TCF4、β-catenin和E-cadherin在卵巢癌癌組織中的表達(dá)水平及意義*

梁 琛，李小賞，劉煥娣

河北省衡水市第二人民醫(yī)院(衡水053000)

TCF4、β-catenin和E-cadherin在卵巢癌癌組織中的表達(dá)水平及意義*

梁 琛，李小賞，劉煥娣

河北省衡水市第二人民醫(yī)院(衡水053000)

目的：探討TCF4、β-catenin和E-cadherin在卵巢癌癌組織中的表達(dá)水平及意義。方法：采用免疫組織化學(xué)染色法(SP)檢測(cè)卵巢良性組織、卵巢交界性腫瘤組織及卵巢癌組織中TCF4、β-catenin和E-cadherin分子的表達(dá)情況。結(jié)果：與卵巢良性組織比較，卵巢癌組織和卵巢交界性腫瘤組織中TCF4、β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率和表達(dá)評(píng)分顯著升高(P<0.05)，而E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)和表達(dá)評(píng)分顯著降低(P<0.05)，與卵巢交界性腫瘤組織比較，卵巢癌組織TCF4、β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率和表達(dá)評(píng)分顯著升高(P<0.05)，而E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)和表達(dá)評(píng)分顯著降低(P<0.05)。結(jié)論：TCF4、β-catenin和E-cadherin異常表達(dá)可能參與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，對(duì)三者聯(lián)合檢測(cè)能夠提高患者早期診斷及判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性中腫瘤之一，其病亡率居女性生殖系統(tǒng)腫瘤首位，其發(fā)病年齡逐漸趨于年齡化，嚴(yán)重威脅婦女健康和生命[1-2]。β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、E-鈣粘附素(E-cadherin)、T細(xì)胞因子4(TCF4)作為Wnt信號(hào)通路主要成員之一，其在腫瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程中扮演著重要角色[3-4]。本研究通過(guò)利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)TCF4、β-catenin和E-cadherin分子在卵巢良性組織、卵巢交界性腫瘤組織及卵巢癌組織中的表達(dá)情況，為尋找卵巢腫瘤轉(zhuǎn)移特異標(biāo)記物及其分子靶向治療藥物提供基礎(chǔ)。

資料與方法

1 一般資料 收集衡水市第二人民醫(yī)院2012年1月至2014年12月病理科確診的306例卵巢腫瘤組織標(biāo)本，其中102例卵巢良性組織(A組)、102例卵巢交界性腫瘤組織(B組)及102例卵巢癌組織(C組)，其中卵巢癌組織中患者年齡35～60歲，平均年齡(52.36±4.36)歲，按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)標(biāo)準(zhǔn)分期：Ⅰ～Ⅱ期50例，Ⅲ～Ⅳ52例；根據(jù)組織病理分級(jí)：高分化者47例，中、低分化者55例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者61例，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者41例，病理類型：漿液性76例，黏液性26例。

2 方 法 采用免疫組織化學(xué)染色法(SP)檢測(cè)卵巢良性組織、卵巢交界性腫瘤組織及卵巢癌組織中TCF4、β-catenin和E-cadherin分子的表達(dá)情況。收集所有組織標(biāo)本經(jīng)10%中性多聚甲醛浸泡，石蠟包埋后切片，60 ℃恒溫烤箱烤片，二甲苯Ⅰ、Ⅱ進(jìn)行脫蠟，各濃度梯度無(wú)水乙醇脫水，枸櫞酸緩沖液抗原修復(fù)后用3% H2O2內(nèi)滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，封閉后滴加一抗(TCF4、β-catenin和E-cadherin工作濃度均為1∶100)，于4℃冰箱保存，然后滴加含生物素標(biāo)記二抗及辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，孵育后DAB顯色5 min，自來(lái)水沖洗，終止顯色，復(fù)染后分化返藍(lán)，然后進(jìn)行脫水、透明、晾干處理，并用中性樹膠封片，鏡下觀察并攝像。

