不同誘導因子對靈芝菌液體發酵的影響研究進展

張蕊多,劉煥煥,郭 楓,辛 宇,邱智東,王偉楠*

(長春中醫藥大學 藥學院,吉林 長春 130117)

不同誘導因子對靈芝菌液體發酵的影響研究進展

張蕊多,劉煥煥,郭 楓,辛 宇,邱智東,王偉楠*

(長春中醫藥大學 藥學院,吉林 長春 130117)

靈芝是我國著名的藥食兩用真菌,近年來對靈芝菌絲體的液體發酵研究取得了較好的成果。該文綜述了不同種類的誘導因子(無機鹽、生長因子及非必須營養因子等)對靈芝液體發酵的影響,旨在提高靈芝液體發酵產物的品質,為靈芝液體發酵培養條件的優化研究奠定理論基礎,以及為靈芝液體發酵技術的推廣應用提供參考。

靈芝;液體發酵;誘導因子;無機鹽;研究進展

靈芝(Ganoderma lucidum)古時亦稱“仙草”、“瑞草”,是擔子菌綱多孔菌目靈芝科靈芝屬真菌,始載于《神農本草經》,具有益心氣、安精魂、補肝益氣、堅筋骨的功效。靈芝的菌絲、孢子和子實體均可利用,現代藥理研究表明,其主要生物活性成分有多糖類、三萜類、多肽類、甾醇類、核苷類和生物堿類等[1],對于增強人體免疫力,調節血糖、血壓,輔助腫瘤放、化療,保肝護肝,治療慢性支氣管炎、冠心病,促進睡眠等均具有顯著作用[2-3]。

傳統栽培靈芝因環境因素和生長條件難以控制,子實體中活性成分質量不穩定且生產效率低。目前利用現代生物技術通過液體發酵生產靈芝菌絲體,工藝簡便、材料易得、副產物少、占空間少、周期短(10～12 d)、產量高,可在短時間內大規模生產,為集約化、標準化、工業化的靈芝活性成分開發創造有利條件[4-5]。液體發酵中培養基是靈芝賴以生存的環境,近年來研究表明[6-8],除了碳源和氮源,不同成分、比例的誘導因子對靈芝菌絲的生長狀態、得率及活性成分含量有著重要的影響。

液體發酵中的誘導因子包括無機鹽、生長因子及非必須營養因子等。無機鹽是靈芝深層液體發酵中必不可少的一類營養物質,它們是酶活性中心的組成成分和酶的激活劑,參與調節細胞滲透壓、控制細胞氧化還原電位、維持細胞結構的穩定性;生長因子是一些特殊的相對分子質量小的有機化合物,與靈芝活性成分代謝有著密切的關系;其他非必需營養因子如脂肪酸、茉莉酸甲酯、水楊酸、褪黑素、木質素、中藥提取物等,它們添加到培養基后可改善靈芝菌體生長極差的狀態。因此對培養基中誘導因子的探討也是提高靈芝生物量、靈芝多糖和靈芝酸產量的必要過程[9-12]。

本文通過綜述了不同誘導因子對靈芝菌液體發酵的影響,以明確目前靈芝液體發酵領域中所應用的各種不同誘導因子(無機鹽、生長因子和非必需營養成分)在靈芝生物量積累、靈芝多糖以及靈芝酸的生物合成過程中所扮演的角色。

1 無機鹽對靈芝液體發酵的影響

1.1 磷、鉀、鎂元素

靈芝在液體發酵過程中需要添加無機鹽使菌絲正常生長,最基本元素為磷、鉀和鎂[13]。磷參與糖代謝,影響菌體的呼吸作用;鎂存在于細胞膜和細胞壁中,參與菌體生長,含量太少會影響碳源的氧化;鉀是靈芝酸合成過程中各種酶的激活劑,可以維持細胞內酸堿平衡,同時還為菌體生長供應適宜的滲透壓環境[14-16]。

