酪氨酸酶特異性卵黃抗體Fab’片段的制備及其對酶活力的抑制性能

鐘欣欣，曹立民，林 洪，史佩玉，隋建新*

酪氨酸酶特異性卵黃抗體Fab’片段的制備及其對酶活力的抑制性能

鐘欣欣，曹立民，林 洪，史佩玉，隋建新*

（中國海洋大學食品科學與工程學院，山東 青島 266003）

針對導致黑色素沉淀的酪氨酸酶，制備了特異性卵黃抗體Fab’片段，研究其對酶活力的抑制效果并從動力學角度進行分析。結果表明，胃蛋白酶法制備Fab’片段的最適條件為：pH 4.0、反應比（卵黃抗體-胃蛋白酶）1∶150（mg/U）、反應時間8 h。經免疫親和柱純化后可得理化性質穩定、純度大于95%的Fab’片段；該片段通過非競爭性結合抑制酪氨酸酶活力，IC50為11.16 μmol/L，結合常數為5.79×105，抑制效果相比完整的卵黃抗體分子大大提高。本研究可為卵黃抗體Fab’片段作為潛在的酶活力抑制劑在食品、化妝品和醫藥等行業中應用提供理論參考。

酪氨酸酶；卵黃抗體；蛋白酶解；Fab’片段；活性抑制

酪氨酸酶是一種含銅的氧化還原酶，廣泛存在于生物體中，是生物體合成黑色素的關鍵酶，通過調控其活性可以調控黑色素的生成量，過量的黑色素形成導致人的色素沉著性疾病（如褐斑、黃褐斑、雀斑等）、果蔬褐變及蝦體黑變等，影響人的美觀與食品的質量[1-2]。

卵黃抗體是蛋黃中存在的唯一的免疫球蛋白，具有高的特異性和針對性，其與抗原物質特異性結合后可有效抑制抗原物質的活性，根據此特性，卵黃抗體已被廣泛應用于食品中控制病毒[3-4]、微生物[5-7]及生物酶[8-10]等。然而卵黃抗體分子質量較大，遷移速率慢，容易受到基質的影響，且常規提取方法得到的卵黃抗體中針對目標抗原的特異性抗體含量少，在實際應用中為達到有效抑制效果需要濃度較大的抗體[8-9]。另外卵黃抗體中Fc片段具有一定的免疫原性，對少數雞蛋過敏人群存在一定風險[11-12]，上述因素都在一定程度上限制了卵黃抗體在食品、化妝品和醫藥等行業的推廣應用。國內外研究[13-19]表明，在適宜條件下，卵黃抗體可以被胃蛋白酶酶解生成Fab’片段，即抗原結合片段。Fab類抗體片段具有分子質量小、流動性及組織穿透能力較高、循環半衰期短、結合力高、免疫原性較低、可在原核表達系統中表達和基因工程操作簡便等特點[20-21]。

本研究利用高效液相色譜檢測方法確定胃蛋白酶酶解卵黃抗體制備Fab’片段的最適條件，并對酶解混合物進行免疫親和分離純化，得到高純度的酪氨酸酶特異性卵黃抗體Fab’片段，同時對其理化性質以及從動力學角度對酪氨酸酶活力抑制作用進行探究，為制備特異性卵黃抗體Fab’片段提供有效方法，為抑制劑抑制酶活力效果、探究影響因素和尋求增效因子提供了思路，可作為新型天然抑制劑抑制酪氨酸酶活力從而抑制黑色素的產生，廣泛用于食品、化妝品和醫藥等行業中提供了理論參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

酪氨酸酶卵黃抗體由本實驗室制備[22]；胃蛋白酶（酶活力3 000 U/mg）、辣根酶標記兔抗雞IgG 美國Sigma公司；L-多巴 上海源葉生物科技有限公司；1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride，EDC）、N-羥基琥珀酰亞胺（N-hydroxy succinimide，NHS） 上海浩然生物技術有限公司；3-巰基丙酸（3-mercaptopropionic acid，MPA） 上海晶純試劑有限公司；過氧化氫（30%） 天津百世化工有限公司；硫酸（純度98%） 佳盟化學品有限公司。

