人參皂苷CK聯(lián)合5-氟尿嘧啶對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖、凋亡及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響Δ

崔江河，韓光宇，何光梅，尹媛媛，馬娜，劉琳（.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院消化科，黑龍江牡丹江570；2.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院普外科，黑龍江牡丹江570；.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院泌尿外科，黑龍江牡丹江570）

人參皂苷CK聯(lián)合5-氟尿嘧啶對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖、凋亡及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響Δ

崔江河1＊，韓光宇2#，何光梅3，尹媛媛1，馬娜1，劉琳1（1.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院消化科，黑龍江牡丹江157011；2.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院普外科，黑龍江牡丹江157011；3.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院泌尿外科，黑龍江牡丹江157011）

目的：研究人參皂苷CK聯(lián)合5-氟尿嘧啶（5-FU）對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖、凋亡及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的影響。方法：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1細(xì)胞分為空白對(duì)照組、人參皂苷CK組（30 mg/L）、5-FU組（25 mg/L）和聯(lián)用組（人參皂苷CK 30 mg/L+5-FU 25 mg/L）。采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞作用24、48、72 h后的細(xì)胞增殖抑制率，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)作用48 h后的細(xì)胞凋亡率，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)作用24、48、72、96 h后細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)，Western blot法檢測(cè)作用48 h后細(xì)胞中波形蛋白、N-鈣黏蛋白、E-鈣黏蛋白、蛋白激酶（Akt）及磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表達(dá)。結(jié)果：人參皂苷CK、5-FU及其二者聯(lián)用對(duì)細(xì)胞的增殖均有抑制作用；與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組各作用時(shí)間點(diǎn)的早期和晚期凋亡率、E-鈣黏蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.05），纖連蛋白、波形蛋白、N-鈣黏蛋白表達(dá)水平和p-Akt/Akt水平均明顯降低（P＜0.05），其中聯(lián)用組上述指標(biāo)效果均優(yōu)于人參皂苷CK組和5-FU組（P＜0.05）。結(jié)論：人參皂苷CK和5-FU均可抑制PANC-1細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制EMT，該作用可能與抑制磷脂酰肌醇3-激酶/Akt通路有關(guān)；且二者聯(lián)用效果更好。

人參皂苷CK；5-氟尿嘧啶；人胰腺癌PANC-1細(xì)胞；聯(lián)合給藥；增殖；凋亡；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

胰腺癌為多發(fā)的惡性消化系統(tǒng)腫瘤，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。由于早期診斷存在困難，多數(shù)患者在確診時(shí)就已出現(xiàn)周圍器官轉(zhuǎn)移和侵襲，手術(shù)切除率不到30%，5年生存率低于5%[1]。而全身化療能夠根除機(jī)體內(nèi)殘余的腫瘤細(xì)胞，從而提高外科手術(shù)的治愈率。因此，化療在胰腺癌的治療中占有重要地位。5-氟尿嘧啶（5-FU）是臨床上治療胰腺癌的常用藥物之一，療效確切，但容易引起骨髓抑制、外周神經(jīng)毒性、口腔黏膜炎等較大的毒副作用，加之耐藥性的出現(xiàn)，限制了其臨床應(yīng)用范圍的擴(kuò)大及療效的進(jìn)一步提高[2]。人參皂苷CK為人參皂苷在生物體內(nèi)的活性轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，具有抗腫瘤、保肝、提高免疫力、抗炎及降血糖等多種藥理活性[3]。有研究表明，中藥聯(lián)合傳統(tǒng)化療藥物能顯著降低化療藥物的毒副反應(yīng)，提高抗腫瘤療效[4-5]。因此，本研究擬通過(guò)人參皂苷CK聯(lián)合5-FU，探討聯(lián)合用藥對(duì)人胰腺癌細(xì)胞PANC-1的增殖、凋亡及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的影響，以期為臨床中藥聯(lián)合傳統(tǒng)化療藥物治療胰腺癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