金德寬[17]探討了不同培養基組成對靈芝菌絲體生物量和靈芝酸產量的影響,結果表明,隨著培養基中K2HPO4和MgSO4質量濃度的增加,菌絲體生物量和靈芝酸產量均有所增加;但當MgSO4質量濃度＞1.5 g/L后,靈芝酸的產量則呈下降的趨勢。張冬雪等[18]考察了不同無機鹽對靈芝菌合成β-葡聚糖的影響,發現添加K2HPO4后,β-葡聚糖得率最高且明顯高于其他無機鹽,并通過濃度梯度試驗確定,當K2HPO4質量濃度≤1.5 g/L時,β-葡聚糖得率隨K2HPO4質量濃度增加而增大。張璐等[19]在固定碳源和氮源的前提下,分別改變無機鹽的濃度梯度進行培養,結果表明,不同質量濃度無機鹽的添加對于靈芝多糖的產生均有一定的正向促進作用,在以1.5 g/L MgSO4為無機鹽的培養基中胞外多糖得率最大,進一步通過響應曲面分析試驗得出蛋白胨與MgSO4的交互作用對胞外多糖產量有顯著影響。以上結果表明,添加一定質量濃度的P、K和Mg元素可以促進靈芝菌絲體生長并提高胞外代謝物產量。

1.2 鈣、鐵、錳元素

鈣、鐵、錳元素在液體深層發酵中也有著至關重要的作用。鈣離子有調節細胞通透性的作用,可調節培養液中磷酸鹽的含量,與細胞壁的穩定性有關;鐵離子是細胞色素、細胞色素氧化酶和過氧化氫酶等的組分,是細胞色素和氧化還原反應必不可少的電子載體,在電子傳遞體系中起至關重要的作用[20];錳元素參與過氧化物歧化酶的活動,也是磷酸烯醇式脫羧酶、檸檬酸合成酶的輔助因子[21]。

蔡愛群等[22]以赤芝和松杉靈芝為研究對象,開展了不同含量的Ca2+、Fe2+、Mn2+對靈芝菌絲體生物量影響的實驗研究。由于不同品種的靈芝對微量元素的敏感程度不同,因此在液體發酵過程中根據不同菌株的特性適量添加無機鹽。在200～1 200 mg/L范圍內,隨著Ca2+質量濃度的增加,赤芝生物量逐漸減少,而松杉靈芝在Ca2+質量濃度為200 mg/L時生物量最高,之后出現生長抑制現象,其生物量低于空白對照組;當Fe2+質量濃度在200～600 mg/L范圍內時,赤芝和松杉靈芝的生物量均高于空白對照組,若質量濃度超過此范圍,兩種靈芝的生物量明顯降低;當Mn2+質量濃度為400mg/L時,兩種靈芝的生物量均達到最高。熊艷森等[23]研究不同含量Ca2+、Fe2+對液體搖床培養靈芝的菌絲體生長、胞外多糖及菌絲體鈣、鐵含量的影響時發現,靈芝胞外多糖含量和菌絲體中鈣含量最高的最適Ca2+含量為200 mg/L。當發酵液中Fe2+含量為1 000 mg/L時,靈芝胞外多糖和菌絲體中鐵含量最高。李宇偉等[24]考察了Fe2+含量對靈芝多糖生物合成的影響,結果表明,當液體培養基中Fe2+含量達到0.2%時,靈芝多糖產量最高,為6.216 g/L,每克干菌絲產胞內粗多糖達428.9 mg。葉麗云等[25]在靈芝的液體培養基中加入10 mol/L Ca2+誘導后,靈芝酸的含量比對照組提高了64%,多糖含量提高了34%。XU Y N等[26]發現Mn2+通過調節鈣調神經磷酸酶信號轉導改善靈芝酸產量,在培養基中加入10 mmol/L的MnCl2,12 d時靈芝菌絲的生物量及靈芝酸產量均達到最高。

1.3 鋅、銅、硒、稀土元素

在微生物細胞生長繁殖過程中,鋅、銅、硒、稀土元素也可以作為其生理活性物質的組成或生理活性作用的調節物。鋅離子參與乙醇脫氫酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、醛縮酶、核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)與脫氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)聚合酶的活動;銅離子存在于細胞色素氧化酶中,參與加氧酶的活動;硒參與甘氨酸還原酶和甲酸脫氫酶的活動;稀土元素具有廣泛的生物學功能,能夠促進植物的生長以及細胞次生代謝產物的合成[27-29]。

