微柱凝膠技術在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的應用

劉金榮

【摘要】 目的：探討微柱凝膠技術在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的應用效果。方法：回顧性分析選取的40例ABO-HDN患兒的臨床資料，隨機取10份ABO同型紅細胞制劑的血樣，分別采用凝聚胺技術以及微柱凝膠技術開展主側交叉配血，對兩種配血方法的效果進行評估，同時對兩種配血方法同直抗試驗的相關性進行評估。結果：交叉配血共200次，微柱凝膠技術血清、放散液分別出現不和148、124次，凝聚胺技術血清、放散液分別出現不和6、10次。除凝聚胺交叉配血外，直抗陽性的血清和放散液交叉配血不合率高于直抗陰性（P<0.05）。兩種檢測技術在患兒血清和放散液交叉配血結果中比較，差異均無統計學意義（Kappa=0.019，P=0.300；Kappa=0.058，P=0.083），微柱凝膠技術靈敏度更高。結論：對新生兒開展輸血前檢查工作時，采用直接抗人球試驗進行檢測十分重要，且微柱凝膠技術在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的應用效果顯著，值得在臨床上推廣應用。

【關鍵詞】 微柱凝膠技術； ABO； 新生兒溶血癥

【Abstract】 Objective：To investigate the application effect of microcolumn gel technique in pre-transfusion test of neonatal hemolytic disease in children with ABO.Method：40 patients with ABO-HDN were selected，the clinical data of the selected subjects were analyzed retrospectively，10 samples of ABO erythrocyte preparation were randomly selected，using polybrene technique and microcolumn gel technology to carry out the main side of cross matching，the effects of the two methods were evaluated，at the same time，two kinds of matching methods with direct correlation between resistance test were evaluated.Result：Cross matching of blood 200 times，the serum and elution liquid appeared 148 times and 124 times respectively with microcolumn gel technique，polybrene technique in serum and elution liquid respectively with 6，10 times.In addition to the crossed blood of the coagulation amine，direct antibody positive serum and elution liquid crossmatching incompatibility were higher than those of direct negative resistance（P<0.05）.Comparison of two kinds of detection in serum and elution crossmatch results， there were no significant differences（Kappa=0.019，P=0.300；Kappa=0.058，P=0.083）.Microcolumn gel technique in higher sensitivity.Conclusion：To carry out inspection work on neonatal before transfusion，using direct antiglobulin test detection is very important，and the effect of microcolumn gel technique in the pre-transfusion test of neonatal hemolytic children with ABO is significant，it is worthy of clinical application.

【Key words】 Microcolumn gel technique； ABO； Neonatal hemolytic disease

First-authors address：Hanchuan Peoples Hospital，Hanchuan 432300，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.21.018

由于母源性的IgG抗體輸入到胎兒體內，同胎兒機體內的溶血性抗體產生針對性，則可能引發胎兒出現溶血病。從另一角度來看，胎兒在分娩后，其自身的免疫系統尚不完善，其機體內通常情況下不存在抗-A或者是抗-B，因此在對其開展血型鑒定時，對于反定型結果可不予考慮[1]。同時新生兒機體內的紅細胞表面所具有的血型抗原相較于成年人，其具有的表達強度也更低，故對新生兒應開展針對性的血型鑒定以及輸血策略，不應同成年人一概而論，比如在對新生兒是否患有溶血癥進行診斷時，不應該以和患兒血型同型的輸血或換血原則，而是應該以相容性的原則[2]。IgG抗體可存在于游離血清中，同時也能夠和溶血病患兒體內的紅細胞進行結合，所以在對溶血病進行診斷時，需要對患兒體內是否存在IgG抗體進行檢測，所采用的診斷試驗包括三部分，分別為直接抗人球蛋白試驗、游離血清以及抗體釋放實驗[3]。雖然目前國際輸血指標通常將嬰兒按照年齡是否超過4個月劃分為不同的輸血年齡段，采取相應的輸血策略，不過在我國卻并未作出明確的規定，大部分臨床醫生如診斷出新生兒存在貧血癥狀，在對其制定治療措施時，主要依靠同型輸血原則，同時以此為其開展相應的輸血前檢驗，并未對患兒是否存在溶血病進行有效的檢驗和診斷[4]。在對新生兒開展輸血操作前，對其進行相應的檢驗工作，可對其機體內的抗A或是抗B進行有效的診斷，但該類診斷主要通過交叉配血檢測來完成，其具備的準確性很大程度上受到配血方法靈敏度的影響，因此做好輸血前的檢驗工作，對于新生兒的輸血過程的安全保障具有重要作用[5]。本次研究將2015年1月-2016年1月設定為研究時間段，取該時期內本院收治的ABO-HDN患兒40例，探討微柱凝膠技術在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的應用效果，現將研究結果報告如下。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究將2015年1月-2016年1月設定為研究時間段，取該時期內本院收治的ABO-HDN患兒40例，均開展溶血病3項試驗，最終病情得以明確診斷。其中男20例，女20例，出生時間最短為1 d，最長為4 d，平均（2.3±0.5）d。

