激活素A及激活素結合蛋白用于腦血管病治療前后的變化

王 敏 李巖松 鄭 軍

激活素A及激活素結合蛋白用于腦血管病治療前后的變化

王 敏 李巖松 鄭 軍

目的探討激活素A及激活素結合蛋白用于腦血管病患者治療前后的變化。方法選取中國人民解放軍第四六三醫院2015年2月至2017年4月60例腦血管病患者作為研究對象，平均分為兩組，A組為30例腦梗死患者，B組為30例腦出血患者，另外同期抽取30名健康志愿者作為對照組（C組）。A、B兩組均根據患者個體情況給予相應對癥治療，兩組患者治療前后和C組健康志愿者均于晨起空腹抽取外周靜脈血，離心處理后進行放射免疫法測定激活素A水平，雙抗體夾心酶法聯合免疫吸附試驗測定激活素結合蛋白水平，并進行比較分析。結果B組患者治療前外周血激活素A和激活素結合蛋白與C組比較均明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.01），治療后與C組相比均明顯下降，差異無統計學意義（P＞0.05）；A組患者治療前外周血激活素A與C組對比明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.01），但外周血激活素結合蛋白與C組相比較升高不明顯，差異無統計學意義（P＞0.05），治療后外周血激活素A及外周血激活素結合蛋白水平與C組對比均顯著下降，差異無統計學意義（P＞0.05）。結論外周血激活素A及激活素結合蛋白在腦出血患者中表達均處于明顯升高狀態，治療后均恢復正常，而腦梗死患者僅外周血激活素A顯著升高，治療后可恢復正常。

激活素A；激活素結合蛋白；腦出血；腦梗死

激活素是一種雙鏈糖蛋白，能夠促進垂體前葉腺細胞促性腺激素分泌，且對胚胎發育和細胞分化具有較大功效[1]。激活素結合蛋白則是一種從豬和牛卵泡液中分離出來的單戀糖蛋白，其大面積分布著分泌性腺激素的抑制因子，不但可以抑制垂體前葉腺細胞促性腺激素，還能與激活素發生特異性結合，阻斷與其受體作用，達到抑制激活素所有的生物學作用效果。據相關研究顯示[2-3]，激活素與其進行特異結合在丘腦、胎盤、腎上腺以及卵巢等中均有表達，外周血上也可檢測到有關蛋白。還有研究指出[4]，腦血管患者具有明顯的內分泌和免疫功能的變化，但這些變化與激活素A及其結合蛋白有無聯系至今未能清楚闡明。本研究結合60例腦血管病患者和30名志愿者參與激活素A及激活素結合蛋白水平變化進行研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年2月至2017年4月中國人民解放軍第四六三醫院收治的60例腦血管病患者作為研究對象。其中，30例腦梗死患者列為A組，男16例，女14例，平均年齡（50.4±2.6）歲，梗死部位：腔隙性梗死12例，丘腦梗死11例，雙側額葉梗死7例；30例腦出血患者列為B組，男17例，女13例，平均年齡（51.6±3.1）歲，出血部位：腦葉出血13例，丘腦出血11例，腦橋出血6例；同期選取該院30例健康志愿者為C組，男15例，女15例，平均年齡（50.9±2.8）歲。三組性別、年齡構成資料差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 研究方法腦梗死患者需戒煙限酒，調整不良的生活飲食方式；控制血壓、血糖，調脂；還需給予溶栓、抗血小板聚集及抗凝藥物治療，必要時給予血管內介入和手術等特殊治療。腦出血患者需安靜臥床、保證呼吸道通暢；脫水降顱壓，調整血壓、血糖；維持水電解質平衡，給予營養支持和康復治療；同時依據患者的具體癥狀給予鎮靜、止痛處理，必要時行手術治療。A、B兩組患者治療前后及C組健康志愿者均于晨起空腹抽取外周靜脈血4 ml，經過10 min的離心后，置于-20 ℃保存待測，放射免疫法測定激活素A水平，雙抗體夾心酶法聯合免疫吸附試驗測定激活素結合蛋白水平。

1.2.1 外周血激活素A免疫測定取pH 8.0硼酸鹽緩沖液1:1000倍稀釋兔抗激活素A多克隆抗體（0.05 mol/L），置于免測定管中加入稀釋的抗激活素A抗體100 ml/管以及125Ⅰ標記激活素A（10 000 cpm/管），再加入4 ℃孵育過夜的待測血清或標準激活素A（0～6400 ng/L）100 ml/管，每孔加入200 ml/管羊抗兔IgG抗體（1:100），需6 h繼續孵育，加入6%聚乙二醇（PEG）500 ml/管，離心30 min，棄上清。

1.2.2 外周血激活素結合蛋白免疫吸附試驗取pH 9.6碳酸鹽緩沖液稀釋鼠抗激活素結合蛋白單克隆抗體至2.5 mg/L（0.05 mol/L），每孔100 ml包被酶標板，4 ℃過夜，洗液洗板1次，再加入血清蛋白（BSA）于40 ℃封閉1 h（20 g/L），且洗板1次；每孔加入0.25～16 ng/ml標準激活素結合蛋白100 ml或血清樣本，40 ℃孵育1 h；洗板3次，每孔加100 ml兔抗激活素結合蛋白多克隆抗體（1:800），40 ℃孵育1 h；洗板3次，每孔加入100 ml辣根過氧化物酶（HRP）標記羊抗兔IgG抗體（1:1000），40 ℃孵育1 h；洗板3次，每孔加入鄰苯二胺（OPD）底物緩沖液100 ml，需室溫避光顯色5 min，每孔加2 mol/L H2SO4中止反應。

