短梗五加果多酚預防大鼠動脈粥樣硬化作用

何忠梅，李成恩，段翠翠，趙玉娟，高 磊，欒 暢，張連學，李盛鈺,*

（1.吉林農業大學中藥材學院，吉林 長春 130118；2.吉林省農業科學院農產品加工研究所，吉林 長春 130033）

短梗五加果多酚預防大鼠動脈粥樣硬化作用

何忠梅1，李成恩1，段翠翠2，趙玉娟2，高 磊2，欒 暢2，張連學1，李盛鈺2,*

（1.吉林農業大學中藥材學院，吉林 長春 130118；2.吉林省農業科學院農產品加工研究所，吉林 長春 130033）

目的：研究短梗五加果多酚（Acanthopanax sessiliflorus fruit polyphenols，ASFP）對大鼠動脈粥樣硬化（atherosclerosis，As）的預防作用，并探討其作用機制。方法：40 只雄性SD大鼠隨機平均分成4 組，每組10 只。采用高脂飲食結合腹腔注射VD3的方法建立As模型，不同劑量ASFP給藥組自造模開始之日起分別灌胃150、75 mg/（kg·d）的ASFP，空白組和高脂飲食組大鼠灌胃等量生理鹽水，各實驗組連續處理12 周后，檢測大鼠血清生理生化水平并計算As指數；蘇木素-伊紅染色觀察大鼠主動脈As病變情況；Western blot檢測主動脈中黏附分子和絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路關鍵基因的蛋白表達水平。結果：與高脂飲食組相比，ASFP能顯著降低大鼠血清中的血脂、黏附分子和炎癥因子水平，減少主動脈中的脂質沉積，改善各層結構排列紊亂，顯著降低主動脈中細胞間黏附分子-1、血管細胞黏附分子-1、磷酸化p38和磷酸化細胞外信號調節蛋白激酶1/2（phospho-extracellular signal regulated kinases 1/2，p-ERK1/2）的蛋白表達量。結論：ASFP具有預防As的作用，其作用可能與其降血脂和抑制p38 MAPK和ERK1/2 MAPK信號通路，進而抑制炎癥因子的表達有關。

短梗五加果；多酚；動脈粥樣硬化；降血脂；抗炎

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，As）是一種影響大、中動脈的慢性進行性疾病，其中脂質介導的炎癥反應在其形成中起關鍵作用[1]，其主要臨床表現為：1）冠狀動脈疾病，導致急性心肌梗死和心源性猝死；2）腦血管疾病，導致中風；3）外周動脈疾病，導致四肢和內臟缺血[2]。因此，As及其誘發的并發癥是導致全球范圍內人群死亡的主要原因之一。目前用于防治As的藥物主要是一些他汀類、貝特類、煙酸類等化學合成類藥物，長期服用毒副作用大[3]，因而從天然產物中尋找用于防治As的生物活性成分具有十分重要的意義。

植物多酚是植物的次級代謝產物之一，具有毒副作用低、安全性高等優點，關于植物多酚對As的預防和治療，前人已進行了一些研究。Chen等[4]發現玫瑰茄葉多酚提取物能夠上調肝臟X受體（LXRα）-三磷酸腺苷結合盒轉運體A1（ABCA1）信號通路，進而抑制氧化低密度脂蛋白氧化和泡沫細胞形成，從而防止As的形成；Xu Zherong等[5]研究發現，蘋果多酚能夠通過抑制氧化低密度脂蛋白誘導的絲裂原活化蛋白激酶/核因子κB（mitogen-activated protein kinase/ nuclear factor κB，MAPK/NF-κB）的活化，減輕動脈血管內皮部位的炎癥反應，進而預防As的形成；連冠等[6]研究發現，葡萄籽多酚提取物能通過降低血漿中的總膽固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG）水平，減少泡沫細胞的形成，進而發揮抗As的作用；王振宇等[7]研究發現，蘋果多酚能通過調節脂肪代謝來預防As的發生。因此，從天然產物中提取植物多酚用于防治As具有十分重要的意義。

