P16、Stathmin-1及Ki67在宮頸上皮內瘤變中的表達與意義

張晴 李丹 岳欣 朱菡 黃馨逸 王旭波(通訊作者)

221000南京中醫藥大學附屬徐州市中醫院病理科

P16、Stathmin-1及Ki67在宮頸上皮內瘤變中的表達與意義

張晴 李丹 岳欣 朱菡 黃馨逸 王旭波(通訊作者)

221000南京中醫藥大學附屬徐州市中醫院病理科

目的：探討P16、Stathmin-1、Ki67在宮頸上皮內瘤變中的表達與臨床意義。方法：收治宮頸病變患者92例作為觀察組，選擇20例慢性宮頸炎標本作為對照組，均檢測P16、Stathmin-1、Ki67表達情況。結果：對照組P16、Stathmin-1及Ki67的陽性率顯著低于觀察組(P＜0.05)。直線相關性顯示，P16、Stathmin-1及Ki67表達都呈現兩兩正向相關性(P＜0.05)。結論：P16、Stathmin-1和Ki67在不同級別的宮頸上皮內瘤變的病理診斷中有重要意義。

免疫組化技術；P16；Stathmin-1；Ki67；子宮頸上皮內瘤變

宮頸癌是婦科腫瘤中的第二大惡性腫瘤，是由宮頸上皮內瘤變(CIN)漸進性發展的一種腫瘤。CINⅠ在臨床上以隨訪為主，CINⅡ、CINⅢ臨床上則需要積極地手術治療。我們通常把常規病理診斷認作是“金標準”，但是，因為缺乏客觀依據，而且受到病理科醫師自身及彼此之間的可變性的因素影響，對宮頸鱗狀上皮病變的病理學診斷很大程度上會出現偏差，可導致臨床漏診或者過度治療。因此，為了提高宮頸病變診斷的準確性，使用有效的生物學標記物為組織病理學診斷提供客觀依據就顯得尤為重要[1-4]。而P16、Stathmin-1、Ki67在宮頸病變的過程中可以作用于細胞的周期，并參與細胞的增殖、分裂及腫瘤生成的過程，在臨床醫學中具有較高的應用價值。2015年10月-2017年5月收治宮頸上皮內瘤變患者92例作為研究對象，探討宮頸內皮上皮瘤變p16、Stathmin-1及Ki67的表達情況，并分析其臨床診斷價值，現報告如下。

資料與方法

對2015年10月-2017年5月于我院就診的首次行宮頸活檢手術的92例(觀察組)宮頸上皮內瘤變患者行石蠟組織包埋，并且排除子宮次全切除后、既往有子宮疾病病史診療后的患者。患者年齡20～74歲，平均36.67歲。其中，CINⅠ32例，CINⅡ30例，CINⅢ30例。選所有的切片均由資歷較深的兩名病理醫師共同閱片。慢性宮頸炎20例作為對照組。

檢測方法：所有標本均用10%的中性甲醛固定，常規進行脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋，然后連續4 μm厚度切片，行HE染色，在奧林巴斯CX31光學顯微鏡下進行組織形態學觀察，確定病理診斷及分組。P16、Stathmin-1和Ki67檢測采用免疫組織化學SP法，實驗操作嚴格地按照試劑盒說明書進行，以已知陽性片分別做P16、Stathmin-1和Ki67陽性對照染色，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對照染色。其中鼠抗人P16單克隆抗體、鼠抗人Stathmin-1單克隆抗體、鼠抗人Ki67單克隆抗體及SP法試劑盒等均為福州邁新生物技術開發公司生產。

判定標準：用光學顯微鏡觀察顯色反應，在高倍鏡下(×400)對每一張切片隨機選擇具有代表性的5個視野，并且每個視野計數200個細胞，一共計數1 000個細胞，然后計算每張切片陽性細胞數所占的百分比。①P16蛋白表達：細胞核或細胞質出現棕黃色顆粒為陽性，見圖1。②Stathmin-1蛋白表達：細胞質內見到棕黃色顆粒為陽性，見圖2。③Ki67表達：細胞核內出現棕黃色顆粒陽性，見圖3。④按照陽性細胞百分比的多少分4級：無陽性細胞(-)為0～10%，弱陽性(+)為10%～25%，中度陽性(++)，25%～50%，＞50%強陽性(+++)。