TDL-50B型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；MCO-5AC型細(xì)胞培養(yǎng)箱（日本Sanyo公司）；550型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；EPICS XL/XL-MCL型流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman公司）；DYCZ-24DN型蛋白電泳及轉(zhuǎn)印儀（北京六一儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

人參皂苷CK（四川維克奇生物科技有限公司，批號(hào)：20160128，純度：＞98%）；5-FU注射液（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號(hào)：151415，規(guī)格：0.25 g∶10 mL）；胎牛血清、RPMI 1640培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco公司）；MTT檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Amresco公司）；膜聯(lián)蛋白Ⅴ-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（AnnexinⅤ-FITC/PI）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（南京凱基生物科技發(fā)展有限公司）；纖連蛋白酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）檢測(cè)試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）；鼠源波形蛋白、N-鈣黏蛋白、E-鈣黏蛋白、蛋白激酶（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）及甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）多克隆抗體（美國(guó)Cell Signaling Technology公司）；辣根過(guò)氧化物酶（HPR）標(biāo)記的二抗（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1.3 細(xì)胞

人胰腺癌PANC-1細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。

2 方法

2.1 分組與給藥

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1細(xì)胞分為4組，即空白對(duì)照組、人參皂苷CK組（30 mg/L）、5-FU組（25 mg/L）和聯(lián)用組（人參皂苷CK 30 mg/L+5-FU 25 mg/L），每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。空白對(duì)照組細(xì)胞僅加入完全培養(yǎng)基，其余組細(xì)胞加入含相應(yīng)藥物的完全培養(yǎng)基。

2.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率

常規(guī)方法培養(yǎng)PANC-1細(xì)胞，至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，用0.25%的胰蛋白酶消化，制備單細(xì)胞懸液，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔1×104個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)24 h至細(xì)胞完全貼壁后，棄培養(yǎng)液，按“2.1”項(xiàng)下分組加入相應(yīng)完全培養(yǎng)基，孵育24、48、72 h后，每孔加入10 μL MTT（5 mg/mL）溶液，繼續(xù)孵育4 h。用酶標(biāo)儀檢測(cè)492 nm波長(zhǎng)處光密度（OD），按公式計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，細(xì)胞增殖抑制率（%）＝（1－OD給藥組/OD空白對(duì)照組）×100%。

2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率

將PANC-1細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，每孔1×106個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)24 h至細(xì)胞完全貼壁后，棄培養(yǎng)液，按“2.1”項(xiàng)下分組并加入相應(yīng)完全培養(yǎng)基，孵育48 h。3 000×g離心10 min，收集細(xì)胞并重懸于預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（PBS）中；3 000×g離心10 min，加入預(yù)冷的75%乙醇，固定30 min；3 000×g離心10 min，加入5 μL AnnexinⅤ-FITC/PI溶液，在4℃條件下孵育20 min后，補(bǔ)加400 μL PBS溶液。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)并采用Cell Quest軟件分析早期和晚期細(xì)胞凋亡情況。

2.4 ELISA法檢測(cè)細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)

將PANC-1細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，每孔1×106個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)24 h至細(xì)胞完全貼壁后，棄培養(yǎng)液，按“2.1”項(xiàng)下分組并加入相應(yīng)完全培養(yǎng)基，分別孵育24、48、72、96 h。收集細(xì)胞上清液，按照ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟進(jìn)行裂解、離心，檢測(cè)各組細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)水平。

2.5 Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中波形蛋白、N-鈣黏蛋白、E-鈣黏蛋白、Akt和p-Akt蛋白表達(dá)

