淺談沙門氏菌盲樣考核的方法與步驟

【摘 要】 國家食品藥品監(jiān)督管理局為考核檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的檢驗(yàn)?zāi)芰ΓM織了沙門氏菌的盲樣考核。本文記錄并分析了檢驗(yàn)沙門氏菌的方法與步驟。

【關(guān)鍵詞】 沙門氏菌 盲樣考核 方法

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2017.08.003

1 沙門氏菌簡介

沙門氏菌，腸桿菌科腸道桿菌，革蘭氏陰性，種類近千種，按其抗原特異性分為甲、乙、丙、丁、戊等。可導(dǎo)致人體患病的沙門氏菌主要有甲組、乙組的副傷寒菌，丙組的副傷寒豬霍亂桿菌，丁組的傷寒桿菌及腸炎桿菌等。傷寒桿菌、副傷寒甲、乙桿菌主要引起人類患病，而副傷寒豬霍亂桿菌、腸炎桿菌等屬于人獸共患病原菌，對人類主要引起急性胃腸炎，出現(xiàn)食物中毒癥狀。

沙門氏菌在水中可生存2-3周，糞便中可存活1-2個月，冰箱4℃放置3-4個月仍有活力，在自然界可在冰凍土壤中過冬。沙門氏菌在20℃以上即可繁殖，37℃繁殖旺盛。

1.1 生物學(xué)性狀 （形態(tài)、染色及生化反應(yīng)）

革蘭氏陰性菌，大小（0.6～1.0）×（2～4）微米，有菌毛，除雞沙門氏菌和雛沙門菌外均有鞭毛，無芽胞，一般無莢膜。營養(yǎng)要求低，分離培養(yǎng)常用腸道選擇鑒別培養(yǎng)基，形成無色菌落。生化反應(yīng)結(jié)果有重要鑒別意義，如能發(fā)酵葡萄糖、甘露糖、麥芽糖，不發(fā)酵乳糖和蔗糖，不能分解尿素，不能液化明膠，不產(chǎn)生吲哚，可產(chǎn)酸產(chǎn)氣，也有少數(shù)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；硫化氫陽性或陰性，有賴氨酸脫羧酶；動力陽性；對熱敏感，60℃保持20分鐘可殺死該菌；在5%的石炭酸中5分鐘即失去活力。

1.2 抗原構(gòu)造及分類

沙門氏菌抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，一般含有菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面（Vi）三種抗原。

1.3 致病因子及所致疾病

沙門氏菌經(jīng)口進(jìn)入人體，當(dāng)具有一定數(shù)量，經(jīng)胃酸、正常菌群及腸道免疫作用后仍有存留，定位于小腸便可引起疾病。沙門氏菌致病因子主要包括直接侵襲、內(nèi)毒素和腸毒素。沙門氏菌可以直接入侵小腸壁上皮細(xì)胞，也可穿過上皮細(xì)胞進(jìn)一步入侵固有層。小腸派氏淋巴結(jié)M細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)沙門氏菌后，可導(dǎo)致巨噬細(xì)胞吞噬，但巨噬細(xì)胞殺傷系統(tǒng)對沙門氏菌無效，相反導(dǎo)致進(jìn)一步增殖。沙門菌屬的內(nèi)毒素導(dǎo)致人體體溫升高、白細(xì)胞數(shù)值下降，也可激活補(bǔ)提，大量內(nèi)毒素甚至可以導(dǎo)致中毒癥狀和休克。有些沙門氏菌可產(chǎn)生腸毒素，如鼠傷寒沙門菌。

人類沙門氏菌導(dǎo)致疾病主要包括腸傷寒、急性胃腸炎及沙門氏菌菌血癥。

2 沙門氏菌盲樣考核的步驟

2016年7月初接到國家食品藥品監(jiān)督管理局組織的沙門氏菌盲樣考核樣品。

2.1 樣品接收

樣品正常：10個西林瓶和10個奶粉樣品保存完整，編號清晰。編號分別為CODE1、CODE2、CODE3、CODE4、CODE5、CODE6、CODE7、CODE8、CODE9、CODE10。確認(rèn)簽收后按照GB 4789.4-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》開始樣品的檢測。

2.2 檢驗(yàn)過程

2.2.1 第一天：前增菌

在生物安全柜內(nèi)將沙門氏菌樣品的西林瓶打開，取225mL滅菌BPW增菌液加入到無菌均質(zhì)袋中，并加入西林瓶內(nèi)白色小球，混勻溶解。再將與西林瓶編碼相同的奶粉樣品分別加入到上述BPW增菌液中，充分混勻。將沙門氏菌樣品與相同編號的奶粉樣品混合，分別編號CODE1、CODE2、CODE3、CODE4、CODE5、CODE6、CODE7、CODE8、CODE9、CODE10。編號后置于36℃培養(yǎng)18h。

2.2.2 第二天：增菌

按照標(biāo)準(zhǔn)每個樣品移取1mL接種于10mLTTB內(nèi)，于42℃培養(yǎng)24h。同時，每個樣品另取1mL接種于10mLSC內(nèi)，36℃培養(yǎng)24h。

2.2.3 第三、四天：分離

各取增菌培養(yǎng)物1環(huán)，分別劃線接種于一個BS瓊脂平板（36℃培養(yǎng)48h）和一個沙門氏菌顯示培養(yǎng)基平板（36℃培養(yǎng)24h），同時將沙門氏菌陽性菌株和陰性對照菌株大腸埃希氏菌接種顯色培養(yǎng)基；36℃培養(yǎng)24h。見第91頁表3。

根據(jù)沙門氏菌在選擇性培養(yǎng)基上的菌落特征，初步判定CODE3、CODE5、CODE6、CODE9中存在沙門氏菌。

2.2.4 第五天：純化

挑取CODE3、CODE5、CODE6、CODE9在顯色培養(yǎng)基的淡紫色菌落在營養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行純化培養(yǎng)。36℃培養(yǎng)24h。

2.2.5 第六天：生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定

（1）從CODE3、CODE5、CODE6、CODE9純化板上挑取2個以上可疑菌落，進(jìn)行生化試驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)室使用的是北京陸橋生產(chǎn)的沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒。

（2）血清學(xué)鑒定

CODE3、CODE5、CODE6、CODE9均判定為沙門氏菌。

2.2.6 檢測結(jié)果

綜合形態(tài)學(xué)鑒定和生化鑒定，得出本次樣品檢測結(jié)果：

CODE3、CODE5、CODE6、CODE9檢出沙門氏菌；

CODE1、CODE2、CODE4、CODE7、CODE8、CODE10未檢出沙門氏菌。

作者簡介

高元，研究生，中級職稱，現(xiàn)任錦州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所微生物室主任。

劉暢，本科，中級職稱，現(xiàn)任錦州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所中心檢驗(yàn)部副部長。

馮琳琳，研究生在讀，助理工程師，現(xiàn)任錦州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所微生物室檢驗(yàn)員。