竹葉參中多糖的提取

劉廷剛 ，張澤俊 ，李啟彭 ，師 睿 ，毛艷紅

（1.江西省武警總隊(duì)，江西 南昌 330000； 2.昭通學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，云南 昭通 657000）

竹葉參中多糖的提取

劉廷剛1，張澤俊2，李啟彭2，師 睿2，毛艷紅2

（1.江西省武警總隊(duì)，江西 南昌 330000； 2.昭通學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，云南 昭通 657000）

采用水提醇沉法提取昭通竹葉參中的多糖，利用sevage法除去蛋白質(zhì)，多糖提取率2.16 %，用DEAE-52纖維素柱純化多糖，得少量多糖精品.

竹葉參； 多糖 ； 提取

圖1.竹葉參實(shí)物圖片

多糖是自然界中天然大分子它由醛糖或者是酮糖通過(guò)糖苷鍵連接而成，廣泛分布存在于自然界，不僅可以從動(dòng)物植物體內(nèi)提取還可以從真菌、藻類(lèi)、細(xì)菌等提取.它在生命活動(dòng)中扮演著很重要的角色，為生物體提供能量，還具有生理活性，被認(rèn)為是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)之一，還應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)，食品安全及外觀，抑制脂質(zhì)氧化，穩(wěn)定酸性飲料[1].多糖的提取方法[2]有：水提醇沉法，利用的多糖的水溶解性；超聲提取，利用超聲波的作用使原料細(xì)胞破碎利于多糖的溶出；酸堿提取，利用酸堿使細(xì)胞膨脹破裂從而使多糖游離出來(lái)；微波輔助提取法，通過(guò)微波加熱提取加快多糖的溶出.本實(shí)驗(yàn)采用水提醇沉法提取竹葉參中的多糖.

1 原材料、試劑與儀器

1.1 原材料

竹葉參，實(shí)驗(yàn)組從昭通市昭陽(yáng)區(qū)永豐鎮(zhèn)一山溝里挖取，去除葉子， 留竹葉參根部，洗凈，陰干備用.

1.2 試劑

氯化鈉（AR，中國(guó)醫(yī)藥公司北京采購(gòu)站）；石油醚（AR，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；無(wú)水乙醇（AR，西隴化工股份有限公司）；丙酮、正丁醇（AR，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）；三氯甲烷（AR，重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司）；苯酚（AR，成都化學(xué)試劑廠）；無(wú)水醋酸酐、乙酸酐（AR，洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠）

1.3 儀器

HH-S26s 數(shù)顯恒溫水浴鍋、電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海—恒科技儀器有限公司）；SC-04 低速離心機(jī)（安徽中科中佳科技儀器有限公司）；DEAE纖維素/DE-52（AS#9013-34-7 粒徑:50μm，上海源葉生物有限公司）；40目標(biāo)準(zhǔn)篩（浙江上虞市道墟五四儀器廠）；721分光光度計(jì)（山東高密彩虹分析儀器有限公司）

2 提取方法與步驟

2.1 竹葉參多糖粗品的制備

稱取經(jīng)干燥粉碎的竹葉參4.5633 g（過(guò)40目篩子），于100 mL燒杯中加入3倍體積的80 %乙醇，將燒杯置于80 ℃水浴鍋中加熱提取1 h，其間不斷用玻璃棒攪拌，趁熱過(guò)濾，收集濾渣，再加入三倍體積的乙醇溶液再進(jìn)行水浴加熱重復(fù)做四次后收集濾渣，將濾渣放入燒杯中加入4倍體積的蒸餾水，把燒杯放在95 ℃水浴提取2 h（其間不斷用玻璃棒攪拌），然后過(guò)濾，重復(fù)以上步驟四次合并濾液.將收集到的濾液進(jìn)行濃縮（置于60 ℃水浴），將濾液濃縮到一定量加入2倍體積95 %的乙醇，靜置60 min，讓多糖析出，緩慢倒去上層清液（乙醇溶液），把燒杯中溶液倒入離心管中進(jìn)行離心（3500轉(zhuǎn)/min離心4 min ），把上清夜去除合并離心剩下的沉淀[6]，用量筒量取石油醚與丙酮按1:1比例混合，向燒杯中加入5倍石油醚與丙酮混合溶液.然后將燒杯放在60℃水浴鍋中加熱40 min（不斷用玻璃棒攪拌），冷卻并進(jìn)行離心（3500轉(zhuǎn)/min離心4 min ）合并沉淀，將沉淀放在85℃恒溫烘箱中烘干后取出冷卻到室溫就得到了灰色的竹葉參多糖粗品.

2.2 粗多糖脫蛋白

將上述烘干的灰色竹葉參粗多糖加入10 mL蒸餾水充分溶解（溶解過(guò)程中緩慢，可置于60℃水浴加熱使其完全溶解）用sevage法[3-4]（氯仿：正丁醇=5:1）除去蛋白質(zhì)，加入sevage試劑，然后將所有的混合液倒入離心管中進(jìn)行離心3min，取出此時(shí)離心管中溶液分為三層最上層為澄清液體其次為乳白色固體（蛋白質(zhì)）最下層為有機(jī)層，重復(fù)上述操作直至離心管中沒(méi)有乳白色固體產(chǎn)生停止操作.合并上述清夜，在向清夜中中加入4倍體積95%的乙醇溶液，放在室溫中靜置60 min使多糖盡可能的充分析出，在用離心機(jī)離心分離多糖和有機(jī)試劑倒去有機(jī)試劑合并多糖，將合并的多糖放入50 ℃恒溫烘箱中烘干，取出冷卻到室溫待用.