短梗五加（Acanthopanax sessiliflorus（Ruqr. et Maxim）Seem.），又稱無梗五加，為五加科五加屬植物，在《本草綱目》和《中華本草》中均有記載，2008年被衛生部批準為新資源食品[8]。據報道，短梗五加果含有多糖類、三萜類、木質素類、花色苷類、揮發性成分、酚酸類等物質[9]，具有抗炎、抗腫瘤、抗疲勞、鎮靜催眠、抗氧化、免疫調節、抗血栓和抗血小板凝集、抑制人臍靜脈內皮細胞侵染和血管緊張素轉化酶等生物活性[10-16]，而關于短梗五加果多酚（Acanthopanax sessilif l orus fruit polyphenols，ASFP）對As是否有預防作用尚鮮見報道。本研究從短梗五加果中提取多酚，采用高脂飲食結合腹腔注射VD3的方法建立As大鼠模型，對ASFP預防As的作用及其可能的作用機制進行研究，以期為進一步研究利用短梗五加果，開發天然防治As的產品以及擴大保健品來源提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

6～8 周齡雄性SPF級SD大鼠，體質量（200±20） g，購自遼寧長生生物技術有限公司，許可證號SCXK（遼）2015-0001。

短梗五加果為短梗五加的干燥成熟果實，由丹東五加高新農業科技開發有限公司提供。

D101大孔吸附樹脂 天津精細化工研究所；基礎飼料、高脂飼料（83.3%基礎飼料+10%豬油+3%膽固醇+3%白砂糖+0.5%膽酸鈉+0.2%丙基硫氧嘧啶，均為質量分數） 公主嶺市鑫達動物養殖場；VD3注射液上海通用藥業股份有限公司；大鼠TC、TG、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、細胞間黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）、血管細胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM-1）、E-selection、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素-1β（interleukin-1β，I L-1 β）、單核細胞趨化蛋白-1（m o n o c y t e chemoattractant protein-1，MCP-1）、IL-6、干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）、酶聯免疫吸附檢測（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒上海源葉生物科技有限公司；RIPA蛋白提取試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒 北京鼎國昌盛生物技術有限公司；抗細胞外信號調節蛋白激酶1/2（extracellular signal regulated kinases 1/2，ERK1/2）抗體 北京博奧森生物技術有限公司；抗ICAM-1抗體 美國Santa Cruz公司；抗VCAM-1抗體 英國Abcam公司；抗p38 MAPK、p-p38 MAPK、p-p44/p42 MAPK抗體 美國CST公司；辣根過氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP）標記的山羊抗兔二抗 北京中杉金橋生物技術有限公司；其余所用試劑均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

CP124S分析天平 德國Sartorius公司；DHP-9 272電熱恒溫培養箱 上海一恒科技有限公司；Sorvall Evolotion RC型高速冷凍離心機 美國Thermo公司；BX 50光學顯微鏡 日本Olympus公司；ELx800型全自動酶標儀 美國Bio-Tek公司；Cary 300紫外-可見分光光度計美國Varian公司；電泳和轉印系統 美國伯樂公司；ChemiScope 5600一體式化學發光成像系統 上海勤翔科學儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 ASFP的制備

3 kg干燥的短梗五加果分別用10、8倍體積分數為50%的乙醇80 ℃回流提取2次，每次1 h，合并提取液，300 目濾布過濾，濾液減壓回收乙醇后凍干，得短梗五加果粗多酚。將短梗五加果粗多酚進行D101大孔樹脂柱純化，依次用蒸餾水、30%、50%、70%和95%的乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫得到的組分，回收乙醇，減壓濃縮后冷凍干燥即得ASFP。參照文獻[17]的方法，以綠原酸為標準品，建立線性回歸方程為y＝17.99x+0.004，R2＝0.999 6。紫外-可見分光光度法檢測多酚質量分數為46.3%（以綠原酸計），經液相色譜-質譜聯用儀檢測其主要成分為金絲桃苷、1,3-二咖啡酰奎寧酸、3,4-二咖啡酰奎寧酸和3,5-二咖啡酰奎寧酸。

