第三、第四代抗-HCV檢測試劑對122份可疑標本檢測結果分析

朱榮華 朱碧姝 黃蘇金

678000保山市中心血站

第三、第四代抗-HCV檢測試劑對122份可疑標本檢測結果分析

朱榮華 朱碧姝 黃蘇金

678000保山市中心血站

目的：探討第三代、第四代抗-HCV檢測試劑對無償獻血者篩檢的應用價值。方法：用國產第三代、第四代抗-HCV檢測試劑對2011-2013年無償獻血者篩檢的抗-HCV初檢、復檢不合格的122份標本在同等條件下進行檢測。結果：第三代與第四代試劑檢測可疑結果差異有統計學意義(P＜0.05)。結論：第三代與第四代抗-HCV檢測試劑間的靈敏度、特異性存在一定的差異。

雙抗原夾心；抗-HCV；試劑

丙肝是一種“沉默”的疾病。據統計，全球約有2億人感染HCV[1]，在中國HCV感染者大約4 000萬人，感染率3.2%[2]。目前，有多種HCV抗體檢測試劑可供臨床選擇，血站都要求用不同廠家的試劑對抗-HCV進行初檢和復檢，初檢和復檢均合格，此份標本才算合格。為評估萬泰第三代、第四代抗-HCV試劑的檢測性能，對122份可疑標本進行同步檢測，現將結果報告如下。

資料與方法

材料來源：保山市中心血站2011-2013年對無償獻血者抗-HCV初檢(北京萬泰)或(和)復檢(廈門新創)不合格標本122份，常溫下復融待檢；陽性對照為康徹思坦廠家生產質控血清；陰性對照為試劑盒陰性對照血清。

試劑：國產第三代丙型肝炎病毒抗體酶聯免疫診斷試劑盒；第四代丙型肝炎病毒抗體酶聯免疫診斷試劑盒。以上試劑均通過中國藥品生物制品批批檢驗合格，均在有效期內使用，實驗操作嚴格按試劑說明書操作。

結果判定：S/CO≥1判定為陽性，0.5≤S/CO＜1判定為可疑，S/CO＜0.5判定為陰性。

儀器：全自動酶免分析系統一體機(Uranus AE150)。

統計學方法：采用統計軟件SPSS 17.0分析，檢驗水準P＜0.05。

結 果

兩試劑檢測結果：在檢測的122份標本中，國產第三代間接法抗-HCV檢測試劑檢測陽性28份，可疑15份，陰性79份；國產第四代雙抗原夾心法抗-HCV檢測試劑檢測陽性17份，可疑0份，陰性105份。第三代與第四代試劑檢測陽性數經χ2檢驗(Pearson)，兩者之間差異無統計學意義(P＞0.05)；但第三代與第四代試劑檢測可疑結果數經χ2檢驗，兩者之間差異有統計學意義(χ2=15.98，P＜0.05)，見表1。

表1 國產第三代、第四代抗-HCV檢測結果分析

兩試劑精密性比較：通過20孔陽性對照檢測，第三代試劑陽性對照S/CO值均值3.026，標準差0.497，變異系數16.24%；第四代試劑陽性對照S/CO值均值24.051，標準差0.874，變異系數3.63%。第四代的試劑S/CO在第三代的基礎上放大大約8倍，第三代試劑變異系數是第四代試劑的4.5倍。

