白化金黃倉鼠血液生理指標測定

崔曉霞, 尚世臣, 馬蘭芝, 黃 斌, 尚玉璞, 王冬平, 陳振文, 王全新

(1.軍事科學院軍事醫學研究院實驗動物中心, 北京 100071;2. 首都醫科大學實驗動物科學部，北京 100069;3. 遼寧長生生物技術有限公司， 本溪 117004）

白化金黃倉鼠血液生理指標測定

崔曉霞1, 尚世臣1, 馬蘭芝1, 黃 斌1, 尚玉璞1, 王冬平1, 陳振文2, 王全新3

(1.軍事科學院軍事醫學研究院實驗動物中心, 北京 100071;2. 首都醫科大學實驗動物科學部，北京 100069;3. 遼寧長生生物技術有限公司， 本溪 117004）

目的測定白化金黃倉鼠的血液生理指標，并與野生型金黃倉鼠進行比較。方法用眶靜脈叢采血的方法采集白化及野生型金黃倉鼠全血，制備抗凝血，應用全自動血細胞分析儀及半自動血液凝固分析儀進行測定，應用SPSS17.0軟件包對結果進行統計分析。結果初步測定了白化突變及野生型金黃倉鼠的血液生理指標，二者的部分指標存在差異。結論金黃倉鼠的白化基因突變可能對血液生理指標有一定影響。

白化突變; 金黃倉鼠; 血液生理指標

金黃倉鼠作為實驗動物使用范圍廣泛，根據其生理特點，多用于腫瘤、生殖生理、組織移植、神經、血管生理學及微循環等方面的研究[1-3],同時是乙型腦炎減毒活疫苗的研制和狂犬病毒及乙型腦炎病毒的研究及其疫苗生產的主要生物材料，使用數量很大[4,5]。

白化金黃倉鼠是由金黃倉鼠白化突變個體培育而成，1964年武漢生物制品研究所飼養的金黃倉鼠群中首次發現了白色變種[5]。遼寧長生生物技術有限公司目前已繁殖保種一定規模的種群，但該白化突變金黃倉鼠的生物學特性、白化機制及應用的研究剛剛起步。血液生理指標是實驗動物的重要生物學特性之一，是應用實驗動物進行科學研究的基礎數據。本文針對白化突變金黃倉鼠突變群的白細胞數、紅細胞數、血紅蛋白濃度、紅細胞壓積等22項血細胞和4項凝血因子的生理指標進行測定，比較其與野生型金黃倉鼠在血液生理指標的差異，開發出自主知識產權的白化突變新品種，進而為醫學生物學及藥物研發提供新的動物模型奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級8周齡金黃倉鼠60只，雌雄各30只; 清潔級8周齡白化金黃倉鼠60只，雌雄各30只，均由遼寧長生生物技術有限公司提供[SCXK(遼)2010-0001]。

1.2 儀器設備及主要試劑

血細胞計數使用日本光電MEK-7222K 全自動血細胞分析儀(應用本儀器調試的動物參數)及配套試劑，凝血四項指標測定使用山西亞森實業有限公司FB-40型半自動血液凝固分析儀。

1.3 抗凝血制備

禁食12～24 h，乙醚麻醉后，眼眶靜脈叢采血，EDTA-2K抗凝血用于測定血液生理指標，枸櫞酸鈉抗凝血用于凝血4項指標測定。

1.4 血液生理指標測定及方法

血細胞: 白細胞數(WBC)、紅細胞數(RBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、紅細胞分布寬度(RDW)、血小板數(PLT)、血小板壓積(PCT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)。白細胞分類計數及百分比:淋巴細胞(LYM)、單核細胞(MON)、嗜中性粒細胞(NEUT)、嗜酸性粒細胞(EOS)、嗜堿性粒細胞(BAS)。

凝血4項: 凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(FIB)。

1.5 數據處理

應用Spss17.0統計分析軟件，進行t檢驗和方差數據處理。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血細胞

白化金黃倉鼠與金黃倉鼠的血細胞測定結果顯示, 雄性間LYM差異顯著(P＜0.05), WBC、MCV、MON、NEUT、EOS、BAS、MON%、EOS%、BAS%差異極顯著(P＜0.01)，其余無顯著性差異(P＞0.05); 雌性間EOS%、BAS%差異顯著(P＜0.05),LYM、EOS差異極顯著(P＜0.01), 其余無顯著性差異(P＞0.05)(表 1)。