1.2 儀器與設備

TSK-GEL SEC分子排阻柱 東曹（上海）生物有限公司；1260高效液相色譜（配有紫外檢測器） 美國Agilent公司；Multiskan MK3酶標儀 芬蘭Labsystems公司；Biosuplar 400 SPR表面等離子體共振儀 天津德尚科技有限公司；0.22 μm水系濾膜 天津市津騰設備有限公司；酪氨酸酶免疫親和柱由實驗室自制。

1.3 方法

1.3.1 胃蛋白酶酶解卵黃抗體條件的建立

從反應體系pH值、反應比（卵黃抗體-胃蛋白酶）、反應時間3 個因素[16-19]進行酶解條件的建立。卵黃抗體用50 mmol/L的乙酸鈉緩沖液稀釋為1 mg/mL，與胃蛋白酶溶液按表1條件在37 ℃水浴中反應，用pH 9.0的Tris溶液將體系pH值調整到7.5左右，以終止酶解反應，產物經0.22 μm無菌濾膜后進行高效液相色譜分析。

表1 卵黃抗體酶解條件的建立Table 1 Enzymatic hydrolysis conditions of egg yolk antibody

1.3.2 高效液相色譜法檢測酶解反應物

參照張茜等[23]的研究方法，具體條件如下：TSKgel G3000 SWXL凝膠色譜柱，流動相為20 mmol/L磷酸緩沖液（phosphate buffered saline，PBS，pH 7.0，含0.3 mol/L NaCl）。柱溫25 ℃，流速0.8 mL/min，上樣量20 μL，在紫外檢測器280 nm波長處采集數據。

1.3.3 Fab’片段的純化及純度鑒定

參照實驗室前期研究[24]，采用免疫親和柱純化酶解后的Fab’片段：用10 mL 0.01 mol/L的PBS（pH 7.4）平衡柱填料體積為4.5 mL的免疫親和柱，一次上樣4 mL酶解液，10 mL 0.1 mol/L Tris-HCl（pH 7.5，含0.15 mol/L NaCl）洗滌，8 mL 0.2 mol/L甘氨酸溶液（pH 2.7，含0.5 mol/L NaCl）洗脫，收集洗脫液，超濾，經0.22 μm無菌濾器除雜進行高效液相色譜鑒定。1.3.4 Fab’片段的理化穩定性分析

研究酸堿穩定性時，分別用PBS（pH 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0）稀釋酪氨酸酶特異性卵黃抗體Fab’片段至1 mg/mL，室溫放置10 min后，將各溶液pH值調至中性并稀釋至1 μg/mL，間接酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法分析Fab’片段活性。研究熱穩定性時，用pH 7.4的PBS稀釋至1 μg/mL，水浴（溫度25、30、40、50、60、70、80、90 ℃）孵育10 min，將各孵育溶液冷卻至室溫后，間接ELISA法[23]測定Fab’片段活性。

1.3.5 Fab’片段對酪氨酸酶活力抑制分析

酶活力測定參照Yi Wei等[25]方法并改進：將50 μL 0.15 mg/mL酪氨酸酶液和100 μL 0.2 mol/L的PBS（pH 6.8）加入到96 孔板中，加入50 μL 1 mmol/L的L-多巴，492 nm波長處測定其在第1、3分鐘的吸光度。每1 mL酶液在1 min內吸光度升高0.01定義為1個酶活力單位（U）。

酶活力抑制率測定：0.15 mg/mL酪氨酸酶溶液和不同濃度抗體常溫按照體積比1∶1混合10 min。將50 μL 0.2 mol/L的PBS（pH 6.8）和100 μL混合液加入到96 孔板中，如前述操作測定酪氨酸酶活力，陰性卵黃抗體作對照。抑制率計算公式如下：

為確定酪氨酸酶特異性卵黃抗體Fab’片段對酪氨酸酶的半抑制率（IC50），測定不同濃度特異性卵黃抗體Fab’片段（1.11、2.22、4.44、11.11、22.22 μmol/L）對酪氨酸酶的抑制活性，相同濃度的胰脂肪酶卵黃抗體作陰性對照，粗提卵黃抗體作陽性對照。分別計算特異性卵黃抗體Fab’片段和粗提卵黃抗體的

雙倒數法作圖分析酪氨酸酶特異性卵黃抗體Fab’片段對酪氨酸酶活力抑制的類型，不同質量濃度Fab’片段（0、0.2、0.5 mg/mL），在不同濃度L-多巴（0.062 5、0.125、0.25、0.5、1 mmol/L）條件下測定酪氨酸酶活力，以酶反應速率的倒數為縱坐標，底物濃度的倒數為橫坐標作圖[28]。