1.3.2 動物分組及實驗設計

40 只大鼠經過1 周的適應性喂養后，隨機分成4 組（n＝10）：空白組（control group，CON），給予基礎飼料；模型組，即高脂飲食組（high fat diet group，HFD）；ASFP給藥組：HFD+150 mg/（kg·d）ASFP、HFD+75 mg/（kg·d）ASFP。空白組和高脂飲食組大鼠灌胃等量生理鹽水，ASFP給藥組分別按照150、75 mg/（kg·d）的劑量灌胃大鼠。高脂飲食組和ASFP給藥組大鼠于首次喂養的第3、5、7天按照700 000 U/kg的劑量腹腔注射VD3注射液，空白組腹腔注射等量生理鹽水。除空白組飼喂基礎飼料外，其余3 組大鼠均飼喂高脂飼料，連續喂養12 周，所有大鼠自由飲用蒸餾水。12 周后，禁食12 h后稱量所有大鼠體質量，以2 g/100 mL戊巴比妥鈉鹽溶液腹腔注射麻醉，心臟取血，血液于3 000 r/min、4 ℃下離心15 min后分離上層血清，分裝后置于-80 ℃冰箱中備用。剝離胸主動脈，于預冷的生理鹽水中反復沖洗干凈后，取0.5 cm左右長的胸主動脈置于10%的福爾馬林溶液中固定，4 ℃冰箱中保存用于后續組織病理學觀察，其余胸主動脈置于EP管中-80 ℃保存用于后續Western blot檢測。

1.3.3 大鼠血清生理生化指標測定

取1.3.2節中制備的血清，按照雙抗體夾心按照試劑盒說明書采用ELISA檢測大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、ICAM-1、VCAM-1、E-selection、TNF-α、IL-1β、MCP-1、IL-6、IFN-γ的水平，并按下式計算As指數（atherosclerosis index，AI）。

式中：cTC和cHDL-C分別為測定得到的TG和HDL-C濃度/（mmol/L）。

1.3.4 大鼠胸主動脈組織病理學觀察

取1.3.2節用10%福爾馬林溶液固定的各組大鼠胸主動脈，參照文獻[18]的方法，進行蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，光學顯微鏡觀察主動脈病變。

1.3.5 黏附分子和MAPK信號通路關鍵基因的蛋白表達

取1.3.2節中-80 ℃冰箱中凍存的各組大鼠主動脈組織，按照RIPA蛋白抽提試劑盒說明書的方法提取蛋白，Western blot法檢測主動脈中ICAM-1、VCAM-1、總p38（total p38，t-p38）、磷酸化p38（phosphorylated p38，p-p38）、總ERK1/2（total ERK1/2，t-ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（phosphorylated ERK1/2 ，p-ERK1/2）蛋白的表達。

1.4 數據統計分析

采用SPSS 21.0軟件進行統計分析，各組數據以±s表示，組間數據進行單因素方差分析（analysis of variance，ANOVA）。P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 ASFP對大鼠血清血脂水平的影響

表1 ASFP對大鼠血清血脂和AI的影響Table 1 Effect of ASFP on serum lipids and AI in rats

AI是反映脂質代謝紊亂的一個綜合性指標，是預測、衡量As危險度的可靠指標之一，AI數值越小，說明As的程度越低或在減輕，AI數值越大，說明As的程度越高。由表1可知，與高脂飲食組相比，ASFP各給藥組大鼠的TC、LDL-C、TG（除HFD+150 mg/（kg·d）ASFP大鼠外）含量顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），HFD+150 mg/（kg·d）ASFP大鼠TG含量也降低但無統計學差異（P＞0.05），ASFP各給藥組大鼠AI極顯著減小（P＜0.01），說明ASFP可以顯著降低TC、TG、LDL-C的水平，減小AI指數，預防As的發生。

2.2 ASFP對大鼠的血清黏附分子水平的影響

表2 ASFP對大鼠血清黏附分子水平的影響Table 2 Effect of ASFP on serum adhesion molecules in rats

在As斑塊形成過程中，內皮細胞表達ICAM-1、VCAM-1等黏附分子，促進炎性細胞遷移與浸潤，吸引大量單核細胞進入內皮下成為泡沫細胞從而促進As發生、發展[19]。由表2可知，與空白組相比，高脂飲食組大鼠血清ICAM-1、VCAM-1、E-selection水平均極顯著升高（P＜0.01），而灌胃150、75 mg/（kg·d）ASFP的大鼠ICAM-1、VCAM-1和E-selection（除HFD+150 mg/（kg·d）ASFP）水平極顯著降低（P＜0.01），HFD+150 mg/（kg·d）ASFP 的E-selection含量也降低但無顯著差異（P＞0.05），提示ASFP可以通過顯著降低大鼠血清黏附分子水平預防As的發生。

2.3 ASFP對大鼠的血清炎癥因子水平的影響

表3 ASFP對大鼠血清炎癥因子水平的影響Table 3 Effect of ASFP on serum inf l ammatory cytokines in rats