金黃倉鼠雌性和雄性間WBC、MON、NEUT、MON%、BAS%差異極顯著(P＜0.01), 其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表1)。白化金黃倉鼠雄性和雌性間LYM差異極顯著(P＜0.01), 其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表 1)。

2.2 凝血指標

白化金黃倉鼠與金黃倉鼠的凝血指標測定結果顯示，雄性間APTT差異顯著(P＜0.05)，PT差異極顯著(P＜0.01)，其余均無顯著性差異(P＞0.05); 雌性間TT和FIB差異顯著(P＜0.05)，其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表 2)。

金黃倉鼠雄性和雌性間FIB差異極顯著(P＜0.01),其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表2)。白化金黃倉鼠雄性和雌性間PT差異極顯著(P＜0.01), APTT差異顯著(P＜0.05), 其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表 2)。

3 討論

實驗動物血液生理參數主要是動物自身的遺傳因素與環境因素決定。遺傳因素是內在物質基礎，而環境因素則是外在條件[6]。不同品種(系)的動物血液正常生理值存在較大差異，每個品種(系)的血液指標都有其相對穩定值，這也是區別各品種(系)的一個重要指標[7]。血液生理生化指標在醫學生物學研究中是重要的指標，是判斷動物健康狀態和選擇合格動物的依據，也是病理學、毒理學等研究的重要參考依據[8]。

凝血過程是一系列血漿凝血因子相繼酶解激活的過程，一般分為內源性凝血途徑，外源性凝血途徑和凝血共同途徑。目前，臨床主要用凝血4項(PT、APTT、TT、FIB)測定來反映體內凝血系統的狀況。其中PT是外源性凝血系統較為敏感和常用的篩選試驗，反映血漿中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ和Ⅰ的總體活性; APTT是內源性凝血系統較為敏感和常用的篩選試驗，能反映血漿凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的水平; TT測定主要反映凝血共同途徑纖維蛋白原轉變為纖維蛋白的過程中，是否存在纖維蛋白原異常及是否發生纖溶和是否存在抗凝物質的情況。FIB主要由肝臟合成，是凝血酶作用的底物，在凝血酶水解下形成肽A和肽B，最后形成不溶性的纖維蛋白以達到止血作用。血液離體即開始變化，隨存放方式和時間的不同，凝血因子逐漸消耗而導致檢驗結果不同，實驗室外在因素對實驗準確性十分重要，不適當的標本采集如抽血量多或少、標本溶血、標本凝固和送檢時間往往是導致結果誤差的主要因素[9-14]。本研究表明金黃倉鼠雌雄間FIB差異極顯著; 白化倉鼠的雌雄間PT差異極顯著，APTT差異顯著; 金黃倉鼠與白化倉鼠雄性間PT差異極顯著，APTT差異顯著，雌性間TT和FIB結果差異顯著。

目前，對于金黃倉鼠和白化倉鼠的研究報道很少，本研究對8周齡成年金黃倉鼠及白化倉鼠正常血液生理值進行檢測, 結果表明: 大多數所檢測指標均在正常值范圍內,與灰倉鼠、黑線倉鼠及大、小鼠等無明顯差異[15-19]，同種動物雌雄個體間在少數幾個指標存在一定差異，如W BC、M O N、NEUT、FIB等，這可能與性別有關。而金黃倉鼠與其白化倉鼠雄性之間LYM差異顯著，WBC、MCV、MON、NEUT、EOS、BAS、MON%、EOS%、NEUT%差異極顯著; 雌性間EOS%、NETU%差異顯著，LYM、EOS差異極顯著，這或許與白化倉鼠的突變基因有一定關系。

本研究為白化突變倉鼠積累生物學特性數據，為進一步研究突變機理奠定基礎，對該動物的實驗應用及飼養管理等方面都具有重要意義，從而為其在醫學生物學中的廣泛應用提供依據。

表 1 兩種倉鼠血細胞生理指標雌雄比較Table 1 Comparison of Blood physiological index between male and female

表 2 兩種倉鼠凝血4項指標比較Table 2 Comparison of four items of blood coagulation between male and female

[1] Yu WC, Liu CY, Lai WS. Repeated, intermittent social defeat across the entire juvenile period resulted in behavioral,physiolgical, hormonal, immunlolgical,and neurochemical alterations in young adult male golden hamsters[J]. Front Behav Neurosci, 2016, 10(6):1-15.

