甘肅地區453例宮頸鱗癌患者人乳頭瘤病毒（HPV）感染亞型及其年齡分布的研究

周慶云，趙 潔，王梓欣，王東存，孫建平

（甘肅省婦幼保健院，甘肅 蘭州 730050）

甘肅地區453例宮頸鱗癌患者人乳頭瘤病毒（HPV）感染亞型及其年齡分布的研究

周慶云，趙 潔，王梓欣*，王東存，孫建平

（甘肅省婦幼保健院，甘肅 蘭州 730050）

目的 研究甘肅地區宮頸鱗癌患者感染人乳頭瘤病毒（HPV）的基因亞型及其年齡分布特點，為甘肅地區臨床防治宮頸癌、制訂適合我國臨床遵循的宮頸癌篩查相關指南、研制適合本地區的預防性HPV疫苗提供流行病學資料。方法 采用醫用核酸分子快速導流雜交基因芯片技術（Hybrimax），對453例甘肅省內經我院病理確診為宮頸鱗癌患者的宮頸脫落細胞進行21種HPV亞型感染檢測，研究人乳頭瘤病毒感染亞型與宮頸鱗癌的相關性。結果 宮頸鱗癌患者中35歲以下所占比例最少，為5．30%，45～54歲的占比最多，為46．36%；453例宮頸鱗癌患者中有435例HPV陽性，陽性率96．03%；共檢測到17 種 HPV 亞 型 ， 其 中 高 危 型 13 種（HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV31、HPV52、HPV68、HPV39、HPV51、HPV53、HPV45、HPV56、HPV59），低危型 4 種（HPV44、HPV42、HPV43、HPV81），未檢測到 HPV35、HPV66、HPV6、HPV11 亞型；HPV16 感染率最高，為 77．01%，其次為 HPV18（6．44%）、HPV58（5．98%）、HPV33（3．22%）；HPV 單一感染 386 例，感染率為88．74%（386/435）。結論 甘肅地區宮頸鱗癌高發年齡為45～54歲，35歲以下患者最少；高危型HPV16、HPV18、HPV58、HPV33是甘肅地區宮頸鱗癌的主要感染亞型，特別是HPV16單一感染可能更易導致宮頸鱗癌的發生。

宮頸鱗癌；人乳頭瘤病毒；基因亞型；年齡

宮頸癌是嚴重威脅女性生命和健康的惡性腫瘤之一，發病率僅次于乳腺癌，在全球婦女癌癥死亡率中居第二位，在一些發展中國家甚至居首位。目前已經明確高危型人乳頭瘤病毒（HPV）的持續感染是宮頸癌的病因[1]。其中HPV16、HPV18與世界上70%的浸潤性宮頸癌相關[2－3]。本研究通過檢測甘肅省內宮頸鱗癌患者感染人乳頭瘤病毒（HPV）的基因亞型及年齡分布特點，以探討不同基因亞型HPV感染的致癌性，對本地區婦女宮頸癌的早期篩查、早期發現和早期診治具有重要價值，可為HPV疫苗的研制開發提供科學依據，現介紹如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2014年5月—2017年2月在甘肅省婦幼保健院婦科門診和住院，未經放療、化療，經我院病理確診為宮頸鱗癌的患者共453例，年齡26～79歲，平均年齡49．08歲，均為已婚婦女，來源于甘肅省內。取患者的宮頸脫落細胞進行21種HPV基因亞型感染檢測。

1.2 儀器與試劑

主要包括HPV－DNA提取試劑盒，PCR擴增儀，Hybrimax醫用核酸分子快速雜交儀，人乳頭瘤病毒基因微陣列分型檢測試劑盒（均由香港凱普公司提供）。

1.3 標本采集和保存

采用窺陰器充分暴露宮頸，用棉拭子擦去宮頸口過多的分泌物，用凱普公司配套專用宮頸刷置于宮頸口，沿順時針旋轉5周，慢慢抽出，以獲得足夠的移行區上皮細胞樣本，放入3 ml專用細胞保存液中，沿刷柄折痕處將宮頸刷柄折斷，旋緊管蓋，做好樣本標記，立即送檢或放入4℃冰箱中，3天內檢驗。