1.3.6 Fab’片段與酪氨酸酶的結合常數測定

采用表面等離子體共振技術測定Fab’片段與酪氨酸酶的結合常數[29]，純水清洗芯片，4 ℃置于0.01 mol/L MPA浸泡12 h，100%乙醇清洗，室溫下置于EDC-NHS（0.1 mol/L EDC與0.025 mol/L NHS體積比1∶1）浸泡1 h，乙醇清洗晾干。

將經處理后的芯片固定于表面等離子體共振儀，以35 μL/min的流速通入PBS采集背景，信號穩定后，通入10 mg/mL酪氨酸酶，信號穩定后通入PBS，信號穩定后通入不同質量濃度Fab’片段（0.25、0.5、1.0 mg/mL），不同質量濃度粗提卵黃抗體（10、20、30 mg/mL）作對比，信號穩定后通入PBS溶液沖洗至信號達到穩定狀態，記錄信號變化情況。

2 結果與分析

2.1 胃蛋白酶酶解卵黃抗體條件分析

圖1 胃蛋白酶酶解卵黃抗體的動態變化圖Fig. 1 Dynamic changes of egg yolk IgY during pepsin digestion

如圖1所示，在卵黃抗體與胃蛋白酶反應體系中，隨著反應的進行，完整的卵黃抗體分子逐漸減少，而對應的Fab’片段逐漸增加，除主要的Fab’片段外，隨著酶解的進行，一些分子質量更小的片段也開始出現。根據卵黃抗體峰面積的變化，可以定量計算卵黃抗體的酶解率，比傳統的蛋白檢測技術[16-19]（如十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）具有分析速率快、靈敏度高、重復性高、穩定性好、結果準確等優點[30-31]。

圖2 pH值（A）、反應比（B）、反應時間（C）對酶解產物中卵黃抗體酶解率的影響Fig. 2 Effect of reaction conditions on the hydrolysis eff i ciency of egg yolk IgY

研究發現，卵黃抗體的酶解率隨著pH值的升高而降低，在pH 3.0～4.0之間酶解率較高，pH值高于5.0后酶解反應不再進行（圖2A），考慮到低pH值可能對卵黃抗體活性產生影響，選擇pH 4.0作為最終反應體系的pH值；而反應比對酶解率的影響呈先增大后減小的趨勢，反應比在1∶150時達到最大且維持不變，直到1∶600后酶解率迅速下降（圖2B）；整個反應在達到8 h后，所有的卵黃抗體幾乎被完全水解（圖2C）。

因此，本研究最終確定的酶解條件pH 4.0、反應比1∶150、反應時間8 h，這與Akita等[13]研究的緩沖液pH 4.2、酶解時間9 h基本一致；而與張茜等[23]胃蛋白酶與卵黃抗體的質量比1∶20、緩沖液pH 4.2、酶解時間6 h的條件略有差異，這可能主要是由于胃蛋白酶活力的不同所導致。

2.2 Fab’片段純度測定結果

如圖3所示，酶解完成后，反應體系中的卵黃抗體分子被完全分解成為不同分子質量的片段，經免疫親和純化后，許多出峰時間在12 min以后的小分子片段已經去除，僅得到保留時間在11.6 min的Fab’片段，通過對比峰面積，計算純化后的Fab’片段純度達到95%以上，相比于張茜等[23]經凝膠層析分離之后純度達90%以上，鄒強等[16]利用色譜分析達到91%的純度，本研究采用親和層析所得Fab’片段純度有所提高。

圖3 Fab’片段純度測定的高效液相色譜圖Fig. 3 HPLC pro fi les of Fab’ fragment before and after puri fi cation

2.3 Fab’片段的理化穩定性分析

圖4 pH值（A）和溫度（B）對于Fab’片段免疫活性的影響Fig. 4 Effect of pH (A) temperature (B) on immunological activity of Fab’ fragment

酸堿度和溫度往往是限制蛋白質類生物制品應用的主要因素。pH值穩定性結果表明，酶解得到的酪氨酸酶特異性卵黃抗體Fab’片段在pH 4.0～8.0具有較高的免疫活性，但pH值低于3.0時免疫活性喪失，高于9.0時開始下降（圖4A）。同時其在25～70 ℃溫度范圍內具有較高的免疫活性，當溫度高于60 ℃時，免疫活性開始降低（圖4B）。