1.2 方法 回顧性分析本次研究入選患兒的臨床資料，包括其一般資料以及3項診斷試驗（直接抗人球蛋白試驗、游離血清以及抗體釋放實驗）資料，并隨機取10份ABO同型紅細胞制劑的血樣以及其血清和紅細胞放散液，進行主側交叉配血，血樣納入標準為：通過對血型開展復查，結果顯示正反定保持一致，正定所具有的凝集強度在3+及以上，反定所具備的凝集強度在2+及以上。采用微柱凝膠法（美國Gceoped Lokka fromcsico 抗人球蛋白卡）和凝聚胺介質（上海閣侖美有限責任公司）兩種交叉配血方法開展檢測，在進行檢測操作時，操作步驟按照試劑說明書嚴格進行。

1.3 統計學處理 四個表計數資料采取Pearson卡方檢驗或Fisher精確檢驗；交叉配血結果采用Kappa一致性檢驗，如K<0，則一致性極差，0～0.20為微弱，0.21～0.40為弱，0.41～0.60為中度，0.61～0.80為高度，0.81～1.00為極強。

2 結果

2.1 配血結果 交叉配血共200次，微柱凝膠技術血清、放散液分別出現不和148、124次，凝聚胺技術血清、放散液分別出現不和6、10次，見表1。

2.2 直抗類型與交叉配血結果 除凝聚胺交叉配血外，直抗陽性的血清和放散液交叉配血不合率高于直抗陰性，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 血清交叉配血結果比較 兩種檢測技術的血清交叉配血結果比較，差異無統計學意義（Kappa=0.019，P=0.300），見表3。

2.4 放散液交叉配血結果比較 兩種檢測技術的放散液交叉配血結果比較，差異無統計學意義（Kappa=0.058，P=0.083），見表4。

3 討論

IgG抗體可存在于游離血清中，同時也能夠和溶血病患兒體內的紅細胞進行結合，所以在對溶血病進行診斷時，需要對患兒體內是否存在IgG抗體進行檢測，所采用的診斷試驗包括三部分，分別為直接抗人球蛋白試驗、游離血清以及抗體釋放實驗[6]。在對溶血病患兒開展輸血前，對其開展的交叉配血檢查內容需包含其游離血清以及紅細胞放散液，這是由于對患兒的游離血清開展交叉配血，可對其血液中所具有的溶血性抗體，同進行輸注的紅細胞之間的不相容性進行有效的反映，對患兒的放散液開展交叉配血試驗，能夠對患兒機體內的結合于細胞上的溶血性抗體，同進行輸注的紅細胞之間的不相容性進行有效的反映[7-9]。通過本次研究結果中的表1可以發現，僅開展血清交叉配血試驗，可對74%的患兒中存在的配合不合進行有效檢測，通過開展血清聯合放散液進行交叉配血試驗，可對79%的患兒中存在的配合不合進行有效檢測，也說明了在對ABO-HDN患兒開展輸血前檢測時，將患兒的血清以及其放散液進行聯合檢測是有必要的，可使得患兒的交叉配血的安全性得以有效提高[10]。從另一方面來看，每個患兒由于自身機體存在的差異，導致其機體具有的紅細胞血型抗原表達強度存在著差異，同時其機體內由于被動輸入而存在的溶血性抗體的數量以及溶血性抗體的性質也存在著不同程度的差異，所以在對患兒開展交叉配血檢測時，其檢測的準確性會明顯的受到所采用的配血方法所具有的靈敏度的影響[11-12]。雖然目前臨床上主要推薦應用抗球蛋白技術，但在我國實際的臨床應用過程中，采用的凝聚胺技術可取得何種效果，仍舊有著較大的爭議[13]。通過本次研究結果顯示，在對ABO-HDN陽性患兒血清開展檢測時，相較于凝聚胺技術，微柱凝膠技術所具備的準確率明顯更高（74% vs 3%），在對ABO-HDN陽性患兒放散液開展檢測時，相較于凝聚胺技術，微柱凝膠技術所具備的準確率明顯更高（62% vs 5%），同時在對患兒的血清以及放散液開展檢測時，兩種檢測方法并未出現陰性或陽性檢測結果不一致的情況，由此可知，微柱凝膠技術所具備的檢測靈敏度明顯更高，因此在對存在溶血病的患兒開展輸血前檢測時，微柱凝膠技術明顯優于凝聚胺技術[14]。不過需要注意一點，即便應用了微柱凝膠技術，也不能確保檢測的準確率達到100%，提示在對可能存在溶血病的患兒開展檢測時，如果采用了和患兒具有同型的紅細胞制劑，則還是仍有可能發生交叉配血不合漏檢，所以臨床檢驗中不能將交叉配血試驗結果呈陰性作為檢測的金標準[15-17]。所以筆者認為，在對新生兒進行輸血時應遵循的策略為：當新生兒存在血液疾病或相關疾病時，如果需要對患兒開展輸血治療，則首先為患兒開展HDN 3項試驗，以此來對患兒是否存在ABO-HDN進行有效的檢測，并根據檢測的結果，來對患兒的輸血類型，包括同型輸血以及相容性輸血進行確定，從而使患兒的輸血安全得到有效的保障。如果并未對患兒開展ABO-HDN檢測，不過由于ABO血型抗原會在成人的紅細胞上發生較強的表達，同時對于年齡小于4個月的新生兒而言，其發生母源性抗A以及抗B的機率仍舊存在，所以對于該類患兒，可采用O型洗滌紅細胞以及AB型血漿作為首選，開展相容性輸血。

