PCI術前給予替羅非班聯合阿托伐他汀對急性心肌梗死患者外周血微RNA表達及血管內皮功能的影響Δ

張建坤，單微，張迎春，賈翠英，于磊，耿峰，李春峰（.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院檢驗科，黑龍江齊齊哈爾 6000；.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院心血管二科，黑龍江齊齊哈爾 6000；.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院藥局，黑龍江齊齊哈爾 6000；4.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院心內一科，黑龍江齊齊哈爾 6000）

PCI術前給予替羅非班聯合阿托伐他汀對急性心肌梗死患者外周血微RNA表達及血管內皮功能的影響Δ

張建坤1＊，單微1，張迎春1，賈翠英1，于磊2，耿峰3，李春峰4#（1.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院檢驗科，黑龍江齊齊哈爾 161000；2.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院心血管二科，黑龍江齊齊哈爾 161000；3.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院藥局，黑龍江齊齊哈爾 161000；4.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院心內一科，黑龍江齊齊哈爾 161000）

目的：探討經皮冠狀動脈介入術（PCI）術前給予替羅非班聯合阿托伐他汀對急性心肌梗死患者外周血微RNA（miRNA）表達及血管內皮功能的影響。方法：選取2015年1月－2016年6月我院收治的急性心肌梗死患者80例作為研究對象，按照隨機數字表法分為對照組和觀察組，各40例。兩組患者均進行抗凝治療；對照組患者于PCI術前30 min口服阿司匹林腸溶片300 mg+硫酸氫氯吡格雷片75 mg+阿托伐他汀鈣片20 mg；觀察組患者在對照組基礎上給予注射用鹽酸替羅非班首次劑量0.5 mg+0.9%氯化鈉注射液100 mL，iv，之后改為0.4 μg/（kg·min）泵注，30 min后改為0.1 μg/（kg·min）泵注，持續時間為24 h。觀察兩組患者給藥前和PCI術后外周血miRNA（miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b、miRNA-499）表達水平、肱動脈內徑及血管內皮功能指標[血管性假血友病因子（vWF）、內皮素1（ET-1）、一氧化氮（NO）]水平，并記錄不良反應發生情況。結果：治療前，兩組患者上述指標比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者miRNA表達水平及vWF、ET-1水平均顯著降低，且觀察組顯著低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；兩組患者肱動脈內徑及NO水平均顯著增加，且觀察組顯著大于或高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。兩組患者治療過程中均未見明顯的不良反應發生。結論：PCI術前給予替羅非班聯合阿托伐他汀治療急性心肌梗死，可降低患者miRNA表達水平，增大肱動脈內徑，對血管內皮功能具有保護作用，且安全性較高。

替羅非班；阿托伐他汀；急性心肌梗死；經皮冠狀動脈介入術；外周血；微RNA；血管內皮功能

急性心肌梗死是臨床較為常見的心血管疾病，主要由冠狀動脈內的硬化斑塊發生破裂或血栓形成所致，具有較高的病死率。臨床治療急性心肌梗死的主要方法為經皮冠狀動脈介入術（Percutancous coronary intervention，PCI），可通過手術重建冠狀動脈血運，進而改善患者心肌供血及相關臨床癥狀[1-2]。但研究發現，PCI術中應用的擴張球囊可對患者的冠狀動脈血管內皮產生不同程度的損傷，增加了患者PCI術后急性、亞急性冠狀動脈內血栓再形成和支架內再狹窄的發生風險，影響其臨床療效及遠期預后[3]。目前，臨床針對上述問題尚缺乏有效的干預手段，一般通過應用降脂藥物（如阿托伐他汀等）進行調脂、抗血栓和抗血小板等治療，但降脂藥物對血管內皮功能的影響尚不明確[4]。鑒于此，本研究探討了PCI術前給予替羅非班聯合阿托伐他汀對急性心肌梗死患者外周血微RNA（miRNA）及血管內皮功能的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標準

