五種常用消毒劑對金黃色葡萄球菌的殺滅效果評價

董 霞, 李培群, 羅 東, 劉 濤, 萬臘根, 陳開森

(1 南昌大學第一附屬醫院，江西 南昌 330006； 2 南昌大學公共衛生學院，江西 南昌 330006)

·論著·

五種常用消毒劑對金黃色葡萄球菌的殺滅效果評價

董 霞1, 2, 李培群2, 羅 東1, 劉 濤1, 萬臘根1, 陳開森1

(1 南昌大學第一附屬醫院，江西 南昌 330006； 2 南昌大學公共衛生學院，江西 南昌 330006)

目的研究醫院常用消毒劑乙醇、三氯片、碘伏、戊二醛、愛護佳免洗手消毒劑對醫院不同來源金黃色葡萄球菌的殺滅效果，為有效控制醫院感染提供科學依據。方法收集南昌大學第一附屬醫院臨床送檢標本和醫護人員手及醫院內周邊環境物體表面采集的標本分離的金黃色葡萄球菌共48株。通過消毒劑與細菌直接接觸作用，研究消毒劑在不同稀釋濃度、不同作用時間、體外殺滅不同來源的金色葡萄球菌的效果。結果常規使用消毒劑如5 g/L碘伏、20 g/L戊二醛和愛護佳免洗手消毒劑(0.5%葡萄糖酸氯己定+70%乙醇)常溫下作用5 min對不同來源金黃色葡萄球菌的殺滅率為100%；70%乙醇和1 g/L三氯片常溫下作用5 min對不同來源金黃色葡萄球菌的殺滅率為96.5%～99.8%；但碘伏、戊二醛和免洗手消毒劑被高度稀釋后即使提高作用時間但仍不能完全殺滅金黃色葡萄球菌。結論該院常規使用消毒劑能滿足臨床殺菌效果，但需要不斷地監測消毒劑的有效濃度，防止殺菌能力降低。

金黃色葡萄球菌; 消毒劑; 殺菌作用

金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，SAU) 是臨床上重要的病原菌，?？蓪е聞撁鎮?、皮膚軟組織及血流感染[1-2]。該菌適應能力強，?？纱嬖谟谌梭w體表及各類環境中，例如醫院內的水、空氣及物體表面等。由于消毒劑在手部、醫療器械、物體表面及空氣清潔中的頻繁使用，環境分離菌可對多種消毒劑產生抗性，表現為現有的消毒劑及消毒方法可能不能完全殺滅該類菌[3-4]，而SAU由于強的抵抗力及環境適應性，常和芽孢用于評價消毒劑的殺滅效果[5]。消毒劑的使用已有相當長的歷史，正如細菌對抗菌藥物的耐藥性一樣，長時間接觸同一種(類)消毒劑的細菌會對該類消毒劑產生抵抗力，即產生抗性。隨著人類社會的發展以及人們健康意識的不斷增強，消毒用品的使用越來越廣泛，細菌對消毒劑的抗性問題也就越加嚴重，這已引起人們的廣泛關注與重視[6]。南昌大學第一附屬醫院根據不同的需要，常使用5種消毒劑，包括乙醇、碘伏、戊二醛、三氯片及愛護佳免洗手消毒劑。這些消毒劑能否很好地對醫院環境內分離的SAU具有殺滅作用，目前并未見評價。為了觀測常用消毒劑對醫院環境內分離的SAU，本研究通過收集環境及臨床分離的SAU，隨后進行體外懸液定量殺菌試驗，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗菌株 均來源于南昌大學第一附屬醫院，包括住院患者分離的SAU 20株，環境分離的SAU 28株。質控菌株金黃色葡萄球菌ATCC 25923來源于中國菌種保藏中心。

1.1.2 試驗用消毒劑 乙醇(主要為70%乙醇)、碘伏(主要成分為聚乙烯吡咯烷酮，碘濃度5.0 g/L)、三氯片(主要成分為三氯異氰尿酸，有效氯1 g/L)、20 g/L戊二醛消毒劑及愛護佳免洗手消毒劑(0.5%葡萄糖酸氯己定+70.0%乙醇)。