1.3 觀察指標觀察三組研究對象治療前后外周血激活素A水平和外周血激活素結合蛋白水平。

1.4 統計學分析采用SPSS 18.0統計軟件處理研究所得數據，計數資料（例數）用百分率表示，進行χ2檢驗，用±s表示計量資料（平均年齡、外周血激活素A水平、外周血激活素結合蛋白水平），并實施t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 外周血激活素A水平比較A、B兩組患者治療前外周血激活素A與C組相比明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.01），治療后外周血激活素A水平均明顯下降，與C組相比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組患者外周血激活素A水平比較(μg/L,±s)

表1 各組患者外周血激活素A水平比較(μg/L,±s)

組別 例數治療前 治療后 t值 P值C組 301.86±0.21 1.86±0.21 - -B組 305.81±1.37 1.97±0.31 14.9740.000 A組 303.28±0.61 2.01±0.31 10.1660.000 tCB/CA/AB值 15.610/12.056/9.240 1.609/2.194/0.500 PCB/CA/AB值 0.000/0.000/0.000 0.113/0.032/0.619

2.2 外周血激活素結合蛋白水平比較B組患者治療前外周血激活素結合蛋白與C組相比明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.01），而A組患者外周血激活素結合蛋白與C組相比升高不明顯，差異無統計學意義（P＞0.05）；兩組患者治療后外周血激活素結合蛋白水平與C組相比均明顯下降，差異無統計學意義（P＞0.05）；見表2。

3 討論

激活素于1986年首次從豬卵泡液中成功分離出來，其具有雙鏈糖蛋白，可以刺激垂體前葉腺細胞，從而促進性腺激素分泌，其具有調節胚胎發育、細胞分化等作用。針對激活素結合蛋白而言，于1987年成功得到分離（豬與牛卵泡液中），是一種促性腺激素分泌抑制因子，有著廣泛的組織分布，此蛋白除了對垂體前葉腺細胞分泌促性腺激素具有直接抑制作用外，還能特異性結合激活素，具有阻斷激活素的效能，進而與激活素的生物學活性形成中和效應[5]。既往研究可知[6]，激活素及其所持有的特異性結合蛋白，能夠表達于多種組織中，比如卵巢、腎上腺、下丘腦、胎盤、垂體等，而在機體外周血中，同樣能夠檢測出相關蛋白。前期試驗指出[7]，腦梗死患者與腦出血患者的內分泌變化明顯，而且還存在顯著的免疫功能改變，此種變化與激活素A、激活素結合蛋白有關。

表2 各組患者外周血激活素結合蛋白水平比較(μg/L,±s)

表2 各組患者外周血激活素結合蛋白水平比較(μg/L,±s)

組別 例數 治療前 治療后 t值 P值C組 30 5.03±0.41 5.03±0.41 - -B組 30 8.19±1.22 5.01±0.17 14.1400.000 A組 30 5.19±0.20 4.98±0.13 4.8220.000 tCB/CA/AB值 13.448/1.921/8.609 0.247/0.637/0.768 PCB/CA/AB值 0.000/0.060/0.000 0.806/0.527/0.446

激活素屬于多功能生長、分化因子，乃是轉化生長因子b（TGF-b）超家族成員之一，由二硫鍵鏈接的bA、bB兩個亞基構成，分子形式包括激活素B（bBbB）、激活素A（bAbA）與激活素AB（由同源二聚體構聚體bA、bB組成）三種。激活素A為其中一種分子形式，也稱為免疫抑制因子P，與激活素B及激活素AB有著相似的生物學活性，都具有促進垂體前葉腺細胞分泌促性腺激素作用，但由于激活素B活性較弱，一般臨床研究采用激活素A比較多；激活素A不僅具有誘導B淋巴細胞凋亡的作用，而且還具有抑制巨噬細胞活性的作用。以往研究顯示[8]，激活素A與激活素結合蛋白在人體外周血存在表達，但兩者腦血管疾病中產生的作用及規律尚無明確指示，其是否能夠幫助腦血管疾病患者增進免疫功能還有待研究。本研究為更好地觀察激活素A及其結合蛋白在腦血管疾病中的變化狀態，采用放射免疫檢測法對腦出血、腦梗死患者以及健康志愿者作出對比研究。王敬磊等[4]曾在研究中提到，激活素A對冠狀動脈粥樣硬化性心臟病具有一定預測意義，可能與斑塊穩定與否有關，筆者主要針對此觀點展開激活素A對腦血管疾病的研究，結果顯示，腦出血患者治療前外周血激活素A及其結合蛋白與健康志愿者相比均明顯升高，治療后與C組對比明顯下降；而腦梗死患者治療前外周血激活素A與健康志愿者相比明顯升高，但外周血激活素結合蛋白升高不明顯，治療后外周血激活素A及激活素結合蛋白水平與健康志愿者相比均顯著下降。提示，腦梗死患者外周血激活素A及其結合蛋白水平變化不如腦出血患者變化明顯，而兩者經過針對性治療后激活素A與其結合蛋白均恢復正常指標。李力敏[9]等也曾在研究中提到，腦出血患者相比其他腦血管疾病患者的細胞免疫功能明顯較低。與本研究結果基本相似。

綜上所述，外周血激活素A及激活素結合蛋白在腦出血患者中表達均處于明顯升高狀態，治療后均恢復正常，而腦梗死患者僅外周血激活素A顯著升高，治療后可恢復正常。

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10.12010/j.issn.1673-5846.2017.12.018

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鄭軍，E-mail：1214393128@qq.com