由表3可知，與空白組相比，高脂飲食組大鼠血清炎癥因子TNF-α、IL-1β、MCP-1、IL-6、IFN-γ水平均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）；與高脂飲食組相比，給予150 mg/（kg·d）ASFP灌胃處理的大鼠TNF-α、IL-1β、MCP-1的水平分別降低了11.02%、20.97%、11.44%，IL-6和IFN-γ水平下降但不顯著（P＞0.05）；給予75 mg/（kg·d）ASFP灌胃處理大鼠的TNF-α、IL-1β、MCP-1、IL-6、IFN-γ水平分別降低了12.92%、15.28%、13.06%、15.25%、6.85%。結果表明，ASFP可以降低As大鼠的血清炎癥因子水平。

2.4 ASFP對大鼠As形成的影響

圖1 ASFP對大鼠主動脈組織病理學變化的影響（×1 000）Fig. 1 Effect of ASFP on changes in histopathological characteristics of the aorta in rats (× 1 000)

由圖1可知，HE染色切片顯示空白組大鼠主動脈壁各層結構正常、排列整齊，內膜光滑，中膜彈力纖維正常；高脂飲食組各層結構排列紊亂，內膜和中膜細胞排列疏松，與空白組相比有較多的脂質沉積，有的內膜斷裂脫落；ASFP各給藥組脂質沉積均較高脂飲食組減少，各層結構排列紊亂現象明顯改善。觀察結果表明，ASFP可以預防大鼠As的形成。

2.5 ASFP對大鼠主動脈組織ICAM-1、VCAM-1蛋白表達的影響

圖2 ASFP對大鼠主動脈組織中的ICAM-1、VCAM-1蛋白相對表達量的影響Fig. 2 Effect of ASFP on the expression of ICAM-1 and VCAM-1 in the aorta of rats

由圖2可知，空白組大鼠主動脈組織中ICAM-1和VCAM-1呈低水平表達，與空白組相比，高脂飲食組大鼠主動脈組織中ICAM-1和VCAM-1的表達量極顯著升高（P＜0.01），而ASFP 150、75 mg/（kg·d）ASFP灌胃處理大鼠主動脈中ICAM-1和VCAM-1的表達量均極顯著減少（P＜0.01），這與2.2節中血清中黏附分子的檢測結果相一致，表明ASFP可以通過顯著降低As大鼠主動脈組織中黏附分子的表達，預防As的發生。

2.6 ASFP對大鼠主動脈中p38 MAPK信號通路關鍵基因蛋白表達的影響

圖3 ASFP對大鼠主動脈組織中p-p38蛋白表達的影響Fig. 3 Effect of ASFP on the expression of p-p38 in the aorta of rats

由圖3可知，空白組大鼠主動脈組織中p-p38蛋白呈低水平表達，且在各組（除高脂飲食組）主動脈組織中表達量無顯著差異；與空白組相比，高脂飲食組大鼠主動脈組織中p-p38蛋白的表達量極顯著升高（P＜0.01），表明高脂飲食能夠上調p38 MAPK信號通路的表達；與高脂飲食組相比，ASFP給藥組大鼠主動脈組織中p-p38蛋白的表達量均極顯著減少（P＜0.01），表明ASFP能夠抑制高脂飲食引起的p38 MAPK信號通路的上調。結果表明，ASFP可能通過抑制p38 MAPK信號通路預防大鼠As的形成。

2.7 ASFP對大鼠主動脈中ERK1/2 MAPK信號通路中關鍵基因蛋白表達的影響

由圖4可知，空白組大鼠主動脈組織中p-ERK1/2蛋白呈低水平表達，且在各組（除高脂飲食組）主動脈組織中表達量無顯著差異（P＞0.05）；與空白組相比，高脂飲食組大鼠主動脈組織中p-ERK1/2蛋白的相對表達量極顯著升高（P＜0.01），表明高脂飲食能夠引起p-ERK1/2 MAPK信號通路的表達上調；而ASFP給藥組大鼠的主動脈組織中p-ERK1/2蛋白的表達均極顯著減少（P＜0.01），表明ASFP能夠顯著抑制大鼠主動脈組織中p-ERK1/2蛋白的表達。綜上表明，ASFP可能通過抑制p38 MAPK和ERK1/2 MAPK信號通路預防大鼠As的形成。

圖4 ASFP對大鼠主動脈組織中p-ERK1/2蛋白相對表達量的影響Fig. 4 Effect of ASFP on the expression of p-ERK1/2 in the aorta of rats