2.4 Fab’片段對酪氨酸酶活力的抑制活性

Fab’片段和粗提卵黃抗體對酪氨酸酶活力的抑制表現出濃度依賴性且存在顯著性差異（P＜0.05），濃度增大，抑制率升高（圖5），計算得其IC50分別為11.16、29.74 μmol/L。達到相同的抑制率，所需粗提卵黃抗體的量是Fab’片段的2.66 倍，Fab’片段對酪氨酸酶的抑制效果要顯著優于粗提卵黃抗體，分析原因一是所得Fab’片段分子質量小、特異性強、穿透能力高，能夠更好地與酶的結合位點相結合，從而起到顯著的抑制作用；二是粗提卵黃抗體特異性抗體含量少，分子質量大，由于其自身結構和雜蛋白的存在一定程度上阻礙了其與酶結合位點的結合。

圖5 卵黃抗體對酪氨酸酶活力抑制作用Fig. 5 Inhibitory effect of egg yolk antibody on tyrosinase activity

圖6 Fab’片段對酪氨酸酶的抑制類型Lineweaver-Burk圖Fig. 6 Lineweaver-Burk plot showing non-competitive binding of Fab’to tyrosinase

酶反應動力學顯示反應速率隨著Fab’片段質量濃度的增加而減小，但Km不變（圖6），說明Fab’片段對酪氨酸酶的抑制屬于非競爭性抑制。在此類抑制中，酶與底物和抑制劑的結合位點不同，所以酶與抑制劑結合后還可以與底物結合，因此推斷Fab’片段對酪氨酸酶的抑制作用機制可能是Fab’片段通過抗原抗體的特異性識別與酪氨酸酶結合，導致酪氨酸酶構象的改變或是在酶的底物結合中心附近形成空間位阻，影響了酶與底物的結合，從而降低酶的催化反應，發揮了抑制酶活力的效果。

2.5 Fab’片段與酪氨酸酶的結合常數

表2 卵黃抗體結合常數Table 2 Binding constants of egg yolk antibody and Fab’ fragment

表面等離子體共振技術技術相比于傳統的ELISA方法[23]，能更為直觀地揭示抗原抗體的動態結合和解離過程，量化抗體對抗原的結合能力。由表2可看出，酶解后得到的特異性卵黃抗體Fab’片段與酪氨酸酶的結合常數KA比粗提卵黃抗體高1 個數量級，表明其與酪氨酸酶的結合能力要強于粗卵黃抗體，進一步顯示了Fab’片段對酶活力抑制的優越性。

3 結 論

通過優化pH值、反應比和酶解時間建立了胃蛋白酶酶解卵黃抗體的最適條件：乙酸鈉緩沖液pH 4.0、卵黃抗體與胃蛋白酶反應比1∶150（mg/U）、反應時間8 h；在此條件下水解卵黃抗體并結合免疫親和柱純化，可得到純度為95%以上的Fab’片段；該片段可通過非競爭性結合抑制酪氨酸酶的活性，IC50為11.16 μmol/L，結合常數為5.79×105，且理化性質穩定。本研究結果為酪氨酸酶特異性Fab’片段的制備及其酶活力抑制性能研究提供了理論支持，期望下一步為將Fab’片段作為潛在酶活力抑制劑應用于食品、化妝品和醫藥等行業提供參考。

[1] 陳清西, 宋康康. 酪氨酸酶的研究進展[J]. 廈門大學學報(自然科學版), 2006, 45(5): 731-737. DOI:10.3321/j.issn:0438-0479.2006.05.033.

[2] 郭云集, 宋康康, 李智聰. 甘醇酸對蘑菇酪氨酸酶的抑制作用[J].廈門大學學報(自然科學版), 2008, 47(3): 383-386. DOI:10.3321/j.issn:0438-0479.2008.03.018.

[3] LU Y N, LIU J J, JIN L J, et al. Passive protection of shrimp against white spot syndrome virus (WSSV) using specific antibody from egg yolk of chickens immunized with inactivated virus or a WSSVDNA vaccine[J]. Fish & Shellf i sh Immunology, 2008, 25(5): 604-610.DOI:10.1016/j.fsi.2008.08.010.

