丹參川芎嗪注射液對(duì)急性心肌梗死模型大鼠抗氧化應(yīng)激實(shí)驗(yàn)研究

徐杰，劉德山

（1. 山東大學(xué)，山東 濟(jì)南 250013；2. 山東省濟(jì)南市第五人民醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250022）

丹參川芎嗪注射液對(duì)急性心肌梗死模型大鼠抗氧化應(yīng)激實(shí)驗(yàn)研究

徐杰1,2，劉德山1*

（1. 山東大學(xué)，山東 濟(jì)南 250013；2. 山東省濟(jì)南市第五人民醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250022）

目的探討丹參川芎嗪注射液對(duì)急性心肌梗死模型大鼠抗氧化的相關(guān)機(jī)制。方法觀察三組大鼠心臟的變化，超聲心動(dòng)圖測(cè)算LVEF和FS的數(shù)值，ELISA檢測(cè)三組大鼠的cTnI、MDA、SOD。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組大鼠心臟狀態(tài)明顯優(yōu)于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組的EF及FS明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），三組比較，假手術(shù)組EF及FS最高。治療后，實(shí)驗(yàn)組cTnI、MDA的表達(dá)明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），SOD的表達(dá)明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。結(jié)論丹參川芎嗪通過抗氧化應(yīng)激的作用達(dá)到保護(hù)心肌細(xì)胞，改善心肌缺血程度，降低心肌梗死對(duì)心臟功能的損傷。

丹參川芎嗪注射液；心肌梗死；抗氧化；實(shí)驗(yàn)研究

急性心肌梗死時(shí)由于心外膜下冠狀動(dòng)脈突然閉塞所引起的缺血性心肌壞死，是導(dǎo)致冠心病死亡的主要原因。在梗死的過程中，由于缺血所引起的線粒體呼吸鏈過度的產(chǎn)生自由基，主要包括活氧自由基及反應(yīng)性氮自由基，當(dāng)機(jī)體自由基產(chǎn)生過多后，則會(huì)引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，致使出現(xiàn)氧化損傷，心肌細(xì)胞的死亡[1]。因此近年來關(guān)于心肌梗死的研究重點(diǎn)開始側(cè)重于如何通過抗氧化應(yīng)激達(dá)到保護(hù)心肌梗死后心肌細(xì)胞的目的。近年來研究發(fā)現(xiàn)丹參川芎嗪注射液具有促進(jìn)心臟功能恢復(fù)，減少梗死面積，降低心肌興奮性和導(dǎo)電性等作用。在我們的研究中，通過對(duì)大鼠心肌梗死模型給予丹參川芎嗪干預(yù)，進(jìn)一步探討丹參川芎嗪保護(hù)心肌，降低心肌梗死損害的相關(guān)機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 動(dòng)物 購自北京維通利華，SD大鼠，體重200 g-220 g，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（京）2011-0011。

1.1.2 藥物與試劑 丹參川芎嗪注射液購自貴州拜特制藥有限公司（國藥準(zhǔn)字H52020959）。cTnI ELISA Kit試劑盒購自Life Diagnostics，MDA及SOD ELISA Kit試劑盒購自南京建成。

1.2 方法

1.2.1 心肌梗死模型的建立 通過冠狀動(dòng)脈結(jié)扎制備大鼠心肌梗死模型。建模后心電圖檢測(cè)ST段抬高，心肌紫紺，松扎后ST段下降1/3以上，心外膜充血為造模成功[2]。

1.2.2 分組 心肌梗死大鼠模型建立后，大鼠分為模型組及假手術(shù)組，模型組按照數(shù)字編碼的方式隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10只。

1.2.3 給藥 實(shí)驗(yàn)組通過腹腔注射給予丹參川芎嗪10 mL/kg（丹參川芎嗪：0.9%的氯化鈉=2:1），對(duì)照組及假手術(shù)組給予腹腔注射0.9%的氯化鈉注射液10 mL/kg，三組連續(xù)腹腔注射14 d，每天1次。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1 左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左室短軸縮短率（FS） 通過脈沖多普勒檢測(cè)心功能，連續(xù)檢測(cè)3次，取平均值。