將PANC-1細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，每孔1×106個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)24 h至細(xì)胞完全貼壁后，棄培養(yǎng)液，按“2.1”項(xiàng)下分組并加入相應(yīng)完全培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育48 h。3 000×g離心10 min，收集細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解緩沖液，劇烈振蕩30 s混勻，于冰上放置30 min；12 000×g離心10 min，取上清液，分裝，存放于－80℃冰箱中，備用。取等量蛋白，常規(guī)方法行10%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）及半干法轉(zhuǎn)膜后，分別加入適量鼠源波形蛋白、N-鈣黏蛋白、E-鈣黏蛋白、Akt、p-Akt和GAPDH多克隆抗體（1∶500），在4℃條件下孵育24 h；加入HPR標(biāo)記的二抗（1∶2 000），常溫下孵育2 h。增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法顯色，X線曝光顯影。圖像分析儀掃描后，采用IPP 6.0軟件分析各條帶平均光密度值，蛋白相對(duì)表達(dá)水平分別以波形蛋白/GAPDH（內(nèi)參）、N-鈣黏蛋白/GAPDH、E-鈣黏蛋白/GAPDH、p-Akt/Akt的平均光密度比值表示。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 PANC-1細(xì)胞增殖抑制率

人參皂苷CK、5-FU及其二者聯(lián)用對(duì)細(xì)胞增殖均有抑制作用。與人參皂苷CK組和5-FU組比較，聯(lián)用組細(xì)胞作用24、48、72 h后的細(xì)胞增殖抑制率均顯著升高（P＜0.05）。各組細(xì)胞增殖抑制率的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 PANC-1細(xì)胞凋亡率

與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組細(xì)胞作用48 h后早、晚期細(xì)胞凋亡率均顯著升高（P＜0.05）。與人參皂苷CK組和5-FU組比較，聯(lián)用組細(xì)胞的早、晚期細(xì)胞凋亡率均顯著升高（P＜0.05）。各組細(xì)胞凋亡率的流式圖見(jiàn)圖1，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 各組細(xì)胞增殖抑制率的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab1 Determination results of cell proliferation inhibition rate in each group（±s，n＝3）

表1 各組細(xì)胞增殖抑制率的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab1 Determination results of cell proliferation inhibition rate in each group（±s，n＝3）

注：與人參皂苷CK組比較，#P＜0.05；與5-FU組比較，ΔP＜0.05Note：vs.ginsenoside CK group，#P＜0.05；vs.5-FU group，ΔP＜0.05

增殖抑制率，%組別人參皂苷CK組5-FU組聯(lián)用組48 h 19.84±2.63 27.13±3.42#49.85±5.61#Δ 24 h 9.75±1.25 17.15±2.13#30.42±4.30#Δ 72 h 22.28±3.09 36.47±4.78#64.88±8.54#Δ

圖1 各組細(xì)胞凋亡率的流式圖Fig1 Flow cytometry chart of cell apoptosis rate in each group

表2 各組細(xì)胞凋亡率的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab2 Determination results of cell apoptosis rate in each group（±s，n＝3）

表2 各組細(xì)胞凋亡率的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab2 Determination results of cell apoptosis rate in each group（±s，n＝3）

注：與空白對(duì)照組比較，＊P＜0.05；與人參皂苷CK組比較，#P＜0.05；與5-FU組比較，ΔP＜0.05Note：vs.blank control group，＊P＜0.05；vs.ginsenoside CK group，#P＜0.05；vs.5-FU group，ΔP＜0.05

晚期2.39±0.25 7.28±1.57＊9.34±1.32＊#15.06±2.40＊#Δ組別空白對(duì)照組人參皂苷CK組5-FU組聯(lián)用組細(xì)胞凋亡率，%早期3.22±0.47 15.51±2.34＊19.62±3.68＊#41.19±6.64＊#Δ

3.3 PANC-1細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)水平

與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組細(xì)胞作用24、48、72、96 h后細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05），且隨著作用時(shí)間的增加，表達(dá)水平逐漸降低。與人參皂苷CK組和5-FU組比較，聯(lián)用組細(xì)胞作用24、48、72、96 h后細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05）。各組細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab3 Determination results of fibronectin expression in cells in each group（±s，n＝3）

