甘油對冰凍解凍紅細胞質量的影響觀察

劉利俊

（內蒙古烏蘭察布市中心血站成分科，內蒙古 烏蘭察布 012000）

?基礎研究?

甘油對冰凍解凍紅細胞質量的影響觀察

劉利俊

（內蒙古烏蘭察布市中心血站成分科，內蒙古 烏蘭察布 012000）

目的觀察甘油對冰凍解凍紅細胞質量的影響。方法 選取保存于2～6℃RH陰性去白細胞懸浮紅細胞10袋，-80℃冰凍并予ACP215全自動血細胞處理儀解凍，根據不同方法分為實驗組與對照組，前者5袋冰凍解凍去甘油，后者5袋不去甘油，觀察冰凍解凍去甘油紅細胞質量指標情況。結果兩組冰凍解除去甘油紅細胞中甘油殘余量、游離血紅蛋白濃度和血紅蛋白含量對比；差異無統計學意義（P＞0.05）；質量控制標準為：甘油殘余量≤10 g/L；游離血紅蛋白濃度≤1 g/L；血紅蛋白≥16 g/L。結論制備冰凍解凍去甘油紅細胞與國家標準均符合，且可為臨床搶救獲取更多時間。

甘油；冰凍解凍紅細胞質量；影響

隨著近年來我國廣泛開展成分輸血，Rh（D）陰性血用量隨之增長。超低溫甘油化冰凍保存紅細胞是血站貯備，若臨床急需可及時予以解凍洗滌，很大程度上爭取更多的搶救時間[1]。甘油化制備冰凍解凍紅細胞為長時間保存Rh（D）陰性血理想方案，本研究予ACP215全自動血細胞處理儀對2種冰凍紅細胞予以去甘油洗滌，且檢測2種方案制備冰凍解凍去甘油紅細胞質量，獲取滿意效果，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

冰凍解凍去甘油紅細胞、一次性無菌空袋、9%Nacl、6%羥乙基淀粉溶液、0.9%Nacl一次性注射器、、一次性輸血器、分漿夾、掛鉤、止血鉗。無菌接管機、電子秤、DL-6M離心機、脫色搖床、血液分漿夾、高頻熱合機。

1.2 方法

取6 d內紅細胞懸液10袋，2500轉/分離心10分鐘，分離上清液并移到六珠袋內，加入甘油，每分鐘振動60次，直至甘油加完排空袋內空氣；甘油化細胞置入室溫下半小時后，離心取100 mL上清液，冰凍保存于-80℃冰箱內，5袋甘油化紅細胞不去甘油，另外5袋甘油化冰凍紅細胞，切勿疊加放置。保存30 d后將冰凍紅細胞取出置入37～40℃恒溫水浴箱內熔化，血袋全部浸沒于水，輕輕振動使其快速融化，不得用手搓捏未融化的紅細胞，直至冰凍紅細胞完全解凍；予ACP215全自動血細胞處理儀選取去甘油程序，將裝有9%NaCl洗滌溶液袋用無菌接管機通過輸液器與三珠袋相連，調整輸液器滴速，注入9 %NaCl溶液80 mL，20分鐘加完，平衡5分鐘。再加入100 mL羥乙基淀粉溶液，先慢后快，10分鐘加完，平衡5分鐘。以2500轉/分離心8分鐘，去除上清。滴加100 mL羥乙基淀粉溶液，10分鐘內加完，平衡5分鐘。再加入0.9%NaCl溶液150 mL，30分鐘加完。2500轉/分，離心8分鐘，去除上清。滴加0.9 %NaCl溶液150 mL，加至一半時，平衡5分鐘。再調整滴速至90滴/分，20分鐘加完，2500轉/分，離心8分鐘，去除上清。滴加0.9 %NaCl溶液100 mL，2500轉/分，離心8分鐘，去除上清。洗滌上清液應無明顯溶血跡象，最后加入0.9 %NaCl 溶液100 mL，懸浮后供臨床使用。最后予鄰聯甲苯胺法對游離血紅蛋白進行檢測，血紅蛋白含量予血細胞計數儀檢測，甘油殘余量予過碘酸鈉法檢測，B-D細菌培養與檢測系統予以細菌培養、檢測。

1.3 觀察指標與評定標準

觀察并對比2組冰凍解除去甘油紅細胞質量，包括甘油殘余量、游離血紅細胞含量、血紅蛋白含量。分析質量控制標準，甘油殘余量≤10 g/L，殘余白細胞≤1*107/U，游離血紅細胞≤1 g/L，血紅蛋白16 g/L[2]。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0統計學軟件對數據進行分析，計量資料以“s”表示，采用t檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 對比兩組冰凍解除去甘油紅細胞質量指標