1.3.2 ELISA檢測(cè)三組大鼠的cTnI、MDA、SOD 抗原稀釋后于濕盒靜置，棄液體后封閉液封閉。加入樣品稀釋液，清洗后加入底物液，避光之后加入終止液終止反應(yīng)，上機(jī)檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠心臟取材結(jié)果 通過對(duì)大鼠心臟取材后發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組大鼠心肌梗死部位心前壁變薄，塌陷；假手術(shù)組顏色呈紅色，心臟飽滿。而實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組心臟更為飽滿，顏色更加紅潤(rùn)，但與假手術(shù)組比較，顏色較假手術(shù)組淺，心室前壁明顯變薄。

2.2 超聲心動(dòng)圖檢測(cè)三組EF、FS的改變 通過超聲心電圖檢測(cè)三組大鼠治療后左心室各節(jié)段容積-時(shí)間曲線可以發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組的大鼠左心室階段容積-時(shí)間曲線整齊有序，波峰明顯，峰值一致；對(duì)照組各階段容積-時(shí)間曲線平直，起伏不一致，峰值不明顯；而實(shí)驗(yàn)組經(jīng)過丹參川芎嗪的治療后，其波峰波谷較實(shí)驗(yàn)組明顯，且波峰整齊高度相對(duì)一致。通過對(duì)三組大鼠的LVEF及FS比較發(fā)現(xiàn)，在治療后，實(shí)驗(yàn)組的EF及FS明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），同時(shí)對(duì)照組的LVEF及FS明顯低于假手術(shù)組。三組比較，假手術(shù)組EF及FS最高，見表1。

2.3 ELISA檢測(cè)三組大鼠血清cTnI、MDA、SOD的表達(dá)在治療后，實(shí)驗(yàn)組cTnI、MDA的表達(dá)明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），SOD的表達(dá)明顯高于對(duì)照組。而假手術(shù)組不管治療前或治療后，其cTnl、MDA、SOD的表達(dá)明顯優(yōu)于對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組，見表2。

3 討論

丹參川芎嗪提取于丹參和川芎之中，丹參具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩之效，在臨床上主要用于治療心血管疾病，包括心絞痛、心肌梗死和中風(fēng)等。現(xiàn)代研究證明，丹參具有多種藥理作用，包括松弛冠狀動(dòng)脈、抗凝、減輕I/R損傷和抗心律失常的作用[3]。川芎具有活血行氣，祛風(fēng)止痛之效，既能行散，上行達(dá)顛頂，又入血分，下行達(dá)血海。川芎被研究證明具有保護(hù)線粒體和改善能量代謝來增加冠狀動(dòng)脈血流量和全身循環(huán)，清除氧自由基，保護(hù)心肌細(xì)胞的作用[4,5]。因此在我們的實(shí)驗(yàn)中，選取了丹參和川芎的提取物丹參川芎嗪作用于心肌梗死的大鼠模型，為進(jìn)一步探討丹參川芎嗪減少心肌梗死損傷，保護(hù)心功能的相關(guān)機(jī)制研究。

表1 三組治療后LVEF、FS的改變（Mean±SD）

隨著對(duì)心肌梗死研究的深入，國內(nèi)外的學(xué)者發(fā)現(xiàn)梗死的心肌處于氧化應(yīng)激（oxidative stress, OS）的狀態(tài)[6]。越來越多的研究證明，氧化應(yīng)激與心肌梗死的發(fā)生及發(fā)展轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。氧化應(yīng)激是指機(jī)體收到有害刺激時(shí)，體內(nèi)所產(chǎn)生的活性氧自由基化（reactive oxygen species,ROS）及活性氮自由基（reactive ntrogen species,RNS）所引起的細(xì)胞和組織的病理反應(yīng)。過量的ROS可能會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)凋亡甚至壞死。MDA是脂質(zhì)過氧化物的最終產(chǎn)物，能反映氧自由基的產(chǎn)生，其含量不僅能反映體內(nèi)氧自由基的形成，而且能夠反映氧自由基引起的組織損傷的嚴(yán)重程度[7]。SOD是一種特殊的清除劑，能減少自由基對(duì)心肌細(xì)胞的損傷。Eskandari等[8]通過對(duì)200例患有心血管疾病的患者及200名正常對(duì)照組的患者篩選所有受試者的基因組DNA，發(fā)現(xiàn)其中SOD1基因啟動(dòng)子缺失的受試者，其患有心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)明顯升高。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)出現(xiàn)心肌梗死時(shí)，大鼠血清中MDA出現(xiàn)了明顯的升高，氧化應(yīng)激加重而SOD出現(xiàn)了降低，說明心肌細(xì)胞受到了損害。但當(dāng)給予丹參川芎嗪干預(yù)后，降低了MDA的水平，同時(shí)SOD的水平得到提高，說明心肌的損傷減少，SOD對(duì)于自由基的清除能力增強(qiáng)，對(duì)心肌細(xì)胞起到了保護(hù)作用。