譚才鄧等[30]實驗證明,低含量的Zn2+可以促進靈芝菌絲生長和靈芝多糖合成,當Zn2+含量為0.01%時,菌絲體生物量最高為6.38 g/L,菌絲多糖含量可達4.92%;但隨著Zn2+含量的升高,菌絲生長受到不同程度的抑制。魏賽金等[31]研究了不同Zn2+添加量對靈芝液體培養富鋅的影響,結果顯示菌絲體鋅含量隨著培養液中Zn2+添加量的增加而有上升趨勢,當Zn2+添加量為300mg/L時,菌絲體的富鋅能力最強,含鋅量高達25.09mg/g,鋅元素的富集增長率達到135.14%,胞外多糖含量為57 g/L;但當Zn2+添加量超過300 mg/L時,隨著Zn2+添加量的增加,靈芝菌絲體中鋅含量顯著下降。鮑銳[32]采用單因素法研究了Cu2+對靈芝深層發酵的影響,實驗發現加入100 μmol/L硫酸銅時,靈芝酸產量較對照組提高57%,達到207.773 mg/L。ZHU L W等[33]為了進一步增強靈芝酸的積累,采用Cu2+的添加、三階段光照射和多脈沖培養策略,獲得最大靈芝酸含量(即4.1 mg/100 mg干質量)和產量(即720.8 mg/L)。胡志斌等[34]就不同水平的亞硒酸鈉對靈芝液體發酵的影響進行了研究,數據顯示,在含硒250 mg/L發酵液中菌絲體生物量最高,且富硒后的菌絲體其他金屬元素含量沒有呈現規律性的變化;300 mg/L發酵液中富硒率最高,但之后隨著硒含量的升高靈芝菌發生硒中毒現象,生物量大幅度下降。姚強等[35]試驗發現不同濃度的稀土元素能一定程度上促進靈芝多糖和靈芝三萜的合成,其中鐠元素促進靈芝胞內多糖、胞外多糖和胞內三萜生產的效果顯著,鑭元素誘導合成的胞外三萜效果最好。

由此可見,靈芝液體深層發酵過程對誘導因子的需求不盡相同,有的無機鹽如果過量會對細胞產生毒害作用,因此有必要將培養基中誘導因子的量控制在正常范圍內,并注意各種無機鹽之間保持恰當的比例。

2 生長因子對靈芝液體發酵的影響

維生素作為靈芝液體發酵培養基中的生長因子,常以輔酶或輔基形式參與生物催化劑——酶系的活動,以及促進甲基的形成和轉移,參與細胞的糖代謝、蛋白質代謝、脂肪代謝等重要生命活動[36]。常加入的維生素有維生素B1(vitamin B1,VB1)、維生素B2(vitamin B2,VB2)、維生素B12(vitamin B12,VB12)等。

在靈芝發酵培養基中添加適量的維生素類物質,對菌絲體的生長和胞外多糖的合成有正向促進作用。曾曉希等[37]開展了維生素B族對靈芝液體發酵影響的試驗研究,分別將維生素B1、B2和B6添加到培養基中。研究結果表明三種維生素B對靈芝的生長和胞外多糖的積累均有正向促進作用。其中維生素B1的效果最顯著,生物量和胞外多糖分別達到7.604 g/L和0.863 g/L。陳芳莉等[38]通過對靈芝菌絲體液體發酵產胞外多糖條件的優選,發現添加維生素B2和B6均能促進菌絲體生長,獲得較多的胞外多糖。其中維生素B2的促進作用更為明顯。吳保鋒等[39]采用食用菌菌絲液體培養方法,重點分析不同生長因子對靈芝菌絲生長的影響。通過不同生長因子處理組間的Duncan's多重比較結果可知,5種生長因子對靈芝菌絲生長的促進作用大小依次為:維生素B12＞維生素B2＞維生素C＞復合維生素B＞維生素B6。