3 討 論

目前，高脂血癥被認為是As的一個重要危險因素，在As斑塊的形成中發揮關鍵作用[20]。高脂血癥的特征是高膽固醇和高甘油三酯，這些脂質可以與As載脂蛋白（apolipoprotein，Apo），如低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白等結合后形成LDL-C、極低密度脂蛋白膽固醇被運送到動脈壁，從而導致脂質在動脈壁的沉積和引發As[21]。本研究中，與空白組相比，僅喂食高脂飼料的大鼠的TC、TG、LDL-C的含量和AI指數均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01），而灌胃150、75 mg/（kg·d）ASFP的大鼠的TC、TG、LDL-C水平和AI較高脂飲食組均有不同程度的降低，揭示了ASFP具有較好的降血脂的能力，這與Kim等[22]的報道相一致。ASFP可以通過降低血漿中TC、TG和LDL-C含量以及AI來預防As的發生。

越來越多的證據表明，As是一種由多種炎性細胞因子過度釋放引起的慢性炎癥性疾病[23]。據報道，血液中的LDL-C是一種重要的炎性誘導劑，能夠引起動脈血管內皮細胞的活化并誘導黏附分子（如ICAM-1和VCAM-1）表達量的增加，產生的黏附分子募集炎癥細胞如單核細胞和T細胞黏附到早期的As病變區域并加速As的形成[24]。本研究中，與空白組相比，喂食高脂飲食的大鼠血清中ICAM-1和VCAM-1的表達量均升高，但是這種升高可以被ASFP抑制或阻斷，隨后的Western blot分析結果進一步證實了這一結論，這提示ASFP可以通過抑制ICAM-1和VCAM-1蛋白表達的升高來預防As的發生。據文獻報道，MCP-1是一種在As的起始和發展階段起關鍵作用的炎癥細胞因子，它能夠吸引炎癥細胞黏附到As病變區域，進而促進As的形成[25]。在As病變區域，除了有黏附分子分泌，還有血管內皮細胞和平滑肌細胞分泌促炎細胞因子，進而促進單核細胞分化成巨噬細胞，巨噬細胞通過攝取氧化低密度脂蛋白轉化成泡沫細胞并進一步放大局部炎癥反應。TNF-α、IL-6和IL-1β是用于反映As的具有代表性的促炎細胞因子[26]。Ohta等[27]研究發現，與ApoE基因缺失小鼠相比，TNF-α基因缺失的ApoE小鼠在主動脈竇的As斑塊減小，并且ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的表達量也降低，這說明TNF-α能夠通過上調動脈壁中ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的表達促進As發生。目前，抗TNF-α療法已應用于治療或減輕心血管疾病中，它通過降低慢性炎癥反應而不改變血漿中TC、TG、LDL-C和HDL-C的水平發揮作用[28]。IL-1β是一種主要由巨噬細胞和樹突狀細胞分泌的炎性細胞因子，它主要是通過誘導主動脈中VCAM-1和MCP-1的過度表達來加快炎性細胞募集到As病變區域的速度[29]。與之相對應，缺失IL-1β的ApoE小鼠的As斑塊面積比ApoE小鼠顯著減少[30]。近年來，IL-6被認為是代謝病和心血管疾病的危險因素，Schieffer等[31]應用As小鼠模型研究IL-6在As中的作用時發現，IL-6能促進As細胞因子的形成。本研究中，與空白組相比，飼喂高脂飼料的大鼠血清中MCP-1、TNF-α、IL-1β、IL-6水平均升高，而這種升高能被灌胃不同劑量的ASFP抑制，表明ASFP可能通過降低炎癥因子MCP-1、TNF-α、IL-1β、IL-6的水平，從而預防As的發生。

MAPK信號通路存在于大多數細胞內，能夠將細胞外刺激信號轉導至細胞及其核內，從而引起細胞生物學反應。研究證實，激活p38 MAPK，能夠通過一系列的信號級聯反應促進其下游VCAM-1、ICAM-1等黏附分子基因的表達，進而加速As的形成[32]。李晶晶等[33]研究發現，多廿烷醇的抗As作用除了得益于其調脂作用外，還與其能夠抑制血清超敏C反應蛋白和p38 MAPK的磷酸化有關。本研究中，Western blot結果顯示，與飼喂正常飼料的大鼠相比，高脂飲食組大鼠p-p38、p-ERK/1/2蛋白含量增加，而灌胃ASFP的大鼠能夠抑制p-p38、p-ERK/1/2表達量的增加。結果表明，ASFP可以抑制MAPK信號通路中p38、ERK1/2蛋白的激活，ASFP可能通過抑制p38 MAPK和ERK1/2 MAPK信號通路的上調產生抗As的作用。