討 論

HCV所致的丙型肝炎是一種危害嚴重的傳染病。由于目前沒有HCV疫苗和特效的抗病毒藥物，對相關人群進行篩查和早期診斷成為控制丙型肝炎發生和傳播的重要手段，第三代抗-HCV抗體的檢測主要是用間接ELISA方法檢測血清或血漿樣品中丙肝病毒(HCV)抗體，在微孔條上預包被基因重組HCV結構和非結構區抗原，可與樣品中抗HCV抗體反應，再加入HRP標記的抗人IgG抗體與之結合，然后用TMB底物作用顯色。通過酶標儀檢測吸光度(OD值)判斷樣品中HCV抗體的存在與否，主要檢測的是血清或血漿中的抗HCV IgG抗體。由于IgG抗體出現時間較晚，感染早期采集的標本容易被漏檢；另外，血清中非特異性IgG的吸附以及類風濕因子的干擾，易產生假陽性反應[3]。第四代HCV抗體檢測試劑主要是雙抗原夾心法，是利用酶標記抗原代替間接法中的酶標記二抗，檢測的抗體主要包括IgG、IgM等在內的總抗體[3]。從122份的檢測結果看，第三代與第四代試劑檢測陽性數經卡方檢驗(Pearson)，兩者之間差異無統計學意義(P＞0.05)，但第三代與第四代試劑檢測可疑結果經卡方檢驗，兩者之間的差異存在著統計學意義(χ2=15.98，P＜0.05)。這可能與相關文獻所報告[3]的第三代檢測試劑易產生假陽性反應有關。第三代抗-HCV間接法試劑盒窗口期長(約70 d)，漏檢率高[4]，在無償獻血者血液篩檢中可造成血液浪費，增加了獻血者及受血者的心理負擔，同時也無形中加大了無償獻血者的流失，進一步加重血源緊張。

從兩試劑精密性比較看，第三代、第四代試劑陽性對照S/CO值均值分別為3.026和24.051，第四代的試劑S/CO在第三代的基礎上放大大約8倍，這主要是因為第四代試劑采用生物素-親和素級聯放大系統提高了靈敏度，同時檢測IgM和IgG，縮短了窗口期(約30 d)[4]。第三代試劑變異系數16.24%，第四代試劑變異系數3.63%，第三代試劑變異系數是第四代試劑的4.5倍，說明第四代試劑的加樣量由第三代試劑盒的10μL變為第四代的50μL，加樣量增大，少了加樣誤差。

檢測結果顯示第三代試劑抗-HCV檢測淘汰率35.25%，第四代試劑抗-HCV檢測淘汰率13.93%，其中第三代、第四代兩種試劑均為陽性符合率13.93%，說明兩代抗-HCV檢測試劑陽性檢出率仍有較大差別。122份標本均為初檢或(和)復檢不合格標本，第三代的檢測淘汰率35.25%，由于目前制造丙肝試劑的抗原主要用基因工程表達和多肽合成方法得到，用什么區段的丙肝病毒抗原蛋白，如何選擇各種抗原合適的比例，各試劑廠家有所不同，導致試劑間的靈敏度、特異性存在一定的差異[5]。

[1]Bostan N,Mahmood T.An overview about hepatitis C:a devastating virus[J].Crit Rev Microbiol,2010,36(2):91-133.

[2]Lau GKK,Zhuang H.Top hepatology issue in china[J].JGastroentHepatol,2003,17(l):9.

[3]韓振格,孟繼鴻.雙抗原夾心ELISA法檢測抗HCV總抗體[J].臨床檢驗雜志,2008,26(4):246-248.

[4]白廣紅,張玲玲.第四代抗-HCV試劑盒對無償獻血者篩檢價值評價[J].現代檢驗醫學雜志,2012,27(6):116-117.

[5]徐樹良,談維,孫啟俊,等.抗-HCV分片段試劑對抗-HCV陽性標本的確認價值探討[J].中國輸血雜志,2004,17(2):94-95.

122 suspicious samples results were analyzed by using third and fourth generation anti-HCV reagents

Zhu Ronghua,Zhu Bishu,Huang Sujin
Central Blood Station of Baoshan City 678000

Objective:To investigate the application value of third generation and fourth generation anti-HCV test reagents in voluntary blood donors screening.Methods:We used the third generation and fourth generation anti-HCV test reagents to test the 122 samples of anti-HCV and 2011-2013 unqualified samples which were screened by the unpaid blood donors for the past two years under the same conditions.Results:The difference between the third and fourth generations of reagents was statistically significant(P＜0.05).Conclusion:There were some differences in sensitivity and specificity between the third generation and the fourth generation of anti-HCV detection agents.

Double antigen sandwich;Anti-HCV;Reagent

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.33.69