兩組冰凍解除去甘油紅細胞中甘油殘余量、游離血紅蛋白濃度、血紅蛋白含量對比；差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 對比兩組冰凍解除去甘油紅細胞質量指標（s，g/L）

表1 對比兩組冰凍解除去甘油紅細胞質量指標（s，g/L）

組別（n=袋數） 甘油殘余量 游離血紅蛋白濃度 血紅蛋白含量實驗組（n=5） 6.57±1.41 0.33±0.12 16.52±0.48對照組（n=5） 6.35±1.27 0.34±0.14 16.71±0.52

2.2 質量控制標準

甘油殘余量：≤10 g/L；游離血紅蛋白濃度：≤1 g/L；血紅蛋白：≥16 g/L。

3 討 論

冷凍保存RH陰性血為保存稀有血液唯一途徑，經大量臨床研究均獲得認可，但制備冰凍解凍去甘油紅細胞的環節較為復雜[3，4]。作為采供血機構，于單位或者街頭開展血液收集與獻血招募時，因為受到時間、環境等外部因素的制約，針對獻血者RH血型不予以檢測，僅當血液收集至血站后再采取相關儀器設備予以檢測，最終確定獻血者血型是否為RH型[5]。因為臨床通常較少使用RH陰性血液，故若血站6℃保存RH陰性血液比較多的時候，且可能存在A、B、O血型等不同情況，從而極易導致血液過期報廢[6]。紅細胞冰凍技術發明、應用，可有效解決上述問題，不僅避免采集RH陰性血液因臨床未及時使用而導致過期報廢情況的發生，而且可確保臨床需要RH陰性血液時及時供應。紅細胞保存于-80℃冰凍可延長保存時間，并提高保存效果，為目前臨床最有效的一種長期保存紅細胞方案，同時屬于稀有血型自身輸血重要手段。本研究采取的ACP215全自動細胞處理儀已有效代替以往手工制備法，不僅避免消耗時間過長，而且減小污染風險。ACP215全自動處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細胞為全封閉式，其制備時間比較短，僅耗時60 min，可有效縮短患者搶救等待時間，降低血液污染率與勞動強度，進而實現血站規范化、標準化及自動化制備模式。經研究結果發現：2組冰凍解除去甘油紅細胞中甘油殘余量、游離血紅蛋白濃度、血紅蛋白含量對比均無統計學意義；質量控制標準為甘油殘余量：≤10 g/L；游離血紅蛋白濃度：≤1 g/L；血紅蛋白：≥16 g/L提示冰凍解凍去甘油與不去甘油均與國家標準相符合，但冰凍解凍去甘油紅細胞可為臨床搶救獲取更多時間。分析原因可能為：甘油是紅細胞內低溫保護劑，能夠有效降低紅細胞于冷凍時電解質濃度下降，避免細胞膜脂蛋白復合物發生變性，以及類脂質丟失，進而防止發生溶血情況。

總結上文，冰凍紅細胞冰凍前不去甘油與去除甘油，制備冰凍解凍去甘油紅細胞與國家標準均符合，但后者能夠為臨床搶救獲取更多時間。

[1] 袁文聲,林惠燕.凍存前濾除白細胞對解凍紅細胞質量影響的研究分析[J].國際檢驗醫學雜志,2015,36(09):1246-1249.

[2] 張雅莉,張 貝,靳朝霞,等.冰凍解凍去甘油紅細胞制備過程質量控制方法[J].臨床輸血與檢驗,2014,16(01):68-70.

[3] 王 凱,陳 新,張網蘭,等.應用MAP在4℃條件下保存冰凍解凍去甘油紅細胞的質量變化[J].臨床輸血與檢驗,2015,17(01):74-75.

[4] 時卉麗,趙 倩,楊鳳霞,等.國產智能紅細胞洗滌機及配套耗材制備冰凍解凍去甘油紅細胞的質量觀察[J].臨床合理用藥,2016,9(8A):168-169.

[5] 陳 新,王 凱,袁 飛,等.延長解凍去甘油紅細胞4℃保存期的質量觀察[J].臨床輸血與檢驗,2014,16(04):432-433.

[6] 譚 菲.手工法和機器法制備冰凍解凍去甘油紅細胞的質量分析臨床輸血與檢驗,2015,17(06):563-564.

R457.1

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ISSN.2095-8242.2017.069.13474.02

本文編輯：趙小龍