抗宮炎片指紋圖譜在工藝控制中的應(yīng)用

★ 廖春玲 吳燕紅 許妍（.江西省醫(yī)藥學(xué)校/江西省醫(yī)藥技師學(xué)院 南昌 33000；.江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院 南昌 33009）

抗宮炎片收載于《中國(guó)藥典》2015年版一部，是一個(gè)具備廣泛作用且療效顯著的藥物，具有清熱、祛濕、化瘀、止帶之功效。用于濕熱下注所致的帶下病，癥見赤白帶下、量多臭味、宮頸糜爛。處方由廣東紫珠、烏藥及益母草三味藥干浸膏組成，將三種干浸膏粉碎成細(xì)粉，加輔料適量，混勻、制粒、干燥、壓制成片，包糖衣或薄膜衣制得。三種干浸膏分別由廣東紫珠、烏藥、益母草藥材加水煎煮，濾過，濃縮至稠膏狀，干燥制得［1］。中藥藥效是多成分、多靶點(diǎn)整體作用的結(jié)果，中藥指紋圖譜克服了僅僅依賴一種或幾種指標(biāo)成分的物理化學(xué)性質(zhì)鑒別中藥質(zhì)量的局限性，從整體層面全面、準(zhǔn)確地體現(xiàn)中藥質(zhì)量［2］。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用抗宮炎片指紋圖譜，相對(duì)完整地反映出全方的化學(xué)成分，根據(jù)指紋圖譜提供的信息，以抗宮炎片浸膏中各特征峰與對(duì)應(yīng)藥材折算后的相對(duì)峰面積為指標(biāo)，比較有效成分群在制劑工藝步驟中的變化，并對(duì)企業(yè)實(shí)際生產(chǎn)中使用的三種干燥方式進(jìn)行工藝優(yōu)選。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent1100高效液相色譜儀，四元低壓梯度泵，DAD檢測(cè)器，Chemstation化學(xué)工作站；Sartorius BSA124S-CW電子天平；真空干燥機(jī)GKT_1000型（浙江省瑞安凱迪藥化機(jī)械有限公司）;熱風(fēng)循環(huán)烘箱RH_27_C型（江蘇省江陰萬福機(jī)械有限公司）;微波真空干燥機(jī)BDMD_M_V_30型（河南勃達(dá)微波設(shè)備有限責(zé)任公司）。

1.2 試藥對(duì)照品連翹酯苷B、金石蠶苷、毛蕊花糖苷（批號(hào)111530-201309）、去甲異波爾定、鹽酸益母草堿，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；對(duì)照品異毛蕊花糖苷、波爾定堿、牛新果堿由我院科研室提供。乙腈為色譜純，水為Milli-Q制備的純化水，磷酸為分析純。

2 抗宮炎片指紋圖譜特征峰的歸屬

2.1 供試品溶液的制備取抗宮炎片10片，除去包衣，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，即得。

2.2 干浸膏溶液的制備根據(jù)供試品取樣量，按藥典抗宮炎片項(xiàng)下規(guī)定的處方比例及各藥材得膏率（廣東紫珠33%、烏藥18%、益母草14%），分別取廣東紫珠干膏約0.67g、烏藥干膏約0.16g和益母草干膏約0.18g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，同2.1供試品溶液的制備，即得。

2.3 藥材溶液的制備分別取與三種干浸膏相對(duì)應(yīng)的廣東紫珠藥材約22.11g、烏藥藥材約2.88g和益母草藥材約2.52g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，同2.1供試品溶液的制備，即得。

2.4 對(duì)照品溶液的制備精密稱取連翹酯苷B、金石蠶苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷、去甲異波爾定、波爾定堿、牛新果堿、鹽酸益母草堿對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1mL含連翹酯苷B 0.15mg、金石蠶苷0.15mg、毛蕊花糖苷0.15mg、異毛蕊花糖苷0.15mg、去甲異波爾定25 μg、波爾定堿0.15mg、牛新果堿0.25mg及鹽酸益母草堿30μg的溶液，即得。2.5 通過對(duì)照品和對(duì)照藥材比對(duì)，13個(gè)特征峰中7個(gè)使用對(duì)照品歸屬，5個(gè)采用對(duì)照藥材歸屬。見圖1-2。

圖1 抗宮炎片指紋圖譜與各對(duì)照品色譜圖的比較

圖2 抗宮炎片指紋圖譜與對(duì)照藥材的色譜比較圖

3 有效成分群在工藝步驟中的變化

3.1 樣品測(cè)定由兩家企業(yè)提供的三味藥材、生產(chǎn)對(duì)應(yīng)的干浸膏（廣東紫珠、烏藥、益母草藥材和干浸膏）及抗宮炎片各一批，按“2.2”方法制備，“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算3個(gè)不同工藝步驟特征峰的相對(duì)峰面積，比較抗宮炎片從原料到制粒到壓片過程有效成分群的變化。相對(duì)峰面積（%）=抗宮炎片（或三種干浸膏）特征峰折算后的峰面積/對(duì)應(yīng)藥材折算后的峰面積；折算后峰面積=抗宮炎片（三種干浸膏或藥材）中各特征峰的峰面積/實(shí)際取樣量×理論取樣量；理論取樣量根據(jù)供試品取樣量，按照處方比例及各藥材得膏率計(jì)算各藥材和干浸膏的取樣量。如表1所示。