2.3 DEAE-52纖維素處理

取一定量纖維素放入燒杯中用蒸餾水中浸泡2小時(shí)，然后用蒸餾水調(diào)節(jié)pH置中性，加入一定量0.5 mol/L的鹽酸浸泡1小時(shí)，反復(fù)用蒸餾水調(diào)至中性，然后在加入一定量0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液浸泡1小時(shí)，再用蒸餾水調(diào)節(jié)pH至中性，裝柱備用.

2.4 多糖精品的制備

將經(jīng)過(guò)脫蛋白的多糖放入燒杯中加20 mL蒸餾水溶解將燒杯放入60 ℃水浴加快溶解其間用玻璃棒攪拌，冷卻到室溫將溶液倒入DEAE-52纖維素柱中，用離心管接用蒸餾水洗脫3 mL每管，用苯酚－硫酸法檢測(cè)（苯酚0.025 g溶解在16 mol/L的硫酸溶液中，加7滴待測(cè)溶液），待溶液冷卻到室溫在用721分光光度計(jì)在490 nm測(cè)出分光光度值，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并作出曲線圖，在收集獨(dú)立峰值最大處的試液.合并之后干燥，得竹葉參多糖精品.

3 結(jié)果與討論

本實(shí)驗(yàn)采用水提醇沉法提取竹葉參根中的多糖，粗多糖經(jīng)除蛋白，得較純的竹葉參多糖0.0985 g，提取率2.16 %，再經(jīng)纖維素柱處理得到少量的竹葉參多糖精品.該實(shí)驗(yàn)得到的葉參多糖精品量較少，本實(shí)驗(yàn)組將進(jìn)一步優(yōu)化條件，進(jìn)一步提高多糖的產(chǎn)率.

[1]嚴(yán)成，嚴(yán)夏．枸杞多糖提取工藝比較及體外抗氧化性研究[J]．食品科學(xué)，29 (7) :183-185．[2]宋艷雨，楊鎮(zhèn)，馬曉穎，等．植物生菌醇沉多糖對(duì)玉米鹽作用的處探[J]．遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014 (03) :32-33．

[3]尹艷，高文宏，于淑娟．多糖提取技術(shù)的研究進(jìn)展[J]．食品工業(yè)科技，2007 (2) ：248-250．

[4]魯瑞娟．植物多糖的提取和分析方法[J]．天津藥學(xué)，2015 ，27 (2) :67-69．

Extraction of Polysaccharides in Bamboo Leaf Ginseng

LIU Ting-gang1，ZHANG Ze-jun2，LI Qi-peng2，SHI Rui2，MAO Yan-hong2，
（1.The Chinese Armed Police Force of Jiangxi, Nanchang 330000，China；2.School of chemistry and life science,Zhaotong University, Zhaotong 657000, China）

The polysaccharides were extracted from Bamboo Leaf Ginseng by water-extraction and alcohol-precipitation method.It’s extracted rate was 2.16% that removed proteins employing with sevage reagents.The polysaccharides were purified from DEAE-52 cellulose column, and a small amount of polysaccharides were obtained.

Bamboo leaf ginseng; Polysaccharides； Extraction

R284.2

A

2095-7408（2017）05-0051-02

2017-09-18

云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目青年項(xiàng)目(2013FD057和2016FD083)；云南省教育廳科學(xué)研究基金資助性項(xiàng)目(2016ZZX229)和云南省高等學(xué)校昭通高原特色農(nóng)產(chǎn)品工程研究中心項(xiàng)目資助.

劉廷剛（1993— ），男，云南文山人，學(xué)士，主要從事化學(xué)分析研究.

張澤俊（1983— ），男，云南昭通人，講師，碩士，主要從事中藥材活性成分的提取和分析研究.竹葉參（Bamboo Leaf Ginseng）（見(jiàn)下圖）是萬(wàn)壽竹的根和頸（Root and Rhizome of Canton Fairybells），屬于百合科植物.葉片交叉生長(zhǎng)并且很薄，長(zhǎng)50-100毫米，寬10-15毫米，最終呈現(xiàn)披針形.上端短尖，基部卻圓，葉柄短.花型呈現(xiàn)傘型頂生與葉對(duì)生，花一般有2-4朵，最為罕見(jiàn)的5-7朵；花柄比較短，花自然下垂顏色是白色或淡紫色，基部有距；雄蕊有6；子房3室，花期為夏季.生長(zhǎng)在溫度適宜的山坡草叢及林下.竹葉參是一味中草藥具有很多的藥理作用，其在藥品領(lǐng)域有著很大的應(yīng)用前景，故研究竹葉參中的多糖有很大的意義.