綜上所述，ASFP可以通過降低血脂水平和抑制炎癥因子的表達預防As的發生，其抗As的作用機制可能與其抑制MAPK信號通路進而抑制炎癥因子的表達有關，關于ASFP是否還通過其他途徑預防As的發生還有待于進一步的研究。

[1] SWIRSKI F K, NAHRENDORF M. Leukocyte behavior in atherosclerosis, myocardial infarction, and heart failure[J]. Science,2013, 339: 161-166. DOI:10.1126/science.1230719.

[2] LIBBY P. Inflammation in atherosclerosis[J]. Arteriosclerosis,Thrombosis, and Vascular Biology, 2012, 32(9): 2045-2051.DOI:10.1161/ATVBAHA.108.179705.

[3] 郭建, 趙國君, 王小玲. 藥物預防動脈粥樣硬化的研究進展[J]. 內蒙古醫科大學學報, 2016, 38(3): 264-267; 272. DOI:10.16343/j.cnki.issn.2095-512x.2016.03.018.

[4] CHEN J H, WANGC C J, WANGD C P, et al. Hibiscus sabdariffa leaf polyphenolic extract inhibits LDL oxidation and foam cell formation involving up-regulation of LXRα/ABCA1 pathway[J]. Food Chemistry,2013, 141(1): 397-406. DOI:10.1016/j.foodchem.2013.03.026.

[5] XU Zherong, LI Jinyou, DONG Xinwei, et al. Apple polyphenols decrease atherosclerosis and hepatic steatosis in ApoE mice through the ROS/MAPK/NF-κB pathway[J]. Nutrients, 2015, 7(8): 7085-7105.DOI:10.3390/nu7085324.

[6] 連冠, 魚毛毛, 徐璐, 等. 葡萄籽多酚降血脂及抗動脈粥樣硬化的作用及機制[J]. 中國動脈硬化雜志, 2015, 23(2): 121-126.

[7] 王振宇, 周麗萍, 劉瑜. 蘋果多酚對小鼠脂肪代謝的影響[J]. 食品科學, 2010, 31(9): 288-291.

[8] 衛生部批準7 種新資源食品[J]. 中國食品學報, 2008, 8(3): 67.

[9] 李鶴, 胡文忠, 姜愛麗, 等. 短梗五加各部位活性成分及其食藥用價值研究進展[J]. 食品工業科技, 2016, 37(6): 372-376. DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2016.06.066.

[10] LEE D Y, SEO K H, JEONG R H, et al. Anti-inf l ammatory lignans from the fruits of Acanthopanax sessiliflorus[J]. Molecules, 2013,18(1): 41-49. DOI:10.3390/molecules18010041.

[11] LEE S J, HONG S, YOO S H, et al. Cyanidin-3-O-sambubioside from Acanthopanax sessilif l orus fruit inhibits metastasis by downregulating MMP-9 in breast cancer cells MDA-MB-231[J]. Planta Medica, 2013,79(17): 1636-1640. DOI:10.1055/s-0033-1350954.

[12] 管美玉, 劉玉強, 才謙, 等. 無梗五加果實抗疲勞活性研究[J]. 亞太傳統醫藥, 2015, 11(19): 10-12. DOI:10.11954/ytctyy.201519005.

[13] 賀小露, 張蕊, 孫明亮, 等. 短梗五加果鎮靜催眠作用實驗研究[J]. 中藥材, 2013, 36(8): 1329-1331. DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.08.034.

[14] SONG Y, YANG C J, YU K, et al. In vivo antithrombotic and antiplatelet activities of a quantif i ed Acanthopanax sessilif l orus fruit extract[J]. Chinese Journal of Natural Medicines, 2011, 9(2): 141-145.DOI:10.3724/SP.J.1009.2011.00141.

[15] 馮穎, 孟憲軍, 王建國, 等. 無梗五加果多糖組成及生物活性的研究[J].食品科學, 2008, 29(4): 378-380.