納入標準：（1）符合《內科學》中急性心肌梗死的診斷標準[5]；（2）符合PCI指征；（3）年齡45～75歲；（4）患者知情同意并簽署知情同意書。

排除標準：（1）惡性腫瘤患者；（2）嚴重的內科疾病患者；（3）嚴重的肝、腎、肺功能不全者；（4）慢性傳染性疾病患者；（5）精神疾病患者；（6）存在藥物過敏史患者；（7）存在心臟介入術史患者。

1.2 研究對象

本研究方案經醫院醫學倫理委員會審核通過后，選取2015年1月－2016年6月我院收治的急性心肌梗死患者80例作為研究對象，按照隨機數字表法分為對照組和觀察組，各40例。兩組患者的年齡、性別、病程、心肌梗死發作時間、靶血管和并發癥等一般資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性，詳見表1。

1.3 治療方法

兩組患者均按照《急性冠狀動脈綜合征非血運重建患者的抗血小板治療的中國專家共識（修訂案）》[6]進行抗凝治療。對照組患者于PCI術前30 min口服阿司匹林腸溶片（上海信誼百路達藥業有限公司，批準文號：國藥準字H31022475，規格：25 mg）300 mg+硫酸氫氯吡格雷片（深圳信立泰藥業股份有限公司，批準文號：國藥準字H20000542，規格：25 mg）75 mg+阿托伐他汀鈣片（北京嘉林藥業股份有限公司，批準文號：國藥準字H20093819，規格：20 mg）20 mg；觀察組患者在對照組基礎上給予注射用鹽酸替羅非班[山東新時代藥業有限公司，批準文號：國藥準字H20090227，規格：12.5 mg（以替羅非班計）]首次劑量0.5 mg+0.9%氯化鈉注射液100 mL，iv后即改為0.4 μg/（kg·min）泵注，30 min后改為0.1 μg/（kg·min）泵注，持續時間為24 h。

表1 兩組患者一般資料比較Tab 1 Comparison of general information of patients between 2 groups

1.4 觀察與檢測指標

（1）檢測兩組患者給藥前和PCI術后外周血miRNA（miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b、miRNA-499）的表達水平。采集兩組患者清晨空腹外周血5 mL，置于不含抗凝劑的試管中靜置30 min，經3 000 r/min（離心半徑8 cm）離心15 min后提取上清液低溫貯存。采用Taq-Man Micro RNA Assays中聚合酶鏈反應（PCR）引物探針混合液（美國賽默飛世爾科技公司）進行PCR擴增及熒光定量檢測，測定血清中miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b、miRNA-499的表達水平；待反應結束后計算閾值循環數（Ct）值，并以倍數的方式計算患者平均miRNA表達水平。試驗嚴格按照miRNA提取試劑盒（哈爾濱北國海基生物科技有限公司）的說明書進行操作。（2）檢測兩組患者給藥前和PCI術后肱動脈內徑及血管內皮功能指標水平。采用IU22型多普勒超聲診斷儀（荷蘭飛利浦公司）檢測兩組患者肘上2～15 cm處的肱動脈內徑，選取心室舒張末期測量前后內膜之間的垂直距離，取平均值作為肱動脈內徑；檢測兩組患者血管內皮功能指標[血管性假血友病因子（vWF）、內皮素1（ET-1）、一氧化氮（NO）]水平，其中vWF、ET-1采用酶聯免疫吸附法測定，NO采用硝酸鹽還原酶法測定。（3）記錄兩組患者治療過程中不良反應的發生情況。

1.5 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件對數據進行統計分析。計量資料以x±s表示，采用t檢驗；計數資料以例數或率表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者治療前后血清miRNA表達水平比較

治療前，兩組患者 miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b和miRNA-499表達水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者上述miRNA表達水平均顯著降低，且觀察組顯著低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），詳見表2。