表3 各組細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab3 Determination results of fibronectin expression in cells in each group（±s，n＝3）

注：與空白對(duì)照組比較，＊P＜0.05；與人參皂苷CK組比較，#P＜0.05；與5-FU組比較，ΔP＜0.05Note：vs.blank control group，＊P＜0.05；vs.ginsenoside CK group，#P＜0.05；vs.5-FU group，ΔP＜0.05

組別空白對(duì)照組人參皂苷CK組5-FU組聯(lián)用組纖連蛋白，ng/mL 96 h 68.76±8.21 48.84±5.29＊35.21±3.18＊#28.66±4.34＊#Δ 24 h 74.50±8.33 66.64±8.34＊63.58±7.05＊52.82±7.80＊#Δ 48 h 69.25±7.59 60.02±6.12＊52.92±6.11＊#43.40±5.53＊#Δ 72 h 70.38±8.96 54.07±6.24＊45.49±6.06＊#32.48±4.13＊#Δ

3.4 PANC-1細(xì)胞中波形蛋白、N-鈣黏蛋白及E-鈣黏蛋白表達(dá)水平

與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組細(xì)胞作用48 h后細(xì)胞中波形蛋白、N-鈣黏蛋白表達(dá)水平均顯著降低，E-鈣黏蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）。與人參皂苷CK組和5-FU組比較，聯(lián)用組細(xì)胞作用48 h后細(xì)胞中波形蛋白、N-鈣黏蛋白表達(dá)水平顯著降低，E-鈣黏蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）。各組細(xì)胞中波形蛋白、N-鈣黏蛋白及E-鈣黏蛋白表達(dá)的電泳圖見(jiàn)圖2，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

圖2 各組細(xì)胞中波形蛋白、N-鈣黏蛋白及E-鈣黏蛋白表達(dá)的電泳圖Fig2 Electrophoresis charts of expressions of vimentin，N-cadherin and E-cadherin in cells in each group

表4 各組細(xì)胞中波形蛋白、N-鈣黏蛋白及E-鈣黏蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab4 Determination results of expressions of vimentin，N-cadherin and E-cadherin in cells in each group（±s，n＝3）

表4 各組細(xì)胞中波形蛋白、N-鈣黏蛋白及E-鈣黏蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果（±s，n＝3）Tab4 Determination results of expressions of vimentin，N-cadherin and E-cadherin in cells in each group（±s，n＝3）

注：與空白對(duì)照組比較，＊P＜0.05；與人參皂苷CK組比較，#P＜0.05；與5-FU組比較，ΔP＜0.05Note：vs.blank control group，＊P＜0.05；vs.ginsenoside CK group，#P＜0.05；vs.5-FU group，ΔP＜0.05

E-鈣黏蛋白/GAPDH 0.22±0.04 0.30±0.05＊0.35±0.06＊#0.43±0.06＊#Δ組別空白對(duì)照組人參皂苷CK組5-FU組聯(lián)用組波形蛋白/GAPDH 0.45±0.06 0.33±0.04＊0.26±0.04＊#0.21±0.03＊#Δ N-鈣黏蛋白/GAPDH 0.62±0.08 0.51±0.06＊0.38±0.05＊#0.29±0.05＊#Δ

3.5 PANC-1細(xì)胞中Akt、p-Akt蛋白表達(dá)

空白對(duì)照組、人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組細(xì)胞作用48 h后細(xì)胞中p-Akt/Akt分別為0.45±0.06、0.27±0.02、0.25±0.02、0.18±0.01。與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組細(xì)胞中p-Akt/Akt均顯著降低（P＜0.05）。與人參皂苷CK組和5-FU組比較，聯(lián)用組細(xì)胞中p-Akt/Akt顯著降低（P＜0.05）。各組細(xì)胞中Akt、p-Akt蛋白表達(dá)的電泳圖見(jiàn)圖3。

