WT1和VEGF在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義

李 會 王俊杰

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 宜昌 443000)

WT1和VEGF在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義

李 會 王俊杰

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 宜昌 443000)

目的探討腎母細(xì)胞瘤基因(WT1)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法經(jīng)手術(shù)切除的50例原發(fā)性上皮性卵巢癌組織標(biāo)本，另選取同期獲得的20例良性卵巢腫瘤組織標(biāo)本和20例正常卵巢組織標(biāo)本。采用免疫組化SP法對所有組織標(biāo)本中的WT1和VEGF表達(dá)情況進(jìn)行測定，并結(jié)合患者的病理資料進(jìn)行綜合分析。結(jié)果卵巢癌、良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織WT1陽性率分別為66.0%、10.0%和5.0%，VEGF陽性率分別為74.0%、30.0%和15.0%。WT1和VEGF均在卵巢癌組織中陽性表達(dá)最高(Plt;0.05)；卵巢癌組織中WT1的表達(dá)與病理分期、病理分級和病理類型有關(guān)(Plt;0.05)，與年齡和淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)(Pgt;0.05)；VEGF的表達(dá)則與病理分期有關(guān)(Plt;0.05)，與年齡、病理分級、病理類型和淋巴轉(zhuǎn)移均無關(guān)(Pgt;0.05)；卵巢癌組織中WT1與VEGF的陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.728，Plt;0.05)。結(jié)論WT1和VEGF均在上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展和侵襲中起到了重要作用，且兩者表達(dá)呈正相關(guān)，可作為卵巢癌診斷、預(yù)后判斷的重要指標(biāo)。

腎母細(xì)胞瘤基因；血管內(nèi)皮生長因子；免疫組織化學(xué)；卵巢癌

上皮性卵巢癌早期發(fā)病隱匿，無特異性癥狀且病情進(jìn)展較快，大部分患者確診時病情大多已發(fā)展至晚期，病死率極高〔1〕。腎母細(xì)胞瘤基因(WT1)是從胎兒腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞中分離出的一種轉(zhuǎn)錄因子，該基因在腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移過程中也發(fā)揮了一定作用〔2〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種能夠增加腫瘤血管通透性、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂的物質(zhì)，能誘導(dǎo)腫瘤血管新生并促使其發(fā)展與轉(zhuǎn)移。目前，有關(guān)WT1和VEGF在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究報道較少。本研究初步探討二者在上皮性卵巢癌中組織的表達(dá)及臨床意義。

1 材料與方法

1.1一般材料 選取三峽大學(xué)仁和醫(yī)院2013年6月至2015年6月經(jīng)手術(shù)切除的原發(fā)性上皮性卵巢癌組織標(biāo)本50例，所有標(biāo)本經(jīng)組織病理檢查均確診為上皮性卵巢癌，且患者為首次接受卵巢切除術(shù)治療，術(shù)前均未接受過放、化療，年齡36～67〔平均(51.7±5.3)〕歲，術(shù)后根據(jù)國際婦產(chǎn)科協(xié)會(FIGO)病理分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級與分期：病理分級為G1 19例、G2 21例、G3 10例；病理分期為Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期33例；病理類型：漿液性癌31例，未分化癌1例，子宮內(nèi)膜樣癌9例，黏液性癌6例，透明細(xì)胞癌3例；發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移30例，未發(fā)生20例。另選取同期獲得的20例良性卵巢腫瘤組織標(biāo)本，年齡37～67〔平均(51.3±6.1)〕歲，病理類型：卵巢黏液性囊腺瘤10例，卵巢乳頭狀漿液性囊腺瘤10例；20例正常卵巢組織標(biāo)本(因子宮良性腫瘤而切除的卵巢組織)，年齡36～66〔平均(51.5±5.8)〕歲。將所有石蠟標(biāo)本進(jìn)行連續(xù)切片，片厚4～5 μm，并經(jīng)蘇木素-伊紅(HE)染色與病理學(xué)檢查確診。3組年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Pgt;0.05)，具有可比性。

1.2主要試劑 采用美國圣克魯斯生物技術(shù)公司生產(chǎn)的鼠抗人WT1單克隆抗體，北京中山生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的兔抗人VEGF單克隆抗體試劑盒，合肥康源生物科技研究所的免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑，武漢BOSTER公司生產(chǎn)的抗原修復(fù)液。

1.3檢測方法 使用SP法檢測WT1和VEGF，將已知的WT1陽性片和VEGF陽性片作為陽性一抗，并將磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗作為陰性對照，根據(jù)SP試劑盒配套說明書嚴(yán)格進(jìn)行操作。WT1和VEGF工作液濃度均為1∶100。

1.4免疫組化結(jié)果判定 WT1陽性表達(dá)位于細(xì)胞核，呈現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒，著色強度明顯高于其他非特異性染色細(xì)胞；細(xì)胞質(zhì)中呈現(xiàn)棕黃色顆粒表明VEGF陽性表達(dá)。根據(jù)陽性細(xì)胞比例和染色強度計分。陽性細(xì)胞比例計分方法：從400倍高倍鏡下，隨機選取每張切片的5個高倍視野，陽性細(xì)胞所占百分比lt;5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，≥76%計4分。染色強度計分方法：未染色計0分，黃色計1分，棕黃色計2分，黃褐色計3分。把兩個分?jǐn)?shù)相加，0或1分為陰性(-)，2分為弱陽性(+)，3或4分為陽性()，≥5分為強陽性()，其中+～均為陽性表達(dá)。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0軟件進(jìn)行χ2檢驗、Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1WT1、VEGF在不同卵巢組織中的表達(dá) 卵巢癌、良性卵巢腫瘤組織中WT1和VEGF的陽性率均顯著高于正常卵巢組織，且卵巢癌組織中陽性率顯著高于良性卵巢腫瘤組織(Plt;0.05)。見表1。

