博士，副主任醫師，主要研究方向為心血管疾病基礎及臨床。E-mail: 1424413836@qq.com

2017-07-13)