白藜蘆醇對(duì)2型糖尿病大鼠眼損傷的改善

羅小菊 常秀亭 周 穎 劉 媛

1海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 海南省海口市 570314 2南京市第一醫(yī)院眼科 江蘇省南京市 21000

白藜蘆醇對(duì)2型糖尿病大鼠眼損傷的改善

羅小菊1常秀亭1周 穎1劉 媛2

1海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 海南省海口市 570314 2南京市第一醫(yī)院眼科 江蘇省南京市 21000

目的：觀察白藜蘆醇對(duì)2型糖尿病大鼠眼部的外觀及組織病理學(xué)結(jié)構(gòu)的影響。方法：采用高糖高脂飲食加小劑量鏈脲佐菌素（STZ,35mg·kg-1）聯(lián)合誘導(dǎo)制備2型糖尿病大鼠模型，觀察白藜蘆醇對(duì)大鼠眼部的外觀及組織病理學(xué)結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠在應(yīng)用白藜蘆醇治療后，血脂明顯改善，與模型組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。眼的外觀和組織病理學(xué)變化明顯減輕。結(jié)論：白藜蘆醇能有效地調(diào)節(jié)2型糖尿病大鼠脂代謝紊亂，改善2型糖尿病大鼠眼的損傷。

白黎蘆醇;2型糖尿病;鏈脲佐菌素;眼病理

隨著人們生活水平的提高，生活方式的改變及人口老齡化，糖尿病的發(fā)病率逐年遞增。糖尿病是一種常見的代謝性疾病，對(duì)患者易造成很大的傷害。如今由糖尿病引起的直接急性并發(fā)癥臨床上并不多見，如酮癥酸中毒、高滲性昏迷等。糖尿病的最大危害在于能引起諸多慢性并發(fā)癥，眼部病變是糖尿病最為常見的慢性并發(fā)癥之一[1]。

白藜蘆醇是多酚類化合物，又稱為芪三酚，來源于花生、葡萄（紅葡萄酒）、虎杖、桑椹等植物。白藜蘆醇具有較強(qiáng)的抗氧化活性,它能夠有效地清除體內(nèi)的自由基和活性氧,在光保護(hù)、抑制腫瘤、抗炎、緩解疲勞、增強(qiáng)免疫、預(yù)防心血管等疾病預(yù)防和治療中起著重要作用[2,3]。白藜蘆醇在臨床上對(duì)2型糖尿病有明顯療效。為進(jìn)一步探討其對(duì)2型糖尿病的作用機(jī)理，進(jìn)行其對(duì)2型糖尿病大鼠血脂水平及眼組織病理變化影響的實(shí)驗(yàn)研究，報(bào)告如下。

表1：各組大鼠血清TC、TG、HDL-c含量比較()

表1：各組大鼠血清TC、TG、HDL-c含量比較()

與模型組比較*P＜0.05

組別 n TC(mmol/L) TG(mmol/L) HDL(mmol/L)正常組 8 3.11±0.21 0.8±0.08 1.42±0.09模型組 8 7.52±0.40 2.98±0.12 0.63±0.07白藜蘆醇組 8 5.36±0.26* 1.65±0.11* 1.28±0.08*

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大 鼠 38只， 體 質(zhì) 量 (120±20)g， 由 蘭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格 證 號(hào) ∶SCΧK(甘 )2014-0004， 室 溫18～26℃，自由飲水，普通飼料喂養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。經(jīng)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要藥品及試劑、儀器

白藜蘆醇：（純度=95.1%，HPLC）陜西賽得高科生物股份有限公司提供。鏈脲佐菌素(美國(guó)Sigma)：血糖試紙：（ONE TOUCH美國(guó)強(qiáng)生公司）；總膽固醇測(cè)定試劑盒、三酰甘油測(cè)定試劑盒（賽默飛世爾科技有限公司）；全自動(dòng)生化儀（日立7100）；血糖儀（美國(guó)強(qiáng)生公司）。

高脂高糖飼料配方：0.5 %膽鹽，1%膽固醇，1%蛋黃粉，10 %豬油，20 %蔗糖，67.5 %普通飼料。

1.3 動(dòng)物分組與造模方法

采用高糖高脂飲食加小劑量鏈脲佐菌素（STZ, 35mg·kg-1）聯(lián)合誘導(dǎo)制備2型糖尿病大鼠模型。隨機(jī)取8只作為正常對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)過程中始終給予普通飼料喂養(yǎng)。其余30只大鼠喂高脂高糖飼料，30天后，以35mg·kg-1的劑量一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin,STZ）以枸櫞酸鈉溶液稀釋，pH 4.0，冰盒中新鮮配置。大鼠腹腔16小時(shí)以后注射STZ一天后出現(xiàn)多飲、多尿等糖尿病癥狀，繼續(xù)給予高熱量飼料2周后用ONE TOUCH（美國(guó)強(qiáng)生公司）測(cè)定血糖，以禁食6h血糖≥11.1mmol·L-1者，為2型糖尿病大鼠模型。選取模型動(dòng)物16只，隨機(jī)分為：白藜蘆醇組(150mg·kg-1·d-1)、模型對(duì)照組，每組8只。

1.4 給藥

給藥組以白藜蘆醇150mg/kg灌胃，正常組、模型組用同體積生理鹽水按10mL/kg灌胃，每天灌胃給藥，給藥時(shí)間8∶00～9∶00 am，每周給藥6天，共4周。實(shí)驗(yàn)期間模型大鼠繼續(xù)給予高糖高脂飼料，大鼠自由進(jìn)食、飲水。