1.2 試驗方法

1.2.1 SAU的鑒定 將臨床或環境常規分離菌進行涂片，革蘭染色為陽性球菌，呈葡萄狀排列，觸酶陽性。采用法國生物梅里埃公司VITEK 2 Compact 全自動細菌分析儀及對應鑒定卡對菌種鑒定。

1.2.2 菌懸液的制備 取分離的SAU接種到LB肉湯中，35℃震蕩培養至對數生長期，制備濃度為1×106CFU/mL的菌懸液[7]。

1.2.3 中和劑鑒定試驗 用金黃色葡萄球菌標準株ATCC 25923為試驗菌，設計6組試驗，按懸液定量殺菌試驗程序進行中和劑鑒定試驗。試驗結果以第1組無菌生長或僅有極少數生長；第2組遠較第1組為多，但較第3、4、5組生長菌數少，其組間差不超過兩組回收菌數平均值的10%；第6組無菌生長，表明所用中和劑及其濃度適宜。

1.2.4 懸液定量殺菌試驗 將試驗菌懸液(100 μL/孔)和每種不同濃度(2倍稀釋、5倍稀釋、10倍稀釋)消毒劑(100 μL/孔)置于96孔微孔板中，于35℃作用不同時間(1、5、10 min)。取出混合液(20 μL/孔)隨后加入對應中和劑(180 μL/孔)，作用10 min后，取0.2 mL傾注90 mm平板上，L棒劃開進行活菌計數培養48 h后觀察結果，陽性對照為加菌懸液的生理鹽水組，重復3次取平均值，計算殺菌率[7]。

1.3 統計分析 不同消毒劑對不同來源SAU的殺滅率采用χ2檢驗，P≤0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 中和劑鑒定試驗結果 經中和劑鑒定試驗確定，乙醇的中和劑為10 g/L吐溫80的磷酸鹽緩沖液，碘伏的中和劑為10 g/L 硫代硫酸鈉+10 g/L吐溫80的磷酸鹽緩沖液，戊二醛的中和劑為10 g/L甘氨酸+ 5.0 g /L吐溫80的磷酸鹽緩沖液，三氯片的中和劑為5.0 g/L硫代硫酸鈉+5.0 g/L吐溫80的營養肉湯，愛護佳免洗手消毒劑的中和劑為20 g/L卵磷脂+20 g/L吐溫80的磷酸鹽緩沖液[8]。

2.2 殺菌試驗結果

2.2.1 5種消毒劑不同作用時間對SAU的殺滅效果 以70%乙醇、碘伏(5.0 g/L)、三氯片(有效氯1 g/L)、20 g/L戊二醛消毒劑及愛護佳免洗手消毒劑(0.5%葡萄糖酸氯己定+70%乙醇)作用1 min，對金黃色葡萄球菌標準株殺滅率均為100%。在上述相同濃度和作用時間條件下，各消毒劑對28株環境分離的SAU和20株臨床分離的SAU的殺滅率均達到90%以上。常規劑量作用1 min以上，該院常用的3種消毒劑(碘伏、戊二醛和愛護佳免洗手消毒劑)可完全殺滅不同來源的48株SAU，但70%乙醇及三氯片不能完全殺滅該菌，其中作用5 min時SAU的殺滅率達到90%以上。70%～75%乙醇對除芽孢外的革蘭陽性菌與陰性菌殺菌效果最好，所以臨床及實驗室長期將其作為皮膚等消毒劑的首選，但有結果表明SAU對70%乙醇具有抗藥性[9]，這與本次研究結果相符。即使乙醇及三氯片作用5 min，仍有部分SAU未被殺滅；從標本的不同來源看，環境分離的28株SAU抗乙醇及三氯片殺滅能力較強，而臨床分離的20株SAU低于前者。見表1。

表15種消毒劑不同作用時間對SAU的殺滅效果

Table1Killing efficacy of 5 kinds of disinfectant onS.aureusat different contact time

消毒劑作用時間(min)標準菌殺滅率(%)環境分離菌殺滅率(%)臨床分離菌殺滅率(%)70%乙醇1100．092．094．35100．096．698．610100．0100．0100．0三氯片(1g/L)1100．093．494．75100．096．599．810100．0100．0100．0碘伏(5g/L)1100．098．099．05100．0100．0100．010100．0100．0100．0戊二醛(20g/L)1100．0100．0100．05100．0100．0100．010100．0100．0100．0愛護佳免洗手消毒劑(0．5%葡萄糖酸氯己定+70%乙醇)1100．0100．0100．05100．0100．0100．010100．0100．0100．0