3 非必需營養因子對靈芝液體發酵的影響

據相關報道,脂肪酸、茉莉酸甲酯、水楊酸、褪黑素、木質素等非必需營養因子對靈芝液體發酵中菌絲體的生長和代謝產物合成也有著不同的影響。

3.1 脂肪酸

試驗研究表明[36],脂肪酸可促進米曲霉、枝頂孢霉等真菌在液體發酵過程中產生多糖、黃曲霉毒素等代謝產物,各種脂肪酸對靈芝液體發酵的不同代謝產物也有著不同的影響。

朱會霞[40]采用L18(37)正交試驗設計對靈芝液體發酵培養基進行了優化研究。結果表明,α-萘乙酸、油酸、L-谷氨酸為影響靈芝真菌發酵產靈芝酸的顯著性因素。孫金旭等[41]研究發現α-萘乙酸、油酸、L-谷氨酸作為誘導因子都能使靈芝菌絲體產量及多糖產量有不同程度的提高。添加1 g/L的油酸,菌絲體產量增加49.93%,多糖產量提高60%。同時添加3種生長因子對菌體及多糖產量都有影響,油酸影響顯著,3種因子添加的適宜組合為α-萘乙酸0.1 mg/L、油酸1 g/L、L-谷氨酸1.5 g/L,在此條件下,菌體最大產量提高76.65%,多糖產量提高95%。姚強等[42]通過研究硬脂酸、亞油酸和棕櫚酸對靈芝液體發酵的影響發現,硬脂酸和亞油酸分別對于胞外多糖和胞內多糖的合成具有較好的促進作用;在靈芝三萜類物質的發酵合成過程中,亞油酸促進作用最強,硬脂酸和棕櫚酸則具有一定的抑制作用。

3.2 茉莉酸甲酯

茉莉酸甲酯是一種廣泛存在于植物體內的植物激素和信號分子,其外源性加入可以誘導多種防御基因的表達和代謝產物的合成,目前已有文獻報道了茉莉酸甲酯對靈芝酸的生物合成有正向促進作用。CHOI D W等[43]為了提高靈芝酸的產量,使用均勻設計法來優化有利于靈芝酸生物合成的條件,培養6 d之后在吐溫中加入254 μmol/L的茉莉酸甲酯,得到的靈芝酸產量為45.2 mg/100 g,較空白對照組提高45.3%。DING Y X等[44]在靈芝酸生物合成的關鍵基因FPPs中找到了兩個潛在的茉莉酸甲酯響應區域,這說明基因FPPs可能參與了靈芝酸生物合成途徑中茉莉酸甲酯的信號傳導過程,為茉莉酸甲酯影響靈芝酸合成的機理闡述提供了理論依據。SHANGCH等[45]發現,不同濃度茉莉酸甲酯對靈芝酸生物合成關鍵基因Gl-OSC的表達量有不同程度的調節作用,當茉莉酸甲酯的加入量達到200μmol/L時,其表達量達到最高。RENA等[46]利用實時定量聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)技術對茉莉酸甲酯誘導下的多種靈芝酸生物合成基因表達情況進行了考察,結果表明,基因Gl-HMGS、Gl-HMGR、Gl-MVD、Gl-FPPs、Gl-SQS和Gl-OSC在茉莉酸甲酯的誘導下,表達量均有一定程度的提高,提示在加入茉莉酸甲酯的情況下,靈芝酸的產量會有一定程度的提高。以上這些趨勢與之前的很多研究報道[47]一致,進一步確證了茉莉酸甲酯可以促進對靈芝酸的生物合成,也為茉莉酸甲酯在靈芝酸工業合成領域的應用提供了參考。

3.3 中藥提取物

近年來研究發現,向靈芝液體培養基中加入某些中藥可以作為提高靈芝酸產量的一種穩定手段。朱強等[48]對比了不同中藥提取物對靈芝生長和代謝產物合成的影響,發現甘草對胞外靈芝酸的合成有正向促進作用,山茱萸既能促進靈芝菌體快速生長,又可以促進靈芝胞外多糖的合成。劉媛等[49]報道結果表明,金銀花、淡豆豉、淡竹葉、連翹和甘草對菌體的生長及靈芝酸的含量的增加具有顯著效果。劉高強等[50]開展了不同藥用昆蟲對靈芝多糖生物合成影響的試驗研究。結果顯示,5 g/L的藥用蜣螂能顯著促進靈芝胞內多糖和胞外多糖的形成(P＜0.05)。胞內多糖和胞外多糖的產量分別由(1.93±0.09)g/L和(520.3±20.2)mg/L提高至(2.41±0.12)g/L和(608.9±20.2)mg/L,且培養基中靈芝多糖中沒有出現新組分,即靈芝多糖的主要合成途徑并未改變。