[16] LEE J W, BEAK N I, LEE D Y. Inhibitory effects of seco-triterpenoids from Acanthopanax sessilif l orus fruits on HUVEC invasion and ACE activity[J]. Natural Product Communications, 2015, 10(9): 1517-1520.

[17] 李春芳, 劉汶, 曲佳琳, 等. 短梗五加果提取物中總黃酮、總酚及3 種指標成分的含量測定[J]. 沈陽藥科大學學報, 2011, 28(10):801-806. DOI:10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2011.10.004.

[18] LI J, CHEN C X, SHEN Y H. Effects of total glucosides from paeony(Paeonia lactiflora Pall) roots on experimental atherosclerosis in rats[J]. Journal of Ethnopharmacology, 2011, 135(2): 469-475.DOI:10.1016/j.jep.2011.03.045.

[19] FENYO I M, GAFENCU A V. The involvement of the monocytes/macrophages in chronic inflammation associated with atherosclerosis[J]. Immunobiology, 2013, 218(11): 1376-1384.DOI:10.1016/j.imbio.2013.06.005.

[20] DRECHSLER M, MEGENS R T A, ZANDVOORT M V,et al. Hyperlipidemia-triggered neutrophilia promotes early atherosclerosis[J]. Circulation, 2010, 122(18): 1837-1845.DOI:10.1161/CIRCULATIONAHA.110.961714.

[21] TABAS I, WILLIAMS K J, BOREN J. Subendothelial lipoprotein retention as the initiating process in atherosclerosis[J]. Circulation, 2007,116(16): 1832-1844. DOI:10.1161/CIRCULATIONAHA.106.676890.

[22] KIM S, KIM C K, LEE K S, et al. Aqueous extract of unripe Rubus coreanus fruit attenuates atherosclerosis by improving blood lipid prof i le and inhibiting NF-κB activation via phaseⅡ gene expression[J].Journal of Ethnopharmacology, 2013, 146 (2): 515-524. DOI:10.1016/j.jep.2013.01.016.

[23] MONTERO-VEGA M T. the Inflammatory process underlying atherosclerosis[J]. Critical Reviews in Immunology, 2012, 32(5): 373-462. DOI:10.1615/CritRevImmunol.v32.i5.10.

[24] WEBER C, NOELS H. Atherosclerosis: current pathogenesis and therapeutic options[J]. Nature Medicine, 2011, 17(11): 1410-1422.DOI:10.1038/nm.2538.

[25] GU L, OKADA Y, CLINTON S K, et al. Absence of monocyte chemoattractant protein-1 reduces atherosclerosis in low density lipoprotein receptor-def i cient mice[J]. Molecular cell, 1998, 2(2): 275-281. DOI:10.1016/S1097-2765(00)80139-2.

[26] AIT-OUFELLA H, TALEB S, MALLAT Z, et al. Recent advances on the role of cytokines in atherosclerosis[J]. Arteriosclerosis,Thrombosis, and Vascular Biology, 2011, 31(5): 969-979.DOI:10.1161/ATVBAHA.110.207415.

[27] OHTA H, WADA H, NIWA T, et al. Disruption of tumor necrosis factor-α gene diminishes the development of atherosclerosis in ApoE-def i cient mice[J]. Atherosclerosis, 2005, 180(1): 11-17. DOI:10.1016/j.atherosclerosis.2004.11.016.

[28] SOUBRIER M, JOUNAEL P, MATHIEU S, et al. Effects of antitumor necrosis factor therapy on lipid profile in patients with rheumatoid arthritis[J]. Joint Bone Spine, 2008, 75(1): 22-24. DOI:10.1016/j.jbspin.2007.04.014.

[29] BHASKAR V, YIN J, MIRZA A M, et al. Monoclonal antibodies targeting IL-1 beta reduce biomarkers of atherosclerosis in vitro and inhibit atherosclerotic plaque formation in apolipoprotein E-def i cient mice[J]. Atherosclerosis, 2011, 216(2): 313-320. DOI:10.1016/j.atherosclerosis.2011.02.026.

[30] KIRII H, NIWA T, YAMADA Y, et al. Lack of interleukin-1β decreases the severity of atherosclerosis in ApoE-deficient mice[J].Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology, 2003, 23: 656-660. DOI:10.1161/01.ATV.0000064374.15232.C3.