2.2.2 3種常用消毒劑稀釋后對SAU的殺滅效果 當常用的碘伏、戊二醛及愛護佳免洗手消毒劑被不同程度稀釋后，其殺菌能力逐漸下降，在對不同來源的SAU殺滅中表現為愛護佳免洗手消毒劑殺滅SAU能力強于戊二醛，而戊二醛殺滅SAU能力強于碘伏。見表2。

3 討論

SAU為醫院最為常見的病原菌之一，長期處于革蘭陽性菌感染的首位[10-11]。SAU感染的來源包括患者局部定植菌的移位及SAU的傳播。細菌在病區間的傳播包括通過醫務人員手、醫療器械、空氣、物體表面等媒介。阻斷細菌間傳播除了正確的醫療操作外，各種易存儲細菌的環境的消毒也非常必要，臨床上根據需要常選擇消毒能力不同的各類消毒劑進行處理。本研究發現環境分離SAU對低效消毒劑的抗性略大于臨床菌株，可能的原因是醫院環境中常存在這些低濃度的消毒劑，無形中促使環境SAU對消毒劑的抗性增大[12]；細菌對抗生素耐藥可能與消毒劑耐藥有關，因為細菌基因的改變可獲得抗性，因而可能使細菌獲得耐消毒劑基因從而抗性增加[13]，研究證明，SAU含有多種抗生素和消毒劑抗藥性質粒，并發現他們之間存在一定聯系[14-15]；選擇壓力在細菌對消毒劑抗性中的作用不容忽視，因為只要有消毒劑的存在，細菌就會受到選擇壓力的作用，此作用可產生抗性突變株。但整體而言，常規劑量在有效的作用時間內足夠殺滅環境來源SAU及臨床分離SAU，提示目前該院常規使用濃度的消毒劑對醫院感染的SAU能夠有效殺滅。然而，由于消毒劑產品的質量不過關或認為常規使用的消毒劑濃度降低時則殺菌能力降低，殺菌能力受到影響，故有必要固定時間內對常規使用的消毒劑或新購消毒劑進行隨機抽查，嚴格把控使用消毒劑產品的質量，為有效地發揮消毒劑在控制病原體醫院感染中的作用。目前認為，消毒劑的濫用、處理方法不當及用量不足是消毒劑抗性產生的主要原因。因此，在應用消毒劑時，提倡科學、合理和有效使用是避免消毒劑抗性菌株形成的最重要途徑。此外，細菌在長時間脫離接觸某消毒劑后，對該藥的抗性可能不會立刻消失，故對低效消毒劑最好幾種交替使用[16]。

表2 3種常用消毒劑稀釋后對SAU的殺滅效果

綜上所述，可通過進一步加強醫院環境內的消毒從而控制醫院感染減少其發生率，因而消毒劑的合理使用以及管理對控制醫院感染顯得尤為重要。

[1] 王良興, 姚丹, 余方友, 等.皮膚及軟組織化膿性金黃色葡萄球菌感染的耐藥譜分析[J].中華醫院感染學雜志, 2011, 21(5):1037-1039.

[2] 楊玉琪, 徐修禮, 馬越云, 等.重癥監護病房分離金黃色葡萄球菌的分子流行特征[J].中國感染控制雜志, 2017, 16(2):99-103.

[3] 周鳳蓮, 楊莉娜, 余陽, 等.常用消毒劑對部分多重耐藥菌殺滅效果的觀察[J].中國消毒學雜志, 2013, 30(9):808-810.

[4] 胡瑛, 文飛球, 劉犇, 等.新生兒、醫務人員及環境分離耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的同源性[J].中國感染控制雜志, 2017, 16(2):142-145.

[5] 常帥.醫院感染病原菌對消毒劑耐藥性的研究進展[J].中國消毒學雜志, 2013, 30(5):450-455.