1.4 檢測方法

HPV基因分型檢測步驟：（1）樣本DNA提取：取樣本500 μl，以14 000 r/min離心1分鐘，棄上清液后，用凱普公司試劑盒提取DNA。（2）PCR擴增：將PCR反應試劑及Taq酶按比例混合后加入24 μl至反應管，再加入DNA模板1 μl，混勻后進行PCR擴增。每一批同時擴增HPV18型陽性對照及陰性對照各一份。（3）核酸分子快速導流雜交：采用凱普醫用核酸分子快速導流雜交儀（Hybrimax）及配套試劑盒，在雜交平臺上放入標記有21種HPV基因型寡核苷酸探針的低密度基因芯片雜交膜，按試劑盒說明進行導流雜交，酶標顯色。（4）結果判斷：肉眼觀察檢測結果，陽性點為清晰可見的藍紫色圓點，根據膜條HPV亞型分布圖，判斷陽性點為何種HPV病毒亞型。本檢測將HPV分為21種亞型，其中15種為高危亞型：HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68，6 種 為 低 危 亞 型 ：HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44、HPV81。有兩型或兩型以上者為多重感染，對多重感染者，各亞型的陽性率重復計算。

1.5 統計學方法

采用SPSS13．0統計軟件對數據進行統計學分析，以百分率作為HPV感染的評價指標，HPV檢出率采用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 宮頸鱗癌患者年齡分布

在453例26～79歲的宮頸鱗癌患者中，小于35歲所占比例最少，為 5．30%；45～54 歲所占比例最多，為 46．36%，見表 1。

表1 宮頸鱗癌患者年齡分布

2.2 宮頸鱗癌HPV感染亞型分布

453例宮頸鱗癌患者中，有435例HPV陽性，陽性率96．03%。21種HPV亞型共檢測到17種，其中高危型13種（HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV31、HPV52、HPV68、HPV39、HPV51、HPV53、HPV45、HPV56、HPV59），低危型 4 種（HPV44、HPV42、HPV43、HPV81），未檢測到 HPV35、HPV66、HPV6、HPV11 亞型。感染HPV16的共343例，感染率最高，占78．85%（343/435），其他亞型感染率由高到低依次為 HPV18、HPV58、HPV33、HPV31、HPV52、HPV68、HPV39、HPV51、HPV53、HPV45、HPV56、HPV59、HPV44、HPV81、HPV42、HPV43，見表 2。

表2 435例HPV陽性標本中各基因亞型分布

2.3 HPV單一感染和多重感染與宮頸鱗癌的關系

本研究中HPV陽性患者共435例，其中單一感染386例，占 88．74%（386/435）。在多重感染的 49 例（11．26%）中，二重感染最多見，為46例，占多重感染的93．88%，最常見的是HPV16型合并其他亞型的二重感染，共39例，占多重感染的79．59%（39/49）；三重感染3例，其中2例是HPV16型合并其他亞型的感染，檢測出的低危亞型均與高危亞型合并感染。宮頸鱗癌HPV感染主要亞型的單一感染與多重感染比較，差異有統計學意義（P＜0．05），見表 3。

表3 宮頸鱗癌HPV感染主要亞型的單一感染與多重感染情況[n（%）]

3 討論

大量流行病學和分子生物學研究資料表明，HPV與宮頸癌及癌前病變密切相關[4]。現已發現兩百多種亞型的HPV，根據其致病性的差異，將其分為高危型和低危型兩大類[5]，長期持續感染高危型可以致癌，危及生命。在本研究中，宮頸鱗癌HPV陽性率為96．03%，低危亞型僅檢出6例，并且均與高危亞型HPV16合并感染，充分證實了只有感染高危亞型HPV才會引發宮頸癌的觀點。

