非小細胞肺癌組織中FGFR1基因擴增情況及其與臨床病理特征的關系

蔡靜靜，苗健龍，王雨亮，劉瑞娟

(1 山東省醫學科學院附屬濟寧市第一人民醫院，山東濟寧 272100；2 濟南大學山東省醫學科學院醫學與生命科學學院)

非小細胞肺癌組織中FGFR1基因擴增情況及其與臨床病理特征的關系

蔡靜靜1,2，苗健龍1，王雨亮1,2，劉瑞娟1

(1 山東省醫學科學院附屬濟寧市第一人民醫院，山東濟寧 272100；2 濟南大學山東省醫學科學院醫學與生命科學學院)

目的觀察成纖維生長因子受體1(FGFR1)基因在非小細胞肺癌(NSCLC)組織中的擴增情況，并探討其與臨床病理特征的關系。方法147例NSCLC患者，經無痛纖維支氣管鏡檢查或經皮肺穿刺檢查時取得腫瘤組織。采用熒光原位雜交(FISH)技術觀察組織中FGFR1基因擴增情況，采用χ2檢驗或Fisher′s確切概率法分析FGFR1基因擴增與NSCLC患者臨床病理特征的關系。結果147例NSCLC腫瘤組織中FGFR1基因擴增11例。44例鱗癌組織中FGFR1基因擴增7例，74例腺癌組織中FGFR1基因擴增4例，鱗癌與腺癌組織中FGFR1基因擴增情況比較P<0.05。73例有吸煙史患者組織中FGFR1基因擴增11例，74例無吸煙史患者組織中FGFR1基因擴增0例，兩者相比P<0.05。結論FGFR1基因在NSCLC組織中存在擴增，且有吸煙史較無吸煙史患者擴增比例高，鱗癌較腺癌患者擴增比例高。

肺腫瘤；非小細胞肺癌；成纖維生長因子受體1；基因擴增

肺癌是世界范圍內癌癥相關死亡的主要原因。根據組織學特征，肺癌分為小細胞肺癌(SCLC)和非小細胞肺癌(NSCLC)[1]。腺癌和鱗狀細胞癌是NSCLC最常見的組織學亞型，約占50%和30%[2]。成纖維細胞生長因子受體1(FGFR1)位于染色體8p12，是人類癌癥中最常見的擴增基因之一。FGFR1基因擴增是腫瘤最常見的遺傳學改變之一，可見于胃癌、口腔鱗狀細胞癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌[3,4]，但其在NSCLC中的擴增情況報道較少。因此，本研究觀察了FGFR1基因在NSCLC組織中的擴增情況，并探討其與臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2017年7月于濟寧市第一人民醫院呼吸內科住院治療的NSCLC患者147例，其中男109例、女38例，年齡(66.48±1.16)歲，有吸煙史73例，腫瘤直徑≤3 cm者55例，遠處器官轉移98例，TNM分期(根據第八版肺癌分期)Ⅰ+Ⅱ期54例、Ⅲ+Ⅳ期93例，病理類型腺癌74例、鱗癌44例、其他29例。所有入選患者符合以下納入及剔除標準。納入標準：經無痛纖維支氣管鏡或經皮肺穿刺檢查，取得病理組織，由2名病理科醫師使用蘇木精及伊紅染色證實了NSCLC的診斷；患者行FGFR1基因檢測前均未行放療及化療；病例資料完整。排除標準：患者不同意行FGFR1基因檢測；組織標本少，無法制作切片。本研究經醫學倫理委員會批準，所有患者知情同意。