[6] 周庭權, 黃文祥, 賈蓓.細菌對消毒劑抗性的研究進展[J].國外醫藥(抗生素分冊), 2008, 29(1):32-35.

[7] 王珂, 陳茜文, 張力平.微孔板法評價碘伏的消毒效果研究[J].中國消毒學雜志, 2016, 33(9):853-855.

[8] 楊莉娜, 余克花, 傅穎媛, 等.四種消毒劑對兩種臨床感染菌的殺滅效果[J].中國消毒學雜志, 2010, 27(2):126-128.

[9] 劉建玲.細菌對常用化學消毒劑耐藥性探討[J].延安大學學報(自然科學版), 1999, 18(1):65-67.

[10] 黃艷芳, 陳開森, 余陽, 等.2008—2014年南昌某醫院金黃色葡萄球菌耐藥譜及變化趨勢[J].現代預防醫學, 2016, 43(5):948-950.

[11] 胡付品. 2005—2014年CHINET中國細菌耐藥性監測網5種重要臨床分離菌的耐藥性變遷[J].中國感染與化療雜志, 2017, 17(1):93-99.

[12] 潘引君, 謝玲麗, 任志華, 等.臨床不同來源金黃色葡萄球菌耐消毒劑抗力及相關基因分析[J].中國消毒學雜志, 2015, 32(5):448-451.

[13] 徐簡, 葛洪, 馮立民.監控細菌對消毒劑抗藥的有關應用問題[J].中國公共衛生管理, 2000, 16(2):139-140.

[14] al-Masaudi SB, Russell AD, Day MJ. Comparative sensitivity to antibiotics and biocides of methicillin-resistantStaphylococcusaureusstrains isolated from Saudi Arabia and Great Britain[J]. J Appl Bacteriol, 1991, 71(4): 331-338.

[15] 雷新云, 金正江.新生兒病房分離金黃色葡萄球菌耐藥性及耐消毒劑基因檢測[J].中國感染控制雜志, 2015, 14(7):447-449.

[16] 王震宇.細菌對消毒劑抗性研究進展[J].中國消毒學雜志, 2007, 24(2):169-173.

BactericidalefficacyoffivekindsofdisinfectantonStaphylococcusaureus

DONGXia1,2,LIPei-qun2,LUODong1,LIUTao1,WANLa-gen1,CHENKai-sen1

(1TheFirstAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006; 2SchoolofPublicHealth，NanchangUniversity,Nanchang330006,China)

ObjectiveTo study the bactericidal efficacy of hospital commonly used disinfectants such as ethanol, 3" chlorine tablets, iodophor, glutaraldehyde, and avagard instant hand antiseptic onStaphylococcusaureus(S.aureus) from different sources of hospital, and provide scientific basis for effective control of healthcare-associated infection(HAI).MethodsA total of 48 strains ofS.aureusfrom inpatients, hands of health care workers, and environment surface in the First Affiliated Hospital of Nanchang University were collected. Disinfectant was directly contacted with bacteria, in vitro killing efficacy of disinfectant onS.aureusfrom different sources at different diluted concentrations, and different contact time were studied.ResultsThe killing rate of 5g/L iodophor, 20g/L glutaraldehyde, and avagard instant hand antiseptic(0.5% chlorhexidine+70% ethanol) toS.aureuswith a 5-minute contact time was 100%; killing rates of 70% ethanol and 1g/L 3" chlorine tablets toS.aureuswith a 5-minute contact time were 96.5%-99.8%；but highly diluted iodophor, glutaraldehyde, and avagard instant hand antiseptic still could not completely killS.aureuseven the contact time was extended.ConclusionThe routine use of disinfectants in the hospital can meet the clinical bactericidal efficacy, it is necessary to monitor concentration routinely, avoid decreasing sterilization ability.

Staphylococcusaureus; disinfectant; bactericidal efficacy

[Chin J Infect Control，2017，16(12)：1116-1119]

2017-04-08

國家自然科學基金資助項目(81660555)；南昌大學大學生科技創新基金(2016213)

董霞(1993-)，女(漢族)，甘肅省白銀市人，醫學生，主要從事公共衛生管理研究。

陳開森 E-mail:chenks100@126.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2017.12.003

R187+.2

A

1671-9638(2017)12-1116-04

陳玉華)