3.1 宮頸鱗癌年齡分布有一定地域性

大多數宮頸鱗癌患者的診斷年齡為45～50歲，年齡范圍17～90歲[6]。本研究中年齡45～54歲宮頸鱗癌患者在所有患者中占46．36%，接近一半，與文獻結果一致。近年來人們越來越認識到宮頸癌可以發生在35歲以下的女性中，在美國，浸潤性宮頸癌的所有患者中，35歲以下患者占22．1%[6]。本研究中35歲以下宮頸鱗癌患者的占比最少，僅為5．30%，遠低于美國的患病率，說明35歲以下女性宮頸癌患病率存在種族差異及地域性。美國2012年宮頸癌篩查指南中，對象為30歲以上婦女[7]，是否適用于我國有待進一步研究。

3.2 宮頸鱗癌組織中主要感染的HPV亞型存在地理差異

亞洲婦女宮頸癌中常見HPV亞型最新報道顯示[8]：在西亞和東亞地區，HPV16和HPV18亞型是感染率最高的前兩位。其他常見的HPV感染亞型排序有所差異。在西亞地區，HPV45、HPV33、HPV31、HPV35、HPV58、HPV52、HPV56 和 HPV59 為繼HPV16和HPV18亞型后最常見的8種HPV亞型；而在東亞地區，則 為 HPV58、HPV33、HPV52、HPV45、HPV31、HPV59、HPV39、HPV35。本研究顯示，宮頸鱗癌患者感染了17種HPV亞型，主要是 HPV16、HPV18 及 HPV58、HPV33、HPV31、HPV52、HPV68、HPV39、HPV51、HPV53，主要感染亞型與文獻報道基本一致，符合東亞人群研究結果。近年國內喻朝霞等[9]報道南方地區宮頸鱗癌患者HPV主要感染亞型依次為HPV16、HPV18、HPV33、HPV58、HPV31、HPV52、HPV59、HPV45；陶萍萍等[10]報道北京宮頸癌患者 HPV主要感染亞型依次為 HPV16、HPV18、HPV52、HPV58、HPV33。這說明國內南方及北方不同地區宮頸癌主要感染亞型存在一致性，同時也存在一定的地理差異。在我們的研究資料中，宮頸鱗癌主要感染亞型為HPV16、HPV18，與國內研究結果具有一致性，其他亞型排序均不同，有一定的地域性，值得重視。

3.3 單一感染較多重感染更有可能增加宮頸鱗癌的發病率

HPV的多重感染是否會促進宮頸癌的發生目前研究觀點不一致，有學者認為多重感染并不增加宮頸癌的發病率[4]；但也有學者認為多重感染可促進宮頸癌的發生，并使治療棘手[11]。本研究中，宮頸鱗癌單一感染和多重感染比為7．88∶1，單一感染明顯高于多重感染，宮頸鱗癌HPV感染主要亞型單一感染與多重感染比較，差異有統計學意義（P＜0．05），與第一種觀點一致。在一定程度上說明單一感染對宮頸鱗癌的發展起促進作用，但其具體的作用機制仍需要進一步研究。

Clifford等[12]發現HPV16在宮頸浸潤癌（SCC）患者中的檢出率是在LSIL（低度鱗狀上皮內病變）中檢出率的2倍，HPV18是1．5倍，說明感染HPV16、HPV18更易進展為宮頸浸潤癌。研究資料表明，HPV16的感染由于清除率降低可能更易導致持續性感染，發生CINⅡ、CINⅢ，甚至SCC[13]。本研究宮頸鱗癌中HPV16感染率高達77．01%，且HPV單一感染占居首位，表明甘肅地區HPV16單一感染可能更易導致宮頸鱗癌的發生。因此對于HPV感染患者，不僅要重視其是否已經發生宮頸病變，積極進行臨床治療，還要重視其所感染的HPV具體亞型，特別應對感染HPV16亞型的患者密切隨診，以便及早發現異常、及早干預，有效降低宮頸癌的發生。

中國幅員遼闊，不同地區及民族宮頸癌的HPV主要感染亞型不同。明確一個地區HPV致癌的主要亞型，可根據感染亞型預測病情進展，評估預后，指導臨床醫生制訂合理的診治方案，避免過度診斷及治療，同時為研制適合中國乃至本地區易感人群的HPV疫苗提供流行病學資料。

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B

1671－1246（2017）24－0109－03

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王梓欣）