統計學方法：采取SPSS 13.0分析，以Spearman相關分析比較患者P16、Stathmin-1及Ki67的表達關系，運用秩和檢驗統計P16、Stathmin-1及Ki67在宮頸上皮內瘤變中的表達差異，P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

各種不同病變組織中P16和Ki67的表達：P16蛋白在對照組的陽性率為20%，顯著低于觀察組(CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)68.0%、100%及100%，差異有統計學意義(P＜0.05)。陽性表達強度結果顯示：CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ之間比較，差異有統計學意義(P＜0.05)，且CINⅠ＜CINⅡ＜CINⅢ。表明P16的表達強度隨著病變的加重呈正相關。Stathmin-1蛋白在對照組的陽性率30%，顯著低于觀察組(CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)71%、93%及96%，差異有統計學意義(P＜0.05)。陽性表達強度上CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ之間比較，差異有統計學意義(P＜0.05)，且CINⅠ＜CINⅡ＜CINⅢ。表明Stathmin-1的表達強度隨著病變的加重呈正相關。Ki67表達水平檢測結果顯示，Ki67在對照組的陽性率30%，顯著低于觀察組(CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)78%、96%及100%，差異有統計學意義(P＜0.05)。CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ之間比較，差異有統計學意義(P＜0.05)，且CINⅠ＜CINⅡ＜CINⅢ。表明Ki67的表達強度與病變的加重呈正相關，見表1。

P16、Stathmin-1及Ki67三者間的關聯性：3種抗體在宮頸組織中的表達結果經Spearman相關分析，P16陽性表達在慢性宮頸炎和CIN之間呈正相關(r=0.785，P＜0.05)；Stathmin-1陽性表達在慢性宮頸炎和CIN之間呈正相關(r=0.719，P＜0.05)；Ki67陽性表達慢性宮頸炎和CIN之間呈正相關(r=0.683，P＜0.05)。

表1 P16、Stathmin-1及Ki67在宮頸各型病變中的表達(n)

圖1 P16在CINⅡ的表達(SPx100)

圖2 Stathmin-1在CINⅡ的表達(SPx100)

圖3 Ki67在CINⅡ的表達(SPx100)

討 論

宮頸癌是婦科最常見得惡性腫瘤之一，其發病率有逐年上升及年輕化的趨勢，其中多數為鱗狀細胞癌，多數人認為宮頸癌的發生與性生活過早、多產、多個性伴侶及HPV感染等因素有關[5]。但是宮頸癌的發展過程時間比較長，病變的發展過程為長期慢性宮頸炎-宮頸上皮內瘤變-原位癌-浸潤癌，尤其是癌前病變，病理上根據異型增生的細胞累及的宮頸鱗狀上皮的層次，分為CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ。針對癌前病變進行及時、準確的分析，有利于預防與控制宮頸癌的發生。

P16基因是直接參與細胞周期調控的抑癌基因，P16基因的失活可使得宮頸上皮細胞的細胞周期發生紊亂，從而啟動了一系列的癌變過程。P16基因定位于細胞核內，屬于抑癌基因，編碼產物是16KD的蛋白，是作用于細胞分裂周期關鍵酶之一的CDK4的抑制因子，可以抑制細胞增殖和腫瘤發生。本組資料顯示，CIN組中P16陽性表達率明顯高于正常對照組，差異有統計學意義；P16在宮頸CINⅡ及CINⅢ組陽性表達率明顯高于宮頸CINⅠ組，差異有統計學意義。此結果與顧依群等的報道相近[6]，數據表明P16的表達隨著宮頸病變的級別上升而表達強度增強，與既往研究結果一致[7，8]，是宮頸上皮內瘤變病理診斷的很好的補充[9]，有效提高了對早期宮頸病變進展的預測效果，從而可以對這部分患者進行密切監測及早期干預治療。