3.2 數(shù)據(jù)分析通過各工藝步驟特征峰的相對(duì)峰面積的計(jì)算，得出抗宮炎片的各特征峰的峰面積在每一步工藝過程都有較大損失，從藥材至干浸膏，各特征峰峰面積損失一半以上，從干浸膏到制粒過程，除2號(hào)峰和8號(hào)峰外，其余特征峰相對(duì)峰面積均損失過半，制粒后壓片的過程損失相對(duì)小。整個(gè)工藝1號(hào)峰去甲異波爾定剩余不到5%，3號(hào)峰鹽酸益母草堿剩余不到2%，2號(hào)峰和8號(hào)峰異毛蕊花糖苷僅剩30%左右，其余各特征峰剩余約10%，含量低的12號(hào)峰波爾定堿和13號(hào)峰牛心果堿在壓片后完全損失。

表1 各工藝步驟色譜峰相對(duì)峰面積比較

表2 不同干燥方法所得干浸膏色譜峰相對(duì)峰面積比較

4 三味干浸膏干燥方式的優(yōu)選

因處方中三味干浸膏均為水提工藝，濃縮后干燥時(shí)間直接影響生產(chǎn)效率，考查生產(chǎn)工藝過程中干燥方法對(duì)干浸膏中各成份的影響并進(jìn)行優(yōu)選。

4.1 干浸膏溶液的制備取廣東紫珠、烏藥、益母草藥材按工藝規(guī)程方法分別進(jìn)行提取、濃縮，然后三味藥的稠膏各分成三份，分別用方法1： 真空減壓干燥設(shè)備干燥；方法2：微波真空干燥設(shè)備干燥；方法3：先用熱風(fēng)循環(huán)干燥再用真空減壓干燥三種干燥方法共制得干浸膏9份。

4.2 樣品測(cè)定取組方等比例生藥量樣品，按“2.2”方法制備，“2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以相應(yīng)的藥材色譜圖為基準(zhǔn)，計(jì)算三種干燥方法所得9份干浸膏中各特征峰的相對(duì)峰面積，如表2所示。

4.3 數(shù)據(jù)分析通過不同干燥方法所得干浸膏中各特征峰的相對(duì)峰面積的比較，得出廣東紫珠干浸膏采用方法2各特征峰的相對(duì)峰面積大于方法1和方法3；烏藥干浸膏方法1和方法3各特征峰的相對(duì)峰面積差異不大，且均大于方法2；益母草稠膏方法1各特征峰的相對(duì)峰面積最大，尤其是鹽酸益母草堿相對(duì)峰面積明顯大于其它兩種干燥方法。

5 討論

5.1 抗宮炎片各組份分析抗宮炎片是由廣東紫珠、烏藥、益母草三味藥材分別加水煎煮制膏后成型而得。方中廣東紫珠具有止血、鎮(zhèn)痛、抑菌、抗炎的作用［2］，其主要藥效成分為苯乙醇苷類化合物。烏藥主要含有揮發(fā)油、異喹啉生物堿及呋喃倍半萜及內(nèi)酯等化學(xué)成分，其中生物堿類成分是烏藥的主要活性成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其具有廣泛的抗炎和抗關(guān)節(jié)損壞等藥理活性［3］。益母草具活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫，清熱解毒的功效。研究表明［4］：益母草興奮子宮的有效成分為水蘇堿和益母草堿。

5.2 抗宮炎片指紋圖譜在制劑工藝生產(chǎn)過程中的應(yīng)用

5.2.1 指紋圖譜中有效成分群在制劑工藝中的變化利用建立的指紋圖譜對(duì)歸屬的13種有效成分群在制劑工藝步驟中的變化進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：各有效成分群從藥材到干浸膏再到制粒、壓片每一步都損失嚴(yán)重，尤其對(duì)于烏藥中含量低的生物堿類（如波爾定堿、牛心果堿）到成品中完全缺失，益母草中含量較高的生物堿類（如鹽酸益母草堿）到干浸膏完全缺失。

5.2.2 減少指紋圖譜中有效成分群在制劑生產(chǎn)過程中缺失的方法通過指紋圖譜對(duì)三味干浸膏中三種干燥方法的優(yōu)選結(jié)果發(fā)現(xiàn)：廣東紫珠稠膏采用微波減壓干燥最優(yōu)，廣東紫珠干浸膏為方中君藥，占處方比例的66.8%，使用微波減壓干燥不但能較好的保留有效成分群，并且大大節(jié)約生產(chǎn)時(shí)間，提高生產(chǎn)效率，降低生產(chǎn)成本。烏藥和益母草稠膏用真空減壓干燥更能保留有效成分群。

6 結(jié)語

藥品的質(zhì)量是生產(chǎn)出來的而不是檢驗(yàn)出來的，在大量實(shí)踐的基礎(chǔ)上通過確定的生產(chǎn)工藝流程和測(cè)試方法得到的指紋圖譜，不僅僅限于評(píng)價(jià)最終產(chǎn)品質(zhì)量和判別真?zhèn)芜@一目的，而且可用于控制生產(chǎn)過程，根據(jù)各生產(chǎn)環(huán)節(jié)指紋圖譜的變化，考察操作條件對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量影響的程度和因素，從而確定工藝參數(shù)的合理范圍及重要工段［5-6］。