[4] 韋嵩, 宋曉玲, 李海兵, 等. 白斑綜合征病毒卵黃抗體對凡納濱對蝦免疫相關酶活力和抗病毒能力的影響[J]. 水產學報, 2009, 33(1):112-118. DOI:10.3321/j.issn:1000-0615.2009.01.015.

[5] KOLLBERG H, CARLANDER D, OLESEN H, et al. Oral administration of specific yolk antibodies (IgY) may prevent Pseudomonas aeruginosa infections in patients with cystic fibrosis:a phase I feasibility study[J]. Pediatric Puimonology, 2003, 35(6):433-440. DOI:10.1002/ppul.10290.

[6] XU Y F, LIN H, SUI J X, et al. Effects of specif i c egg yolk antibody(IgY) on the quality and shelf life of refrigerated Paralichthys olivaceus[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2012,92(6): 1267-1272. DOI:10.1002/jsfa.4693.

[7] ZHANG Q, LIN H , SUI J X, et al. Effects of Fab’ fragments of specif i c egg yolk antibody (IgY-Fab’) against Shewanella putrefaciens on the preservation of refrigerated turbot[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2015, 95(1): 136-140. DOI:10.1002/jsfa.6693.

[8] 黨昕. 多酚氧化酶卵黃抗體的制備及其抑制蝦類黑變效果研究[D].青島: 中國海洋大學, 2013: 42-51.

[9] 張雪, 丁一民, 林洪, 等. 特異性卵黃抗體及其復配因子對南美白對蝦的保鮮效果[J]. 中國漁業質量與標準, 2014, 4(2): 32-38.

[10] 劉帥, 曹立民, 林洪, 等. 胰脂肪酶特異性卵黃抗體對胰脂肪酶活性的抑制作用研究[J]. 食品工業科技, 2016, 37(11): 350-361.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2016.11.064.

[11] 陳代梅, 孫淑清. 抗流感病毒雞卵黃免疫球蛋白IgY的制備和性質[J].化學工業與工程, 2007, 20(6): 448-452.

[12] WILMAR D D S, DENISE V T. IgY: a promising antibody for use in immunodiagnostic and inimmunotherapy[J]. Veterinary Immunology and Immunopatholog, 2010, 135: 173-180. DOI:10.1016/j.vetimm.2009.12.011.

[13] AKITA E M, NAKAI S. Production and purif i cation of Fab’ fragments from chicken egg yolk immunoglobulin Y (IgY)[J]. Immunol Methods,1993, 162(2): 155-164.

[14] SUN S Q, MO W J, JI Y P, et al. Preparation and mass spectrometric study of egg yolk antibody (IgY) against rabies virus[J]. Rapid Communications in Mass Spectrometry, 2001, 15(9): 708-712. DOI:10.1002/rcm.271.

[15] MA X H, SUN S Q, MA X M, et al. Polyclonal antibodies from hen egg yolk (IgY) with hydrolysis activity[J]. The Protein Journal, 2007,26(7): 499-505.

[16] 鄒強, 李敏惠, 楊淑霞, 等. 雞卵黃抗體Fab’的制備及鑒定[J]. 醫學研究生學報, 2010, 23(2): 133-136. DOI:10.3969/j.issn:1008-8199.2010.02.005.

[17] 甄宇紅, 郭潔, 金禮吉, 等. 抗金黃色葡萄球菌IgY的酶解穩定性及活性研究[J]. 現代生物醫學進展, 2007, 7(10): 1510-1512.DOI:10.3969/j.issn:1673-6273.2007.10.022.

[18] 孫秀花. 特異性卵黃抗體活性片段的制備及性能研究[D]. 大連:大連理工大學, 2013: 13-35.

[19] 孫淑清, 段春燕, 胡彥濤, 等. 抗輪狀病毒IgY和Fab’的分離與純化[J]. 化學工業與工程, 2006, 23(4): 317-319. DOI:10.3969/j.issn:1004-9533.2006.04.009.

[20] 劉美君, 高向東, 徐晨. Fab類抗體的研究進展[J]. 國際藥學研究雜志, 2014(3): 318-324. DOI:10.13220/j.cnki.jipr.2014.03.011.

[21] NELSON A L. Antibody fragments: hope and hype[J]. Mabs, 2010,2(1): 77. DOI:10.4161/mabs.2.1.10786.

[22] 隋建新, 林洪, 曹立民, 等. 單增李斯特菌(Listeria monocytogens)雞卵黃抗體的制備及其抑菌活性研究[J]. 食品與發酵工業, 2009,35(2): 1-6. DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2009.02001.