1.2 FGFR1基因擴增觀察 采用免疫熒光原位雜交技術(FISH)。使用市售的FISH探針(FGFR1/CEN8；ZytoVision，Bremerhaven，Germany)。在該探針中，用綠色熒光染料和具有橙色熒光染料的著絲粒參考探針(CEN8)標記FGFR1基因座(FGFR1)。在雜交之前，將標本切成5 mm切片，脫蠟并用商業預處理試劑盒Vysis(Abbott Molecular，Des Plaines，IL，USA)進行預處理。在37 ℃的加濕室中進行過夜雜交。然后用Vysis洗滌溶液洗滌載玻片并用Vysis DAPI(Abbott Molecular)進行復染。使用裝有適當濾器的熒光顯微鏡觀察FGFR1基因和CEN8信號數。在顯微鏡下對50個腫瘤細胞核進行FGFR1基因和CEN8信號的計數，計算FGFR1與CEN8的比例。所有切片的染色結果均由2名病理科醫師在雙盲原則下分別做出判斷。FGFR1基因擴增判定標準[5]：①FGFR1信號數/CEN8信號數≥2；②每個腫瘤細胞核的FGFR1信號的平均數≥6；③腫瘤細胞中FGFR1信號數≥15個或腫瘤細胞中基因簇的百分比≥10%；④≥50%的腫瘤細胞中FGFR1信號數≥5。其中,①②③表示FGFR1高水平基因擴增，④表示FGFR1低水平基因擴增。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。計數資料比較用χ2檢驗或Fisher′s確切概率法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

147例NSCLC腫瘤組織中FGFR1基因擴增11例(8.8%)，其中鱗癌7例(15.9%)、腺癌4例(5.4%)。FGFR1基因擴增與NSCLC患者臨床病理特征的關系見表1。

表1 FGFR1基因擴增與NSCLC患者臨床病理特征的關系(例)

注：*采用Fisher′s確切概率法。

3 討論

表皮生長因子受體(EGFR)、棘皮動物微管樣蛋白4與間變性淋巴瘤激酶融合基因(EML4-ALK)、c-ros原癌基因1酪氨酸激酶(ROS1)以及RET激酶是近年來在肺癌中鑒定出的幾種致癌驅動突變基因。針對EGFR和ALK突變基因的分子靶向治療是成功的，但是攜帶EGFR突變或ALK融合基因的患者只占腺癌患者的一小部分，且EGFR突變集中在女性非吸煙患者中。目前對于肺鱗癌分子特征的研究遠遠落后于肺腺癌，因此發現NSCLC中的新型致癌驅動因素對于改善目前的治療是至關重要的。FGFR酪氨酸激酶家族由FGFR1、2、3、4組成，對控制胚胎發育及細胞增殖、分化和遷移都至關重要[3]。FGFR酪氨酸激酶家族在腫瘤發病過程中也具有重要作用，可通過基因擴增、點突變或易位導致腫瘤的發生。國內外研究[5～10]結果顯示，NSCLC患者FGFR1擴增率為6.5%～12.5%，鱗癌為10.5%～21.8%，腺癌為0～7%。本研究結果表明，147例NSCLC腫瘤組織中FGFR1擴增率為8.8%，鱗癌為15.9%，腺癌為5.4%，這與大多數研究結果是一致的。

Seo等[6]研究指出FGFR1基因擴增主要見于吸煙者，肺鱗癌患者的FGFR1基因擴增率顯著高于肺腺癌；Tran等[9]的研究表明，FGFR1基因擴增與肺癌病理類型顯著相關，與吸煙、性別、腫瘤分期等臨床特征無關；另外，Kim等[11]也指出吸煙患者的FGFR1擴增率(28.9%)明顯高于已戒煙者(2.5%)和從不吸煙的患者(0)，FGFR1基因擴增與性別、腫瘤分期、血管浸潤、胸膜受侵等無明顯相關性。本研究結果表明，FGFR1基因擴增與NSCLC患者吸煙狀態有關，并且鱗癌患者FGFR1基因擴增率顯著高于腺癌。但Kohler等[7]研究指出，FGFR1基因擴增在肺鱗癌患者中明顯高于肺腺癌，但是無統計學差異。不同結果產生的原因可能與研究的病例、FGFR1基因擴增的判定標準不同有關，但是吸煙是否可以導致FGFR1改變，吸煙和FGFR1基因改變相互獨立作用或兩者共同作用導致腫瘤發生，需要進一步研究。