1.5 標(biāo)本采集與觀察指標(biāo)檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組大鼠股動(dòng)脈取血，收集血清用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白含量;處死動(dòng)物，摘取眼球，10%中性甲醛固定，脫水包埋切片，HE染色，光鏡觀察。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用方差分析和q檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 白藜蘆醇對(duì)

2型糖尿病大鼠血清TC、TG、HDL-C含量的影響治療后各用藥組與模型組比較，TC、TG 較模型組降低 (P＜0.05，P＜0.01)，HDL-C較模型組升高(P＜0.05)，說明各用藥組均可改善2型糖尿病大鼠胰島素抵抗的脂代謝紊亂。見表1。

2.2 白藜蘆醇對(duì)2型糖尿病大鼠外觀的影響

正常大鼠眼球呈紅色、透明，活動(dòng)自如，血管清晰，無擴(kuò)張、增生、出血等癥狀。模型組大鼠呈半透明白色渾濁狀，眼神呆滯，血管變粗，增生明顯。白藜蘆醇組較模型組癥狀改善。見圖1。

圖1：白藜蘆醇對(duì)2型糖尿病大鼠眼外觀的影響

2.3 白藜蘆醇對(duì)2型糖尿病大鼠眼球病理學(xué)結(jié)構(gòu)的影響

正常大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)各層排列規(guī)則，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞單層排列，均勻整齊，內(nèi)、外核層細(xì)胞核形態(tài)正常，染色深，排列緊密，整齊有序，各層內(nèi)的毛細(xì)血管未見擴(kuò)張。模型組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)各層結(jié)構(gòu)疏松、細(xì)胞排列不規(guī)則，視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞腫脹，排列紊亂，數(shù)目減少，內(nèi)叢狀層腫脹，內(nèi)、外核層細(xì)胞排列紊亂，密度降低，毛細(xì)血管充血、擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞增生，微血管壁增厚。外叢狀層毛細(xì)血管出現(xiàn)。視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增生、脈絡(luò)膜毛細(xì)血管擴(kuò)張。白藜蘆醇治療組∶視網(wǎng)膜病理改變較模型組減輕，視網(wǎng)膜內(nèi)各層排列較規(guī)則，組織水腫減輕，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)、內(nèi)外核層細(xì)胞數(shù)相對(duì)增多，毛細(xì)血管擴(kuò)張減輕。見圖2。

圖2：白藜蘆醇對(duì)2型糖尿病大鼠眼病理學(xué)結(jié)構(gòu)的影響

3 討論

（1）鏈脲佐菌素(Streptozocin，STZ)是一種胰島化學(xué)損傷制劑，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰島β細(xì)胞具有高度選擇性的毒性作用。STZ小劑量注射會(huì)導(dǎo)致胰島β細(xì)胞輕度受損，使其保存部分胰島素分泌功能，這類似于T2DM產(chǎn)生的胰島素抵抗和胰島β細(xì)胞分泌功能受損[5]。本實(shí)驗(yàn)采用注射STZ聯(lián)合高脂飲食方法獲得T2DM的動(dòng)物模型，先喂以高脂高糖飲食，誘發(fā)出胰島素抵抗，再繼以低劑量的STZ，破壞部分胰島β細(xì)胞的功能，二者結(jié)合可誘導(dǎo)出血糖升高、高胰島素血癥、血脂異常等病理生理改變都類似于人類T2DM的動(dòng)物模型。

（2）本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明白藜蘆醇通過降低血漿中TC、TG的含量，升高HDL-C的含量有效調(diào)節(jié)了善T2DM大鼠脂代謝紊亂；改善了T2DM大鼠的眼損傷，對(duì)2型糖尿病具有修復(fù)和治療作用。有研究表明，糖尿病慢性并發(fā)癥的形成與氧化應(yīng)激增高、氧自由基增多及SIRT1基因活化相關(guān)[4,5]。白藜蘆醇具有抗LDL氧化修飾、調(diào)節(jié)血脂等作用，其改善糖尿病具體的作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究闡明。

[1]安梅，周瑾等.白藜蘆醇藥理學(xué)作用的研究進(jìn)展[J].腫瘤藥學(xué),2014(04).

[2]沈佳佳，黃瑛等.白藜蘆醇通過促進(jìn)自噬減輕糖尿病大鼠心肌缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)臨床醫(yī)學(xué),2015(02).

[3]夏開元，戎衛(wèi)華.葡萄中的功效成份—白藜蘆醇、白藜蘆醇苷和原花青素[J].食品科學(xué),2002(08).

[4]劉貴珊,楊博.白藜蘆醇對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力和腦組織抗氧化能力的影響[J].食品科學(xué),2014(05).

[5]韓雪蓮.白藜蘆醇及其衍生物和類似物抗腫瘤研究進(jìn)展[J].化工進(jìn)展,2014(06).

[6]吳晉暉，高玉等.不同病程糖尿病大鼠視網(wǎng)膜VEGF和PEDF表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化[J].眼科新進(jìn)展2010,30(09):809-814.

（通訊作者：劉媛）

羅小菊（1984-），江西省萬安縣人。碩士研究生。現(xiàn)為海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心制藥工程師。

常秀亭（1987-），山東省青州市人。碩士研究生。現(xiàn)為海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心化工工程師。

周穎（1986-），海南省海口市人。大學(xué)本科學(xué)歷。現(xiàn)為海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心制藥工程助理工程師。

劉媛（1981-），陜西省西安市人。博士研究生。現(xiàn)南京市第一醫(yī)院眼科主治醫(yī)生。