3.4 其他非必須營養因子

水楊酸作為酚類化合物可提高抗氧化酶活力,促進抗病蛋白的合成,調節基因的表達并參與胞內信號傳導[51-52]。

葉麗云等[25]研究表明濃度為150 μmol/L的水楊酸不同誘導時間對靈芝多糖和三萜均有顯著影響,在誘導的前期能促進靈芝多糖和三萜的合成,隨著誘導時間的增加誘導作用減弱,甚至產生抑制作用,并且試驗進一步闡明了其促進靈芝酸生物合成的機理,即水楊酸提高了靈芝三萜在合成過程中鯊烯合酶(squalene synthase,SQS)、羊毛脂醇合酶(lanosterol synthase,LS)和法尼基焦磷酸合酶(farnesyl pyrophosphate synthase,FPS)基因的表達量。鮑銳等[32]采用單因素試驗考察了褪黑素靈芝深層發酵的影響,結果表明,加入20 μmol/L褪黑素時,靈芝酸產量較對照組提高73%,達到244.528 mg/L。裴海生等[53]考察了外源添加木質纖維素主要組分對靈芝菌體生長的影響,發現少量添加木質素對靈芝菌絲體生長有明顯促進作用,木質素加量為1.0%時,靈芝菌絲體生長情況最好,生物量最多,同時靈芝胞外多糖、胞內多糖及靈芝胞內三萜、胞外三萜的合成均有明顯提高。ZHANG J等[54]研究發現纖維素酶也是提高靈芝酸合成的有效誘導劑,在發酵的第3天向液體培養基中加入5 mg/L纖維素酶,可以使靈芝酸的最大產量達到1608mg/L。

4 結論與展望

靈芝中主要的活性成分靈芝多糖和靈芝酸是當代新藥和保健食品開發的重要原料,然而由于靈芝子實體生長周期較長,且活性成分含量較低,故限制了該類成分的大規模研發和工業化生產。靈芝液體深層發酵技術的出現一定程度上解決了靈芝活性成分開發來源不足的問題,為了提高靈芝液體發酵合成活性代謝產物的效率,研究人員對培養基中外源誘導物的篩選、培養條件的優化及發酵工藝的改良等方面進行了大量的探索,其中,外源誘導因子的添加是解決靈芝活性代謝產物合成效率的關鍵問題。雖然一些誘導因子在工業生產中難以大量使用或對技術過程要求較高,但該類結果對于明確靈芝菌絲體生長、代謝以及活性成分合成的機理奠定了基礎,為靈芝多糖和靈芝酸的進一步大規模生產加工提供了技術依據,促進了靈芝活性成分在醫藥食品等領域的產業化進程。

[1]姜芳燕,馬 軍,陳永敢,等.靈芝活性成分的研究進展[J].黑龍江農業科學,2014(8):137-142.

[2]葉鵬飛,張美萍,王康宇,等.靈芝主要成分及其藥理作用的研究進展綜述[J].食藥用菌,2013,21(3):158-161.

[3]楊錦生.靈芝主要化學成分及其藥理作用研究述評[J].中華中醫藥學刊,2012,30(4):906-907.

[4]周連玉.靈芝深層發酵條件的優化與優良菌株的篩選[D].長沙:湖南農業大學,2005.

[5]賀 紅.靈芝液體深層發酵技術研究進展及展望[J].基層中藥雜志,2000,14(2):48-49.

[6]YANG F,KE Y,KUO S.Effect of fatty acids on the mycelial growth and polysaccharide formation byGanoderma lucidumin shake flask cultures[J].Enzyme Microb Tech,2000,27(3-5)：295-301.

[7]PAPINUTTIL.Effectsofnutrients,pHand water potential on exopolysaccharides production by a fungal strain belonging toGanoderma lucidum,complex[J].Bioresource Tech,2010,101(6)：1941-1946.

[8]HUANG H C,LIU Y C.Enhancement of polysaccharide production by optimization of culture conditions in shake flask submerged cultivation ofGrifola umbellata[J].J Chin Inst Chem Eng,2008,39(4)：307-311.

[9]XU P,DING Z Y,QIAN Z.Improved production of mycelial biomass and ganoderic acid by submerged culture ofGanoderma lucidumSB97 using complex media[J].Enzyme Microb Tech,2008,42(4)：325-331.

[10]LIU G Q,WANG X L,HAN W J.Improving the fermentation production of the individual key triterpene ganoderic acid me by the medicinal fungusGanoderma lucidumin submerged culture[J].Molecules,2012,17(11)：12575-12586.

[11]FANG Q H,ZHONG J J.Submerged fermentation of higher fungus Ganoderma lucidum,for production of valuable bioactive metabolitesganoderic acid and polysaccharide[J].Biochem Eng J,2002,10(1)：61-65.