通過我們對(duì)心肌梗死模型大鼠研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)給予大鼠丹參川芎嗪干預(yù)后，大鼠的心臟形態(tài)、色澤均明顯優(yōu)于對(duì)照組，說明丹參川芎嗪可以明顯的改善心肌梗死后對(duì)心臟所帶來的傷害。并且進(jìn)一步對(duì)大鼠行動(dòng)態(tài)心動(dòng)圖發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組的大鼠各階段容積-時(shí)間曲線平直，起伏不一致，峰值不明顯；而實(shí)驗(yàn)組經(jīng)過丹參川芎嗪的治療后，其波峰波谷較實(shí)驗(yàn)組明顯，且波峰整齊高度相對(duì)一致，說明實(shí)驗(yàn)組其心肌缺血的程度得到了明顯的改善，同時(shí)可以調(diào)節(jié)心肌供血。EF為射血分?jǐn)?shù)，用于判定心臟功能，而LVEF為左心室射血分?jǐn)?shù)，當(dāng)LVEF＜50%時(shí)，成為心功能不全，當(dāng)LVEF＜40%時(shí)，可判定為收縮期心力衰竭。在我們的研究中通過檢測(cè)左心室射血分?jǐn)?shù)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)給予心梗大鼠模型丹參川芎嗪干預(yù)后，可以有效地提高左心室射血分?jǐn)?shù)，保護(hù)了心臟功能。左室短軸縮短率是左心室收縮功能的指標(biāo)參數(shù)，當(dāng)左室短軸縮短率＞25%時(shí)為左心室收縮功能正常，當(dāng)?shù)陀?5%時(shí)為左心室收縮功能受損。我們研究發(fā)現(xiàn)，丹參川芎嗪可以有效提高FS值，降低了心肌梗死對(duì)于左心室收縮功能的損傷，并且可以有效降低cTnI的表達(dá)。

綜上所述，丹參川芎嗪可以有效改善心肌缺血程度，調(diào)節(jié)心肌供血，降低心肌梗死對(duì)左心室收縮功能的損傷，降低cTnI保護(hù)心臟功能，而其可能機(jī)制是通過提高超氧化物SOD的表達(dá)，降低MDA達(dá)到抗氧化的作用。

[1] Ji MS, Jeong MH, Ahn Y,et al. One-year clinical outcomes among patients with metabolic syndrome and acute myocardial infarction [J]. Korean Circ J, 2013, 43(8): 519.

[2] 胡珍, 陳景瑞, 魏靜, 等. 冠狀動(dòng)脈結(jié)扎制備大鼠心肌梗死模型及評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)研究[J]. 天津中醫(yī)藥, 2016(2): 90-95.

[3] Huang W, Yang Y, Zhi Z,et al. Effect of Salvia miltiorrhiza and ligustrazine injection on myocardial ischemia/reperfusion and hypoxia/reoxygenation injury[J]. Mol Med Rep, 2016, 14(5): 4537-4544.

[4] Wong KL, Wu KC, Wu RS,et al. Tetramethylpyrazine inhibits angiotensin II-increased NAD(P)H oxidase activity and subsequent proliferation in rat aortic smooth muscle cells [J]. Am J Chin Med, 2007, 35(6): 1021-1035.

[5] Feng L, Ke N, Cheng F,et al. The protective mechanism of ligustrazine against renal ischemia/reperfusion injury[J]. J Surg Res, 2011, 166(2): 298-305.

[6] 樊春荔, 吳嘉, 汪俊軍. 心血管疾病氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)microRNAs的研究進(jìn)展[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志, 2015, 33(10):779-781.

[7] Shafaroodi H, Hashemi M, Sharif ZN,et al. The possible role of nitric oxide and oxidative stress in the enhanced apoptosis of cardiac cells in cirrhotic rats [J]. Acta Med Iran, 2017, 55(1): 29.

[8] Eskandarinasab E, Kharazinejad E, Nakhaee A,et al.50-bp Ins/Del polymorphism of SOD1 is associated with increased risk of cardiovascular disease [J]. Acta Med Iran, 2014, 52(8): 591-595.

濟(jì)南市衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.2014-11）