3 染色結(jié)果評(píng)定 染色結(jié)果采用陽(yáng)性細(xì)胞染色比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)價(jià)。隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野并計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例。

4 觀察指標(biāo) 觀察比較TCF4、β-catenin和E-cadherin分子在三種組織中(卵巢良性、交界性腫瘤組織及卵巢癌組織)的表達(dá)情況。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

結(jié) 果

1 TCF4、β-catenin和E-cadherin在各組間陽(yáng)性表達(dá)率比較 與卵巢良性組織比較，卵巢癌組織和卵巢交界性腫瘤組織中TCF4、β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高，而E-cadherin表達(dá)顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與卵巢交界性腫瘤組織比較，卵巢癌組織TCF4、β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高，而E-cadherin表達(dá)顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 TCF4、β-catenin和E-cadherin在各組間陽(yáng)性表達(dá)率比較[n(%)]

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，#P<0.05

2 TCF4、β-catenin和E-cadherin在各組間表達(dá)評(píng)分比較 與卵巢良性組織比較，卵巢癌組織和卵巢交界性腫瘤組織中TCF4、β-catenin表達(dá)評(píng)分顯著增加，而E-cadherin表達(dá)評(píng)分顯著降低(P<0.05)，且卵巢癌組織TCF4、β-catenin表達(dá)評(píng)分顯著高于卵巢交界性腫瘤組織(P<0.05)，而E-cadherin表達(dá)評(píng)分顯著低于卵巢交界性腫瘤組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 TCF4、β-catenin和E-cadherin在各組間表達(dá)評(píng)分比較

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，#P<0.05

討 論

癌癥的發(fā)生是多種因素共同作用形成的，其中機(jī)體內(nèi)原癌基因和抑癌基因表達(dá)失衡是主要的分子機(jī)制[5]。研究表明，Wnt信號(hào)通路于人類腫瘤密切相關(guān)，Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要傳到生長(zhǎng)和發(fā)育有關(guān)信號(hào)，進(jìn)而參與機(jī)體內(nèi)細(xì)胞增殖、分化、粘附等過(guò)程[6]。大量文獻(xiàn)報(bào)道顯示，在肝癌、食管癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌等實(shí)體性腫瘤內(nèi)，均存在Wnt信號(hào)表達(dá)異常，使位于細(xì)胞膜上的E-cadherin蛋白表達(dá)含量降低，導(dǎo)致細(xì)胞膜穩(wěn)定性發(fā)生改變，細(xì)胞內(nèi)E-cadherin/β-catenin復(fù)合體分解，引起細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核β-catenin含量增加，進(jìn)一步激活Wnt信號(hào)通路，同時(shí)異常激活Wnt信號(hào)通路能夠與E-cadherin基因啟動(dòng)子結(jié)合，使E-cadherin基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)異常增殖，促進(jìn)癌癥的發(fā)生[7-9]。 β-catenin是表達(dá)于細(xì)胞膜的一種胞內(nèi)蛋白，能夠特異性結(jié)合跨膜黏附分子E-cadherin，正常生理?xiàng)l件下細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中含量極少。細(xì)胞黏附分子E-cadherin是一種鈣依賴性跨膜糖蛋白，主要存在于上皮細(xì)胞，參與形成和維持正常細(xì)胞間聯(lián)系，其對(duì)Ca2+具有高度特異性，其蛋白結(jié)構(gòu)胞內(nèi)端能夠通過(guò)連接蛋白與微絲、中間絲、激動(dòng)蛋白相連接，形成穩(wěn)定復(fù)合體并固定于細(xì)胞骨架，相鄰細(xì)胞間E-cadherin分子能夠緊密結(jié)合形成穩(wěn)定連接。而TCF4作為TCF/LEF家族主要成員之一，TCF4是一種基礎(chǔ)bHLH轉(zhuǎn)錄因子，具有雙重調(diào)控作用，在Wnt/β-catenin信號(hào)途經(jīng)中發(fā)揮著調(diào)控其下游基因的表達(dá)的作用，可表現(xiàn)為轉(zhuǎn)錄激活或轉(zhuǎn)錄抑制的作用，影響一系列下游靶基因的表達(dá)，在胚胎的分化及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有明顯調(diào)控作用。