[12]FANG Q H,ZHONG J J.Two-stage culture process for improved production of ganoderic acid by liquid fermentation of higher fungusGanoderma lucidum[J].Biotech Progress,2002,18(1)：51-54.

[13]楊 德,周 明,高 虹,等.靈芝液體發酵培養基篩選研究[J].安徽農業科學,2011,39(30):18536-18538.

[14]趙 翾.靈芝菌絲體液體深層發酵研究進展[J].食品研究與開發,2011,32(12):225-228.

[15]韋朝陽,賀 亮,邵雙雙,等.外源添加物對食藥用菌液體發酵影響的研究進展[J].食品科學,2015,36(7):245-250.

[16]陶如玉,郝利民,陳 強,等.靈芝菌絲體液態發酵及多糖藥理活性研究進展[J].食品科學,2015,36(9):260-264.

[17]金德寬.靈芝酸發酵工藝條件的優化[J].中國釀造,2011,30(9):93-98.

[18]張冬雪,王曉玲,劉高強.靈芝菌絲液體深層發酵產β-葡聚糖的培養基優化[J].菌物學報,2016,35(6):750-759.

[19]張 璐,馬沁沁,袁向華,等.金地靈芝液體發酵產胞外多糖的營養條件優化[J].北方園藝,2016(9):133-136.

[20]ABBASPOUR N,HURRELL R,KELISHADI R.Review on iron and its importance for human health[J].J Res Med Sci,2014,19(2)：164-174.

[21]EMR R,STEWART G G.The effects of increased magnesium and calcium concentrations on yeast fermentation performance in high gravity worts[J].J Inst Brewing,2013,103(5)：287-291.

[22]蔡愛群,張鵬財.鈣、鐵和錳對兩種靈芝液體培養菌絲體生物量的影響[J].食用菌學報,2011,18(4):40-42.

[23]熊艷森,郭成志,魏賽金.富集鈣·鐵離子對靈芝菌絲體培養的影響[J].安徽農業科學,2009,37(35):17365-17366,17389.

[24]李宇偉,連瑞麗,李利紅,等.靈芝液體深層發酵菌株篩選與培養基優化的研究[J].廣東農業科學,2010,37(6):52-55.

[25]葉麗云,林 強,劉 梅,等.鈣離子和水楊酸誘導靈芝多糖和三萜的合成[J].菌物學報,2017,36(2):220-228.

[26]XU Y N,XIA X X,ZHONG J J.Induction of ganoderic acid biosynthesis by Mn2+in static liquid cultivation ofGanoderma lucidum[J].Biotechnol Bioeng,2014,111(11)：2358-2365.

[27]MUDHOO A,KUMAR S.Effects of heavy metals as stress factors on anaerobic digestion processes and biogas production from biomass[J].Int J Environ Sci Tech,2013,10(6)：1383-1398.

[28]SHAHID M,POURRUT B,DUMAT C,et al.Heavy-metal-induced reactive oxygen species：Phytotoxicity and physicochemical changes in plants[J].Rev Environ Contam Toxicol,2014,232：1-44.

[29]JAISHANKAR M,TSETEN T,ANBALAGAN N,et al.Toxicity,mech-anism and health effects of some heavy metals[J].Interd Toxicol,2014,7(2)：60-72.

[30]譚才鄧,廖延智,吳裕豪,等.靈芝液體發酵產胞內多糖的培養基優化[J].現代食品科技,2013(3):549-552.

[31]魏賽金,程 新,涂曉嶸.靈芝液體發酵富集鋅離子研究[J].江蘇農業科學,2010,38(1):242-244.

[32]鮑 銳.外源物質提高靈芝酸產量的應用效果研究[D].滁州:安徽科技學院,2016.

[33]ZHU L W,ZHONG J J,TANG Y J.Multi-fed batch culture integrated with three-stage light irradiation and multiple additions of copper ions for the hyperproduction of ganoderic acid andGanodermapolysaccharides by the medicinal mushroomGanoderma lucidum[J].Process Biochem,2010,45(12)：1904-1911.

[34]胡志斌,甘 泉,魏賽金.靈芝液體發酵富集硒元素研究[J].中國釀造,2010,29(4):36-39.

[35]姚 強,高興喜,宮志遠,等.部分稀土元素對靈芝多糖和三萜類物質液體發酵的影響[J].食品科學,2011,32(5):224-227.