2.2WT1、VEGF的表達(dá)與卵巢癌病理特征相關(guān)因素分析 卵巢癌組織中WT1的表達(dá)和病理分期、病理分級及病理類型有關(guān)(Plt;0.05)，與年齡和淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)(Pgt;0.05)；VEGF的表達(dá)與病理分期有關(guān)(Plt;0.05)，與年齡、病理分級、病理類型和淋巴轉(zhuǎn)移均無關(guān)(Pgt;0.05)。見表2。

表1 WT1、VEGF在不同卵巢組織中的表達(dá)(n)

與正常卵巢組織比較:1)Plt;0.05；與良性卵巢腫瘤組織比較:2)Plt;0.05

表2 WT1、VEGF的表達(dá)與卵巢癌病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

2.3卵巢癌組織中WT1與VEGF相關(guān)性 卵巢癌組織中WT1陽性表達(dá)與VEGF陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.728，P=0.035)。

3 討 論

卵巢癌作為臨床上極為常見的一種婦科腫瘤疾病，近年來發(fā)病率不斷升高，其中尤以上皮性卵巢癌為主〔3〕。WT1基因是一種從腎母細(xì)胞瘤中提取出的具有4個鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，處在瀑式調(diào)控體系中，在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程中有重要作用。有研究表明，WT1基因能夠通過對肝細(xì)胞生長因子、胰島素樣生長因子、血小板衍生生長因子B等因子進(jìn)行調(diào)控，從而對機體細(xì)胞的各種生理過程進(jìn)行調(diào)節(jié)，介導(dǎo)細(xì)胞增殖、凋亡，促使新生血管、新生淋巴管形成，并協(xié)同相關(guān)因子的效應(yīng)〔4〕。本研究結(jié)果表明，WT1在上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。WT1的表達(dá)情況主要由腫瘤的類型、分化的程度決定，某些基因的突變會使癌基因活化，并通過抑制抑癌基因產(chǎn)物的活性達(dá)到增加WT1表達(dá)的作用，而WT1的長時間高表達(dá)又使WT1持續(xù)活化，各種因子則借此參與并推動腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移。有研究還顯示，WT1能夠通過直接改變凝溶膠蛋白、α肌動蛋白等直接改變細(xì)胞骨架蛋白，使細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化，黏附性下降，從而促進(jìn)細(xì)胞遷移〔5〕。

VEGF是具有高度特異性的一種促血管生成因子，能通過促進(jìn)腫瘤血管新生來加快腫瘤的發(fā)展〔6〕。新生血管的形成在腫瘤的生態(tài)系統(tǒng)中是一個重要因素，能夠加速腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移，其表達(dá)水平能夠有效反映腫瘤的發(fā)生與發(fā)展情況〔7〕。本研究結(jié)果提示，VEGF促進(jìn)了上皮性卵巢癌的發(fā)生，并可能參與其浸潤與發(fā)展。筆者認(rèn)為，在腫瘤組織中VEGF能夠刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，誘導(dǎo)血管的新生，并增強血管通透性，導(dǎo)致血漿蛋白向外滲出，促使蛋白水解酶生成，降解細(xì)胞外基質(zhì)，從而進(jìn)一步加快卵巢癌的浸潤與轉(zhuǎn)移。本研究還提示W(wǎng)T1和VEGF在卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展中可能起到協(xié)同作用。在卵巢癌發(fā)生發(fā)展的過程中，WT1能夠抑制抑癌基因，同時活化癌基因，且其亞型的比例失衡也可能是導(dǎo)致卵巢癌進(jìn)展的重要因素，所以WT1是反映卵巢癌惡性程度和侵襲性的重要指標(biāo)。VEGF主要通過誘導(dǎo)腫瘤新生血管形成達(dá)到加速卵巢癌進(jìn)展與轉(zhuǎn)移的目的，同樣是判斷卵巢癌惡性程度的重要指標(biāo)。

1張 恒,王宇平,谷 楊,等.不同給藥途徑的新輔助化療在晚期上皮性卵巢癌的療效觀察〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015;15(1):96-9.

2周 君,劉海玲,陳亦樂,等.VEGF和miR-205及靶蛋白Ezrin和Lamin A/C在卵巢癌中的表達(dá)及意義〔J〕.中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2014;39(2):142-50.

3劉星爍,李紅雨,趙書君,等.上皮性卵巢癌組織中miR-126、EGFL7的表達(dá)與微血管密度的檢測〔J〕.鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2015;50(2):244-7,248.

4勞小斌,劉曉強,邱春嫦,等.WT1在晚期漿液性卵巢上皮癌中的表達(dá)及意義〔J〕.中國婦幼保健,2013;28(12):1968-70.

5張彭南,孫 紅,蔣紅元.miR-483-5p在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其對順鉑敏感性的影響〔J〕.中國癌癥雜志,2016;26(5):394-8.

6任春霞,徐 娜,宋亞琴,等.癌相關(guān)成纖維細(xì)胞通過Gro-α激活NF-кB核轉(zhuǎn)位和VEGF表達(dá)促進(jìn)卵巢癌的生長〔J〕.中國癌癥雜志,2014;24(5):321-8.

7楊麗娜,吳 娟,趙 靜,等.Twist和VEGF在上皮性卵巢癌中的表達(dá)〔J〕.西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2015;32(3):341-4.

〔2017-04-11修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

R73

A

1005-9202(2017)22-5609-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.055

國家自然科學(xué)基金(No.81302269)

王俊杰(1977-)，女，博士，副主任醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤研究。

李 會(1982-)，女，主治醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤研究。