目前研究表明，FGFR1基因擴增的患者傾向于不良的生存預后。Miao等[12]結合中外研究指出，有無FGFR1基因擴增的患者總生存期(OS)分別為43.9～70.8、42.4～115.0個月，無病生存期(DFS)分別為22.5～58.5、52.4～94.6個月。Seo等[6]研究表明，在單變量分析中，肺鱗癌患者的FGFR1擴增與較短的OS和較短的DFS相關，提示FGFR1擴增與預后不良相關。Tran等[9]認為，FGFR1基因拷貝數升高是NSCLC有益的預后因子。Heist等[13]認為，FGFR1與生存預后沒有關系。不同的研究得出不同的結論，分析原因可能是：參與研究的樣本太少；研究中包括不同疾病階段的患者；不同的標準用于確定FGFR1的擴增；研究中入選病例觀察時間不同。因此，大的多中心研究將有助于闡明FGFR1擴增在NSCLC預后中的意義。

綜上可見，FGFR1基因在NSCLC組織中存在擴增，且有吸煙史較無吸煙史患者擴增比例高，鱗癌較腺癌患者擴增比例高。

[1] Stinchcombe TE, Bogart J, Wigle DA， et al. Annual review of advances in lung cancer clinical research: a report for the year 2009[J]. J Thorac Oncol, 2010,5(7):935-939.

[2] Perez-Moreno P, Brambilla E, Thomas R， et al. Squamous cell carcinoma of the lung: molecular subtypes and therapeutic opportunities[J]. Clin Cancer Res， 2012,18(9):2443-2451.

[3] Itoh N, Ornitz DM. Fibroblast growth factors: frommolecular evolution to roles in development, metabolism and disease[J]. J Biochem， 2011，149(2):121-130.

[4] Wesche J, Haglund K, Haugsten EM. Fibroblast growth factorsand their receptors in cancer[J]. Biochem J, 2011,437(2):199 213.

[5] Schildhaus HU, Heukamp LC, Merkelbach-Bruse S, et al. Definition of a fluorescence in-situ hybridizationscore identifies high-and low-level FGFR1 amplification types in squamous cell lung cancer[J]. Mod Pathol, 2012，25(11):1473-1480.

[6] Seo AN, Jin Y, Lee HJ, et al. FGFR1amplifcation is associated with poor prognosis and smoking innon small cell lung cancer[J]. Virchows Arch， 2014，465(5):547-558.

[7] Kohler LH, Mireskandari M, Knosel T, et al. FGFR1 expression and genecopy numbers in human lung cancer[J]. Virchows Arch, 2012,461(1):49-57.

[8] Zhang J, Zhang L, Su X, et al. Translating the therapeutic potential ofAZD4547 in FGFR1-amplifed non-small cell lung cancer through the useof patient derived tumor xenograf PDTX models[J]. Clin Cancer Res, 2012,18(24):6658-6667.

[9] Tran TN, Selinger CI, Kohonen Corish MR, et al. Fibroblast growth factorreceptor 1 (FGFR1) copy number is an independent prognosticfactor in non small cell lung cancer[J]. Lung Cancer, 2013，81(3):462-467.

[10] Cihoric N, Savic S, Schneider S, et al.Prognostic role of FGFR1 amplifcation inearly stage non small cell lung cancer[J]. Br J Cancer， 2014，110(12):2914-2922.

[11] Kim HR, Kim DJ, Kang DR, et al. Fibroblast growth factor receptor 1 geneamplifcation is associated with poor survival and cigarete smoking dosagein patients with resected squamous cell lung cancer[J]. J Clin Oncol, 2013,31(6):731-737.

[12] Miao JL, Liu RJ, Zhou JH, et al. Fibroblast growth factor receptor 1 gene amplification in nonsmall cell lung cancer[J]. Chin Med J (English), 2016,129(23):2868-2872.

[13] Heist RS, Mino-Kenudson M, Sequist LV, et al. FGFR1 amplification in squamous cell carcinoma of the lung[J]. J Thorac Oncol， 2012,7(12):1775-1780.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.38.015

R734.2

B

1002-266X(2017)38-0051-03

山東省醫藥衛生科技發展計劃項目(2013WS0056)。

劉瑞娟(E-mail： mqb_6@163.com)

2017-04-16)