Stathmin-1是一種微管解聚蛋白，調節微管動力和紡錘體的形成，影響細胞的有絲分裂，從而改變細胞周期分布，影響細胞的生物學行為。Brooke等研究證實Stathmin-1在宮頸上皮內瘤變高表達，且與病變級別相關[10]。本研究中Stathmin-1在慢性宮頸炎中的陽性表達率30%，在CINⅠ中的陽性表達率71%，在CINⅡ級中的陽性表達率93%，在CINⅢ級中的陽性表達率96%，總體陽性表達率差異有統計學意義(P＜0.01)。本研究中CIN組織中Stathmin-1與P16蛋白表達有正相關性，與Howiitt等的報道一致[11]。所以Stathmin-1協同P16檢測可提高宮頸上皮內病變的分級準確率。

Ki67是表達于增殖期細胞的核抗原，參與細胞周期的調控。Ki67主要用于判斷細胞的增殖活性，可在除G0期外的活動周期(Gl、S、G2和有絲分裂期)中表達，被公認為是能夠準確且可靠反映細胞增殖活性的客觀指標。本研究中，Ki67在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ中的陽性表達率分別為30%、78%、96%、100%，且陽性的強度隨著病變級別的升高而越來越強。Mimica等研究發現[12]，Ki67檢測可預測hrHPV感染，且Ki67蛋白與CIN程度相關，在CINⅡ、CINⅢ中的表達更高，說明Ki-67檢測是使CIN分類更準確的輔助方法。近些年來，有些學者在對CIN的研究中，發現P16和Ki67兩種蛋白的表達在CIN病變中呈正相關[13]，提示宮頸腫瘤的發生是一個多基因突變的結果，并且提示P16和Ki67在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌的發生、發展中具有協同作用，因此聯合檢測P16和Ki67，可作為CIN分級診斷的輔助方法。

綜上所述，宮頸上皮內瘤變是多基因、多因素共同作用的結果，準確、客觀地診斷宮頸腫瘤和分級對臨床上進一步治療以及預后評價是非常重要的。本研究結果顯示，CIN組中聯合檢測P16、Stathmin-1和Ki-67，可以輔助CIN的病理診斷，提高CIN的診斷準確率，使診斷更加客觀，為以后的治療方案提供合理依據，進而可以減輕患者的精神及經濟負擔。美國陰道鏡協會及CAP頒布的專家共識中提出，在判斷宮頸高、低級別CIN中，P16被公認為是有診斷意義的標記，而Stathmin-1作為一個新的指標是否能單獨作為診斷參考指標還有待進一步研究證實。

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Expression and significance of P16,Stathmin-1 and Ki67 in cervical intraepithelial neoplasia

Zhang Qing,Li Dan,Yue Xin,Zhu Xi,Huang Xinyi,Wang Xubo(Corresponding author)
Department of Pathology,the Traditional Chinese Medicine Hospital of Xuzhou City Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine 221000

Objective:To explore the expression and significance of P16,Stathmin-1 and Ki67 in cervical intraepithelial neoplasia.Methods:92 patients with cervical lesions were selected as the observation group.20 cases of chronic cervicitis specimens were selected as the control group.The expressions of P16,Stathmin-1 and Ki67 were detected.Results:The positive rates of P16,Stathmin-1 and Ki67 in the control group were significantly lower than those in the observation group(P＜0.05).Linear correlation showed that the expression of P16,Stathmin-1 and Ki67 showed positive correlation with each other(P＜0.05).Conclusion:P16,Stathmin-1 and Ki67 had important significance in the pathological diagnosis of different grades of cervical intraepithelial neoplasia.

Immunohistochemical technique;P16;Stathmin-1;Ki67;Cervical intraepithelial neoplasia

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.34.74