表2 兩組患者治療前后血清miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b和miRNA-499表達水平比較（x±s）Tab 2 Comparison of the expression levels of serum miRNA-1，miRNA-133a，miRNA-208b and miRNA-499 between 2 groups before and after treatment（x±s）

2.2 兩組患者治療前后肱動脈內徑及血管內皮功能指標比較

治療前，兩組患者肱動脈內徑及血管內皮功能指標（vWF、ET-1、NO）比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者肱動脈內徑及NO水平均顯著增加，vWF、ET-1水平均顯著降低，且觀察組上述指標均顯著優于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），詳見表3。

表3 兩組患者治療前后肱動脈內徑及血管內皮功能指標比較（x±s）Tab 3 Comparison of brachial artery diameter and vascular endothelial function indexes between 2 groups before and after treatment（x±s）

2.3 不良反應

兩組患者治療過程中均未見明顯的不良反應發生。

3 討論

阿托伐他汀是臨床常用的降脂藥物，作為一種羥甲基戊二酰輔酶A還原酶的選擇性、競爭性抑制劑，具有良好的降脂效果，其代謝產物還可對C反應蛋白、氧化型低密度脂蛋白、細胞基質金屬蛋白酶系統的活性產生明顯的抑制作用，進而達到激活血管內皮NO的目的，發揮改善血管內皮細胞功能及降低局部血管內皮血栓形成的作用[7]。替羅非班為可逆性的血小板表面糖蛋白（GP）Ⅱb/Ⅲa型受體拮抗劑，其藥理活性為通過對纖維蛋白原與GPⅡb/Ⅲa受體結合的抑制作用，阻滯血小板的交聯、聚集活動，進而產生有效的抗凝作用[7]。相關研究顯示，靜脈注射替羅非班能夠在短時間內產生強效的血小板抑制作用，對延長患者的出血時間及抑制血栓形成具有重要意義[7-8]。

miRNA作為一種長19～23個核苷酸的內源性非編碼單鏈，通過與靶點信使RNA（mRNA）分子中3′非編碼區域產生互補配對作用，抑制靶點mRNA翻譯，并對其進行特異性切割，從而達到調控靶基因的目的[9-10]。臨床研究顯示，miRNA在細胞的分化和代謝等多種生理過程中具有重要作用，且miRNA的異常變化與機體的多種疾病形成及進展具有一定的相關性，并已經證實心血管疾病患者在病程早期會出現miRNA表達水平的異常變化[9]。動脈內徑的變化可直接反映機體血管的健康程度，當動脈硬度增加時可導致動脈管腔的內徑縮小，提示患者可能存在心血管疾病及臨床預后較差等危險因素[10]。本研究結果顯示，兩組患者治療后miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b和miRNA-499等miRNA的表達水平均顯著降低，肱動脈內徑均顯著增加，這與既往臨床研究[3]結果相一致，提示PCI術前給予替羅非班聯合阿托伐他汀可有效降低患者miRNA表達水平，并增大肱動脈的內徑。

本研究觀察的血管內皮功能指標為vWF、ET-1和NO，其中ET-1是一種用于血管內皮細胞合成的縮血管因子，NO則為舒張血管的主要因子。生理狀態下，當機體的血管內皮受到損傷后，可導致外周血中ET-1水平的快速反應性升高，但NO水平卻表現出明顯的降低狀態[11]。近年來的研究顯示，ET-1和NO比例失調時可誘發血管舒張功能發生障礙[11]。vWF是一種由血管內皮細胞合成的可直接反映血管內皮細胞損傷程度的標志物，其水平越高表示患者內皮細胞的損傷程度越嚴重[11]。因此，通過檢測vWF、ET-1和NO水平對判斷患者是否存在血栓、心血管疾病的預后結局具有重要的臨床意義[12-13]。本研究結果顯示，PCI術后患者vWF、ET-1水平均顯著降低，且觀察組顯著低于對照組；NO水平則顯著升高，且觀察組顯著高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。兩組患者vWF和ET-1水平均介于正常范圍內，但NO水平顯著低于正常值，這可能與患者PCI術后存在血小板活化急劇增加的現象，同時內皮功能受到不同程度的損傷有關[14-15]。