4 討論

人參皂苷是人參的主要活性成分，目前已分離、鑒定出40余種單體化合物，而人參皂苷CK為二醇型皂苷，是其他類型的二醇型人參皂苷在腸道內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物，在天然人參中并不存在。研究表明，人參的許多生物活性都與人參皂苷CK有關(guān)，如人參皂苷Rb1在腸道中很少被吸收，只是以“天然活性前體”形式存在，而人參皂苷CK才是被吸收和發(fā)揮生物學(xué)作用的真正活性物質(zhì)[6]。與其他人參皂苷單體比較，人參皂苷CK的抗腫瘤活性和增強(qiáng)免疫活性是最強(qiáng)的，且由于其具有較好的水溶性，可以直接制成注射劑發(fā)揮作用，因此得到了研究者越來(lái)越多的關(guān)注[7]。人參皂苷CK的抗腫瘤作用報(bào)道較多，其對(duì)膀胱癌、鼻咽癌、肝細(xì)胞癌、乳腺癌及結(jié)腸癌等均具有一定的抑制作用，而對(duì)胰腺癌的抑制作用及與現(xiàn)有化療藥物聯(lián)用的相關(guān)研究較少[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組的細(xì)胞增殖抑制率均顯著升高，且聯(lián)用組高于人參皂苷CK組和5-FU組。有研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷CK可以通過(guò)降低線粒體跨膜電位、增加細(xì)胞色素C釋放、激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）等途徑，誘導(dǎo)前列腺癌PC-3細(xì)胞及人白血病HL-60細(xì)胞發(fā)生凋亡[9]。由此可見(jiàn)，人參皂苷CK的抗腫瘤作用主要是通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)的。本研究結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組PANC-1細(xì)胞的早、晚期凋亡率均顯著升高，且聯(lián)用組高于人參皂苷CK組和5-FU組。以上結(jié)果表明，人參皂苷CK、5-FU均具有抑制PANC-1細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡作用，而聯(lián)用的效果強(qiáng)于單用。

EMT是以上皮細(xì)胞特性喪失及間質(zhì)細(xì)胞特性獲得為特征，是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲及轉(zhuǎn)移的重要依據(jù)。纖連蛋白是參與細(xì)胞和基質(zhì)以及細(xì)胞與細(xì)胞之間黏附、遷移的細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白。在EMT進(jìn)程中，纖連蛋白表達(dá)明顯升高[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組的PANC-1細(xì)胞中纖連蛋白表達(dá)水平均顯著降低，且聯(lián)用組低于人參皂苷CK組和5-FU組。波形蛋白、N-鈣黏蛋白和E-鈣黏蛋白是EMT進(jìn)程的重要標(biāo)志性分子，在EMT進(jìn)程中，波形蛋白、N-鈣黏蛋白表達(dá)增加，E-鈣黏蛋白表達(dá)降低[11]。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組PANC-1細(xì)胞中波形蛋白及N-鈣黏蛋白表達(dá)水平均顯著降低，而E-鈣黏蛋白表達(dá)水平顯著升高，且聯(lián)用組效果較人參皂苷CK組和5-FU組更明顯。以上結(jié)果表明，人參皂苷CK和5-FU均具有抑制EMT的作用，總體上兩者聯(lián)用效果強(qiáng)于單用。