本研究結果顯示，ABO-HDN患兒所具有的DAT陽性率為40.0%（16/40），不過通過表2可發現，DAT陽性的溶血病患兒以及DAT陰性的溶血病患兒，對其血清以及放散液采用微柱凝膠技術開展交叉配血的結果同放散液采用凝聚胺技術開展交叉配血的結果比較，差異有統計學意義（P<0.05）。即開展同型血交叉配血的不合率上，DAT陽性患兒高于DAT陰性患兒，提示在對新生兒開展輸血前檢查工作時，采用直接抗人球試驗進行檢測是十分重要的，其可對新生兒體內的結合于細胞的溶血性抗體進行有效的檢測[18-20]。endprint

綜上所述，對新生兒開展輸血前檢查工作時，采用直接抗人球試驗進行檢測十分重要，且微柱凝膠技術在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的應用效果顯著，值得在臨床上推廣應用。

參考文獻

[1]周雪麗，閻石，李鵬，等.微柱凝膠卡式法Coombs試驗在自身免疫性溶血性貧血診斷中的應用[J].中華血液學雜志，2012，33（1）：31-33.

[2]賁燕華，金勇，紀桂香，等.探討標本因素對微柱凝膠卡配血法的影響[J].臨床輸血與檢驗，2014，16（2）：192-194.

[3]王文濤，楊霄.手工微柱凝膠免疫檢驗法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應用[J].世界臨床醫學，2016，10（6）：235.

[4]王生忠，王佑清，周本霞，等.微柱凝膠免疫檢測技術在新生兒溶血病檢測中的應用[J].國際檢驗醫學雜志，2014，35（10）：1366，1373.

[5]吳昌松，王啟春.6種不同實驗名稱微柱凝膠試劑卡臨床應用淺析[J].河南醫學高等專科學校學報，2017，29（1）：66-68.

[6]袁曉華，胡惠萍.國產微柱凝膠卡對血型鑒定的結果分析[J].國際檢驗醫學雜志，2013，34（12）：1585-1586.

[7]常靜秋.兩種微柱凝膠卡和試管法在臨床血型鑒定中的應用評價[J].中國繼續醫學教育，2015，18（25）：27-29.

[8]周鵬，朱倩雯.低離子溶液不同保存方法對微柱凝膠配血試驗的影響[J].國際檢驗醫學雜志，2014，35（7）：912-914.

[9]賈彩虹，姚紅，周永安，等.微柱凝膠卡在多發性骨髓瘤患者ABO血型及配血中的應用[J].臨床醫藥實踐，2016，5（2）：114-115.

[10]宋惠英.微柱凝膠抗球蛋白法與常規抗球蛋白法用于紅細胞同種抗體檢測價值對比[J].中國衛生產業，2014，16（28）：180-181.

[11]蘇宇清，喻瓊，梁延連，等.微柱凝膠抗球蛋白技術檢測紅細胞同種抗體能力的研究[J].現代檢驗醫學雜志，2011，26（6）：73-75.

[12]康寶利.手工微柱凝膠免疲檢驗法在AB0、RhD血型抗原鑒定中的應用[J].心理醫生，2016，22（19）：97-98.

[13]黃文彩，梁鑒波，付文金，等.Ficoll分離液在Sephadex G-100微柱凝膠血型卡中的應用[J].國際醫藥衛生導報，2014，20（14）：2145-2148.

[14]黃麗.全自動微柱凝膠免疫分析儀在血型鑒定中的臨床應用研究[J].醫藥前沿，2016，6（14）：172-173.

[15]李勇，王雪明.微柱凝膠在放散實驗中應用[J].中國血液流變學雜志，2013，11（3）：551-552.

[16]劉凌，李流嬌，莫水群，等.微柱凝膠直接抗人球蛋白試驗對自身免疫性溶血性貧血診斷的應用[J].中國醫藥，2012，7（4）：426-427.

[17]李健，劉喜龍，譚為，等.手工微柱凝膠免疫檢驗法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應用[J].當代醫學，2016，22（10）：27-28.

[18]周雪蓮.微柱凝膠試驗在冷凝集素檢測中的應用[J].中國醫藥導刊，2012，14（3）：470-471，447.

[19]閆朝春，蔣玲，陳麗梅，等.導致微柱凝膠卡式交叉配血試驗假陽性結果的原因分析[J].國際檢驗醫學雜志，2011，32（15）：1737-1738.

[20]黃會金.微柱凝膠卡式法和試管抗人球蛋白法在新生兒ABO溶血三項試驗中的效果觀察[J].中國當代醫藥，2015，20（18）：129-131.

（收稿日期：2017-04-24） （本文編輯：張爽）endprint