綜上所述，PCI術前給予替羅非班聯合阿托伐他汀治療急性心肌梗死，可降低患者miRNA表達水平，增大肱動脈內徑，對血管內皮功能具有保護作用，且安全性較高。但本研究樣本量相對較小，且未觀察患者的長期療效及心肌梗死的復發情況，有待大樣本、多中心臨床研究的進一步驗證。

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Effects of Tirofiban Combined with Atorvastatin before PCI on miRNA Expression of Peripheral Blood and Vascular Endothelial Function in Acute Myocardial Infarction Patients

ZHANG Jiankun1，SHAN Wei1，ZHANG Yingchun1，JIA Cuiying1，YU Lei2，GENG Feng3，LI Chunfeng4（1.Dept.of Clinical Laboratory，the Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，Heilongjiang Qiqihar 161000，China；2.Dept.Two of Cardiology，the Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，Heilongjiang Qiqihar 161000，China；3.Dept.of Pharmacy，the Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，Heilongjiang Qiqihar 161000，China；4.Dept.One of Cardiology，the Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，Heilongjiang Qiqihar 161000，China）

OBJECTIVE：To investigate the effects of tirofiban combined with atorvastation before PCI on the miRNA expression of peripheral blood and vascular endothelial function in acute myocardial infarction（AMI）patients.METHODS：A total of 80 patients with AMI selected from our hospital as reaserch objects during Jan.2015-Jun.2016 were divided into control group and observation group according to random number table，with 40 cases in each group.Both groups

anticoagulant therapy.Control group was given Aspirin enteric-coated tablets 300 mg+Clopidogrel sulfate tablets 75 mg+Atorvastatin calcium tablets 20 mg orally 30 min before PCI.Observation group was additionally given Tirofiban hydrochloride for injection with initial dose of 0.5 mg+0.9%Sodium chloride injection 100 mL，iv，then adjusted to pump injection of 0.4 μg/（kg·min），30 min later adjusted to pump injection of 0.1 μg/（kg·min），for consecutive 24 h.The levels of peripheral miRNA（miRNA-1，miRNA-133a，miRNA-208b，miRNA-499），the levels of brachial artery diameter and vascular endothelial function indexes（vWF，ET-1，NO）were observed in 2 groups before medication and after PCI，and the occurrence of ADR was recorded.RESULTS：Before treatment，there was no statistical significance in above indexes between 2 groups（P＞0.05）.After treatment，miRNA expression，the levels of vWF and ET-1 were decreased significantly in 2 groups，and observation group was significantly lower than control group，with statistical significance（P＜0.05）.The brachial artery diameter and NO levels of 2 groups were increased significantly，and observation group was significantly greater or higher than control group，with statistical significance（P＜0.05）.No obvious ADR was found in 2 groups during treatment.CONCLU-SIONS：For AMI，tirofiban combined with atorvastation before PCI can reduce miRNA expression，increase brachial artery diameter and protect vascular endothelial function with good safety.

Tirofiban；Atorvastatin；Acute myocardial infarction；PCI；Peripheral blood；miRNA；Vascular endothelial function

R972+.6

A

1001-0408（2017）35-4952-04

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.35.15

黑龍江省衛生計生委科研課題（No.2014-185）

＊主治醫師，碩士。研究方向：心內疾病血液指標檢測評價。電話：0452-2736282。E-mail：964985489@qq.com

#通信作者：主任醫師，碩士。研究方向：心內疾病診治。電話：0452-2736556。E-mail：112994779@qq.com

2017-03-03

2017-09-19）

（編輯：陶婷婷）