[31] SCHIEFFER B, SELLE T, HILFIKER A, et al. Impact of interleukin-6 on plaque development and morphology in experimental atherosclerosis[J]. Circulation, 2004, 110(22): 3493-3500.DOI:10.1161/01.CIR.0000148135.08582.97.

[32] JERSMANN H P A, HII C S T, FERRANTE J V, et al. Bacterial lipopolysaccharide and tumor necrosis factor alpha synergistically increase expression of human endothelial adhesion molecules through activation of NF-κB and p38 mitogen-activated protein kinase signaling pathways[J]. Infection and Immunity, 2001, 69(3): 1273-1279. DOI:10.1128/IAI.69.3.1273-1279.2001.

[33] 李晶晶, 田乃亮, 朱中生, 等. 多廿烷醇抗動脈粥樣硬化的分子機制研究[J]. 南京醫科大學學報(自然科學版), 2012, 32(5): 650-654.

Preventive Effect of Polyphenols Isolated from Acanthopanax sessilif l orus Fruits on Atherosclerosis in Rats

HE Zhongmei1, LI Cheng’en1, DUAN Cuicui2, ZHAO Yujuan2, GAO Lei2, LUAN Chang2, ZHANG Lianxue1, LI Shengyu2,*
(1. College of Traditional Chinese Medicine Materials, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;2. Institute of Agro-Food Technology, Jilin Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130033, China)

Objective: A rat model was used to investigate the preventive effect of Acanthopanax sessiliflorus fruit polyphenols (ASFP) on atherosclerosis (As) and the underlying mechanism was explored. Methods: The atherosclerosis model was built by feeding rats with high-fat diet (HFD) combined with intraperitoneal injection with vitamin D3. Forty male rats were randomly divided into four groups (n = 10): control, HFD, HFD + low-dose ASFP and HFD + high-dose ASFD groups. The rats from the ASFD-treat groups were daily administered with 150 or 75 mg/(kg·d) ASFP during the HFD feeding period of 12 days, while those from the control and HFD groups were given an equal volume of normal saline.Serum biochemical parameters were detected and atherosclerosis index (AI) was calculated at the end of administration.Hematoxylin-eosin (HE) staining was used to observe the atherosclerosis lesion in the aorta of rats. The expression levels of adhesion molecules in the aorta and key genes involved mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway were measured by Western blot. Results: The levels of blood lipids, adhesion molecules and inflammatory cytokines in rats were signif i cantly decreased by ASFP compared with the model group. In addition, after treatment with ASFP, aortic lipid deposition was reduced and the structure of disordered layers was signif i cantly improved compared with the model group. Furthermore, the expression of intercellular cell adhesion molecule-1 (ICAM-1), vascular cell adhesion molecule-1(VCAM-1), phospho-p38 (p-p38) and phospho-ERK1/2 (p-ERK1/2) in the rat aorta were significantly down-regulated by treatment with ASFP compared with the model group. Conclusion: ASFP plays an important role in preventing atherosclerosis, which may be related to the reduction of blood lipids and the inhibition of p38 MAPK and ERK1/2 MAPK signaling pathways, thereby inhibiting the expression of inf l ammatory cytokines.

Acanthopanax sessilif l orus; polyphenols; atherosclerosis; blood lipid-lowering; anti-inf l ammatory

10.7506/spkx1002-6630-201801030

TS201.4

A

1002-6630（2018）01-0200-07

2016-10-17

長春市產學研協同創新示范點建設項目（16CX20）；國家現代農業（奶牛）產業技術體系建設專項（CARS-36）；“十三五”國家重點研發計劃重點專項（2016YFC0500300）；吉林省中醫藥產業發展專項（20140311029YY）

何忠梅（1978—），女，副教授，博士，主要從事天然藥物有效成分作用機理及產品開發研究。E-mail：1285737655@qq.com

*通信作者簡介：李盛鈺（1977—），男，副研究員，博士，主要從事發酵食品及乳品加工研究。E-mail：lisy720@126.com

何忠梅, 李成恩, 段翠翠, 等. 短梗五加果多酚預防大鼠動脈粥樣硬化作用[J]. 食品科學, 2018, 39(1): 200-206.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201801030. http://www.spkx.net.cn

HE Zhongmei, LI Cheng’en, DUAN Cuicui, et al. Preventive effect of polyphenols isolated from Acanthopanax sessilif l orus fruits on atherosclerosis in rats[J]. Food Science, 2018, 39(1): 200-206. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201801030. http://www.spkx.net.cn