[2] Lai WS, Yu WC, Liu CY, et al. A new method for studying social eavesdropping using male golden hamsters[J]. Physiol.Behav, 2014, 128(4):202-211.

[3] Bastida CC, Puga F, Delville Y. Risk assessment and avoidance in juvenile golden hamsters exposed to repeated stress[J].Horm Behav, 2009, 55(6):158-162.

[4] 謝夏陽, 符杰, 龔玉花, 等. SPF級金黃地鼠的主要生物學特性[J]. 中國實驗動物學報, 2007, 15(2):133-138.

[5] 張渝, 白明亮, 吳杰, 等. 近交系白化地鼠-WHBA的培育及部分生物學特性觀察[J]. 北京實驗動物科學, 1992, 9(1):17-20.

[6] 王鉅, 盧靜, 陳振文, 等. 長爪沙鼠血液生理生化正常參考值的研究[J]. 中國實驗動物學報, 2004, 12(2):108-111.

[7] 婁成民. 實驗動物質量管理標準與檢驗檢測技術實用手冊[M]. 貴陽: 貴州科技出版社, 2003:1168.

[8] 孫靖. 實驗動物學基礎[M]. 北京: 北京科學技術出版社,2005:60.

[9] 于秉振, 袁彥平. 金黃地鼠與白化地鼠血漿血管緊張素Ⅱ的測定[J]. 北京實驗動物科學, 1991, 8(1):18-19.

[10] 張英杰, 王會君, 侯榮偉, 等. 凝血四項的臨床應用[J]. 檢驗醫學與臨床, 2013, 10(4):450-452.

[11] 趙紅紀. 常見影響凝血四項檢測結果的因素[J]. 中國醫學創新, 2011, 8(30):77-79.

[12] 叢玉隆. 臨床試驗室分析前質量管理及對策[J]. 中華檢驗醫學雜志, 2004, 27(8):483-487.

[13] 邊紅放, 王曉青. 凝血四項檢測過程中應注意的問題[J].實用醫技雜志, 2007, 20(12):1653-1654.

[14] 廖 揚, 鄭蘭, 石玉玲. 臨床標本采集量對凝血系統檢測結果的影響[J]. 生物技術通訊, 2007, 18(5):809-810.

[15] 趙 爽, 王冬平, 劉曉, 等. 黑線倉鼠及其白化突變系血液生理生化值的測定與分析[J]. 中國比較醫學雜志, 2011, 21(7):17-21.

[16] 王洪, 張華瓊, 黃麟, 等. 雌雄金黃地鼠血液生理生化指標的比較分析[J]. 中國比較醫學雜志, 2008, 18(2):35-42.

[17] 陳朝陽, 張銳虎, 景志杰, 等. 山醫群體近交系中國地鼠血液生理生化指標的測定分析[J]. 中國實驗動物學報, 2010,18(3):262-264.

[18] 王冬平, 李慕, 尚世臣, 等. 不同日齡SPF級KM小鼠血液生理生化正常指標的探討[J]. 實驗動物科學, 2008, 25(4):5-9.

[19] 詹純列, 肖育華, 李新春, 等. 普通級、SPF級 SD、Wistar大鼠血液生化值的測定與比較[J].中國比較醫學雜志,2004, 14(2):94-96.

Q95-33

A

1674-5817(2017)06-0478-04

10.3969/j.issn.1674-5817.2017.06.011

2017-07-18

國家自然科學基金項目(No. 3137227)

崔曉霞(1977-), 女, 碩士, 研究方向: 實驗動物遺傳與病理。E-mail: cuixiaoxia@tom.com

王冬平(1964-), 女, 副研究員, 研究方向: 實驗動物生物學特性研究。E-mail: wangdp6493@126.com陳振文(1959-), 男, 教授, 研究方向: 實驗動物遺傳學。E-mail: czwen@ccmu.edu.cn