[36]SETH E C,TAGA M E.Nutrient cross-feeding in the microbial world[J].Frontiers Microbiol,2014,5(350)：1-5.

[37]曾曉希,周洪波,符 波,等.靈芝多糖液體發酵條件的研究[J].現代生物醫學進展,2007,7(6):830-832.

[38]陳芳莉,冮 潔,李曼曼,等.靈芝菌絲體液體發酵產胞外多糖的研究[J].飼料工業,2008,29(16):40-42.

[39]吳保鋒,方志宏.液體培養條件下生長因子對靈芝菌絲作用效果研究[J].林業實用技術,2008(11):7-8.

[40]朱會霞.靈芝真菌發酵產靈芝酸培養基優化研究[J].北方園藝,2013(22):154-155.

[41]孫金旭,朱會霞.生長因子對靈芝生長及多糖產量的影響[J].中國釀造,2008,27(24):69-71.

[42]姚 強,高興喜,宮志遠,等.不同脂肪酸對靈芝液體發酵的影響[J].食用菌學報,2010,17(3):55-59.

[43]CHOI D W,JUNG J,HA Y I,et al.Analysis of transcripts in methyl jasmonate-treated ginseng hairy roots to identify genes involved in the biosynthesis of ginsenosides and other secondary metabolites[J].Plant Cell Rep,2005,23：557-566.

[44]DING Y X,OU-YANG X,SHANG C H,et al.Molecular cloning,characterization,and differentialexpression of a farnesyl-diphosphate synthase gene from thebasidiomycetous fungusGanoderma lucidum[J].Biosci Biotechnol Biochem,2008,72：1571-1579.

[45]SHANG C H,SHI L,REN A,et al.Molecular cloning,characterization,anddifferentialexpressionofalanosterolsynthasegene fromGanoderma lucidum[J].Biosci Biotechnol Biochem,2010,74(5)：974-978.

[46]REN A,QIN L,SHI L,et al.Methyl jasmonate induces ganoderic acid biosynthesis in the basidiomycetous fungusGanoderma lucidum[J].Bioresource Technol,2010,101(17)：6785-6790.

[47]HAYASHI H,HUANG P,INOUE K.Up-regulation of soyasaponin biosynthesis by methyl jasmonate in cultured cells ofGlycyrrhiza glabra[J].Plant Cell Physiol,2003,44(4)：404-411.

[48]朱 強,熊曉輝,王 芳.甘草對靈芝發酵產靈芝多糖影響初探[J].中國釀造,2009,28(2):86-88.

[49]劉 媛,丁重陽,章克昌,等.10種中藥對靈芝液體發酵的影響[J].食品與生物技術學報,2008,27(2):123-126.

[50]劉高強,丁重陽,章克昌,等.藥用昆蟲蜣螂對靈芝多糖生物合成的影響[J].生物工程學報,2009,25(6):914-919.

[51]TATEDA C,GREENBERG J T.Salicylic acid regulates Arabidopsis microbial pattern receptor kinase levels and signaling[J].Plant Cell,2014,26(10)：4171-4187.

[52]KENJI M,YASUOMI T.Regulation of water,salinity,and cold stress responses by salicylic acid[J].Front Plant Sci,2014,5(2)：4-15.

[53]裴海生,孫君社,王民敬,等.木質素對靈芝菌絲體生長的影響[J].農業工程學報,2017,33(6):309-314.

[54]ZHANG J,ZHONG J J,GENG A.Improvement of ganoderic acid production by fermentation ofGanoderma lucidum,with cellulase as an elicitor[J].Process Biochem,2014,49(10)：1580-1586.

ZHANG Ruiduo,LIU Huanhuan,GUO Feng,XIN Yu,QIU Zhidong,WANG Weinan*
(School of Pharmaceutical Sciences,Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

TS262.6

0254-5071(2017)11-0015-05

10.11882/j.issn.0254-5071.2017.11.004

2017-07-04

吉林省科技廳重大科技攻關項目(20160201001YY);吉林省教育廳重點項目(吉教科合字【2016】第26號)

張蕊多(1994-),女,碩士研究生,研究方向為中藥化學成分生物轉化研究。

*通訊作者:王偉楠(1985-),男,副教授,博士,研究方向為活性天然產物挖掘與生物轉化研究。