本研究結(jié)果顯示，與卵巢良性組織比較，卵巢癌組織和卵巢交界性腫瘤組織中TCF4、β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高，而E-cadherin表達(dá)顯著降低，與卵巢交界性腫瘤組織比較，卵巢癌組織TCF4、β-catenin陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高，而E-cadherin表達(dá)顯著降低。同時(shí)比較三種分子在各組間表達(dá)含量評(píng)分，結(jié)果顯示，卵巢癌組織中TCF4、β-catenin表達(dá)評(píng)分顯著高于卵巢良性組織和卵巢交界性腫瘤組織，而E-cadherin表達(dá)評(píng)分顯著低于卵巢良性組織和卵巢交界性腫瘤組織，提示TCF4與β-catenin的表達(dá)增高和E-cadherin表達(dá)降低與卵巢癌惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)，同時(shí)β-catenin信號(hào)異常會(huì)激活Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，而隨著病情發(fā)展，E-cadherin表達(dá)進(jìn)一步降低，破壞維持上皮細(xì)胞極性和完整性中起重要作用的E-cadherin/β-catenin復(fù)合體功能異常，導(dǎo)致腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。因此，對(duì)卵巢良性組織、卵巢交界性腫瘤組織和卵巢癌組織中TCF4、β-catenin和E-cadherin表達(dá)的檢測(cè)，能夠成為揭示卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制之一。考慮到本樣本病例數(shù)較少，TCF4、β-catenin和E-cadherin分子與卵巢交界性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系還需要進(jìn)一步研究探討。

綜上所述，TCF4、β-catenin和E-cadherin的異常表達(dá)可能是通過(guò)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移等生理過(guò)程，臨床上對(duì)TCF4、β-catenin和E-cadherin聯(lián)合檢測(cè)將有助于提高卵巢癌患者的早期診斷的準(zhǔn)確性及預(yù)后判斷，可能為卵巢癌治療提供一個(gè)新的方向。

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ExpressionlevelsandsignificanceofTCF4,β-cateninandE-cadherininovariancancertissues

Liang Chen，Li Xiaoshang，Liu Huanti.

Hengshui Second People 's Hospital in Hebei Province(Hengshui 053000)

Objective:To explore the expression levels and significance of TCF4, β-catenin and E-cadherin in ovarian cancer tissues. Methods: The expression levels of TCF4, β-catenin and E-cadherin in the ovarian benign tissues, the ovarian borderline tumor tissues and the ovarian cancer tissues were detected by immunohistochemical staining (SP).Results: Compared with those in the ovarian benign tissues, the positive expression rates and the expression scores of TCF4 and β-catenin were significantly increased (P<0.05) while the expression rate and the expression scores of E-cadherin were significantly decreased (P<0.05) in the ovarian cancer tissues and the ovarian borderline tissues. Compared with the borderline ovarian tumor tissues, the positive expression rates and the expression scores of TCF4 and β-catenin were significantly increased (P<0.05) in the ovarian cancer tissues while the expression of E-cadherin was significantly decreased (P<0.05). Conclusions: The abnormal expression of TCF4, β-catenin and E-cadherin may be involved in the development and progression of ovarian cancer, and the combined detection of TCF4, β-catenin and E-cadherin can improve the early diagnosis and prognosis of patients.

Ovarian Neoplasms @TCF4 @E-cadherin

*河北省衡水市科學(xué)技術(shù)局資助項(xiàng)目(2016014075Z)

卵巢腫瘤 @T細(xì)胞因子 @E-鈣粘附素

R737.31

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.12.061

(收稿：2017-04-16)