在腫瘤細(xì)胞的增殖與凋亡過(guò)程中，磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信號(hào)通路扮演著重要角色，多數(shù)腫瘤細(xì)胞中的PI3K/Akt信號(hào)通路處于活化狀態(tài)[12]。PI3K可促使Akt發(fā)生磷酸化，當(dāng)PI3K/Akt信號(hào)通路處于活化狀態(tài)時(shí)，Akt的磷酸化形式p-Akt的比例升高，反之降低。多種化療藥物均可以通過(guò)阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路而發(fā)揮抗腫瘤作用[13]。此外，PI3K/Akt信號(hào)通路的激活可以促進(jìn)EMT的發(fā)生。研究證實(shí)，抑制PI3K/Akt信號(hào)通路的激活可以抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞和BT-20細(xì)胞的EMT進(jìn)程[14-15]。本研究發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，人參皂苷CK組、5-FU組和聯(lián)用組細(xì)胞中p-Akt/Akt均顯著降低，且聯(lián)用組低于人參皂苷CK組和5-FU組。以上結(jié)果提示，抑制PANC-1細(xì)胞的PI3K/Akt信號(hào)通路活化可能是人參皂苷CK、5-FU及二者聯(lián)合給藥發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及抑制EMT進(jìn)程的潛在機(jī)制之一。

綜上所述，人參皂苷CK和5-FU對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞均具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡及抑制EMT的作用，該作用可能與抑制PI3K/Akt信號(hào)通路活化有關(guān)，且兩者聯(lián)用時(shí)效果更好。

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Effects of Ginsenoside CK Combined with 5-Fluorouracil on the Proliferation，Apoptosis and Epithelial Mesenchymal Transition of Human Pancreatic Cancer PANC-1 Cells

CUI Jianghe1，HAN Guangyu2，HE Guangmei3，YIN Yuanyuan1，MA Na1，LIU Lin1（1.Dept.of Gastroenterology，Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical University，Heilongjiang Mudanjiang 157011，China；2.Dept.of General Surgery，Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical University，Heilongjiang Mudanjiang 157011，China；3.Dept.of Urology Surgery，Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical University，Heilongjiang Mudanjiang 157011，China）

OBJECTIVE：To study the effects of ginsenoside CK combined with 5-fluorouracil（5-FU）on the proliferation，apoptosis and epithelial mesenchymal transition（EMT）of human pancreatic cancer PANC-1 cells.METHODS：PANC-1 cells of logarithmic growth phase were randomly divided into blank control group，ginsenoside CK group（30 mg/L），5-FU group（25mg/L）and combination group（ginsenoside CK 30 mg/L+5-FU 25 mg/L）.MTT method was used to detect the cell proliferation inhibition rate in each group after 24，48，72 h；flow cytometry was used to detect the cell apoptosis rate after 48 h；enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the fibronectin expression in cells after 24，48，72，96 h；and Western blot was used to detect the expressions of vimentin，N-cadherin，E-cadherin，protein kinase（Akt）and phosphorylated Akt（p-Akt）protein in cells after 48 h.RESULTS：Compared with blank control group，the cell proliferation inhibition rate，early and late apoptotic rates，protein expression level of E-cadherin in ginsenoside CK group，5-FU group and combination group were obviously increased（P＜0.05），while the protein expression levels of fibronectin，vimentin，N-cadherin，and p-Akt/Akt levels were obviously decreased（P＜0.05）；the effects of above-mentioned indexes in combination group were superior to ginsenoside CK group and 5-FU group（P＜0.05）.CONCLUSIONS：Both ginsenoside CK and 5-FU can inhibit the proliferation of PANC-1 cells，induce their apoptosis and inhibit EMT，which may be associated with inhibiting phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway.In addition，the combination of ginsenoside CK and 5-FU can produce a better effect.

Ginsenoside CK；5-fluorouracil；Human pancreatic cancer PANC-1 cells；Combined administration；Proliferation；Apoptosis；Epithelial mesenchymal transition

R361+.3

A

1001-0408（2017）31-4388-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.31.18

牡丹江市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目（No.Z2015s0055）

＊主治醫(yī)師。研究方向：消化系統(tǒng)疾病的診斷及治療。電話：0453-6582800。E-mail：18215039@qq.com

#通信作者：主治醫(yī)師。研究方向：普外科臨床與科研。電話：0453-6582800。E-mail：hanguangyu1981@163.com

2017-03-06

2017-06-09）

（編輯：鄒麗娟）