[23] 張茜, 林洪, 黨昕, 等. 腐敗希瓦氏菌卵黃抗體活性片段的制備及抑菌效果的分析[J]. 食品工業科技, 2013, 34(13): 75-78.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2013.13.086.

[24] 丁一民. 免疫親和柱的制備及其對酪氨酸酶卵黃抗體的純化[D].青島: 中國海洋大學, 2015: 15-28.

[25] YI W, CAO R H, PENG W L, et al. Synthesis and biological evaluation of novel 4-hydroxybenzaldehyde derivatives as tyrosinase inhibitors[J]. European Journal of Medicinal Chemistry, 2010, 45(2):639-646.

[26] ABEL B O, ALIREZA R R, ELIZABETH A K. Electrostatic dependence of the thrombin-thrombomodulin interaction[J]. Molecular Biology, 2000, 296: 651-658.

[27] ASHRAF Z, RAFIQ M, SEO S Y, et al. Synthesis, kinetic mechanism and docking studies of vanillin derivatives as inhibitors of mushroom tyrosinase[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2015, 23(17): 5870-5880.

[28] XING R, WANG F, DONG L, et al. Inhibitory effects of Na7PMo11CuO40on mushroom tyrosinase and melanin formation and its antimicrobial activities[J]. Food Chemistry, 2016, 197: 205-211.

[29] YAO Y, ZHENG Z, XU C, et al. Based on biotin-avidin system of surface plasmon resonance biosensor detection sulfamethoxazole interaction with bovine serum albumin[C]//International Conference on Remote Sensing, Environment and Transportation Engineering.IEEE, 2011: 6642-6645.

[30] 唐玲玲, 夏明. 高效液相色譜法在蛋白質分離檢測中的應用[J]. 農產品加工: 學刊, 2009(1): 89-93. DOI:10.3969/j.issn:1671-9646-B.2009.01.026.

[31] OLIVA A, SANTOVE?A A, LLABRES M, et al. Stability study of human serum albumin pharmaceutical preparations[J].Journal of Pharmacy & Pharmacology, 1999, 51(4): 385-392.DOI:10.1211/0022357991772574.

Production and Inhibitory Effect of Specif i c Egg Yolk Antibody Fab’ Fragment against Tyrosinase

ZHONG Xinxin, CAO Limin, LIN Hong, SHI Peiyu, SUI Jianxin*
(College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)

The production of Fab’ fragment from specif i c egg yolk antibody against tyrosinase and its inhibitory activity on tyrosinase were investigated in this paper. The optimal conditions were obtained as follows: pH 4.0, ratio of egg yolk antibody to pepsin 1:150 (mg/U), and reaction time 8 h. Fab’ fragment purif i ed by immunoaff i nity column chromatography to a purity of over 95% exhibited good physicochemical stability. It was demonstrated as a non-competitive inhibitor with an IC50value of 11.16 μmol/L and a binding constant of 5.79 × 105, whose inhibitory effect was much higher than that of IgY. The results of this study can provide a theoretical basis for the application of egg yolk antibody Fab’ fragments in food,cosmetics and pharmaceutical industries as a potential enzyme inhibitor.

tyrosinase; egg yolk antibody; enzymatic proteolysis; fragment antigen binding (Fab’ fragment); enzyme activity inhibition

10.7506/spkx1002-6630-201802019

TS201.6

A

1002-6630（2018）02-0119-05

鐘欣欣, 曹立民, 林洪, 等. 酪氨酸酶特異性卵黃抗體Fab’片段的制備及其對酶活力的抑制性能[J]. 食品科學, 2018,39(2): 119-123.

10.7506/spkx1002-6630-201802019. http://www.spkx.net.cn

ZHONG Xinxin, CAO Limin, LIN Hong, et al. Production and inhibitory effect of specif i c egg yolk antibody Fab’ fragment against tyrosinase[J]. Food Science, 2018, 39(2): 119-123. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201802019. http://www.spkx.net.cn

2016-12-04

中央高校基本科研業務費專項（201413061）；山東省農業應用創新專項

鐘欣欣（1989—），女，碩士研究生，研究方向為食品安全。E-mail：zhongxinxin2014@163.com

*通信作者簡介：隋建新（1981—），男，副教授，博士，研究方向為食品安全。E-mail：suijianxin@ouc.edu.cn