高效液相色譜法同時測定雞尾酒中7種合成色素

□ 周欣蕊 金昱言 趙 洋 王 婷 吉林省食品檢驗所；吉林省安信食品技術服務有限責任公司

人工合成色素用于食品著色，可以使食品色彩鮮艷、著色能力強，要比天然色素穩定，但人工合成色素的安全問題備受關注[1]。目前，檢測合成色素的方法有氣相色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜-質譜聯用法、離子色譜法、薄層色譜法、毛細管電泳法、離子選擇電極法、光度法、極譜法、伏安法等。多組分混合色素的分析，薄層色譜操作比較繁瑣[2]；色譜-質譜聯用法靈敏度和分辨率都很高，但是儀器昂貴；極譜法易受到干擾，很難定性；光度法需要化學計量學的方法，數據處理較繁瑣；毛細管電泳法的重現性很差[3]。所以本次實驗采用高效液相色譜法進行混合色素的測定。

如今市場上新興一類雞尾酒，就是利用五彩斑斕的顏色吸引了廣大消費者的眼球，這種顏色的產生正是因為添加了人工合成色素[4]。為了保障食品的安全，我國現行有效標準GB 2760-2014《食品安全果酒標準 食品添加劑使用標準》，規范著食品添加劑的使用。其中在雞尾酒中對于檸檬黃、日落黃、胭脂紅、誘惑紅、亮藍、赤蘚紅、莧菜紅的使用提出了限值[5]。本次實驗利用高效液相色譜技術根據GB 5009.35-2016《食品安全果酒標準 食品中合成著色劑的測定》測定雞尾酒中的檸檬黃、日落黃、胭脂紅、亮藍、赤蘚紅，根據行業標準SN/T 1743-2006《食品中的誘惑紅、酸性紅、亮藍、日落黃的含量檢測高效液相色譜法》測定雞尾酒中的誘惑紅。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑

甲 醇，MS 1922-001； 乙 酸 銨，分析純，國藥集化學試劑有限公司生產，10001218； 檸 檬 黃，0.5 mg/mL，GBW(E)100001a；莧菜紅，0.5 mg/mL，GBW(E)100002a；胭脂紅，0.5 mg/mL，GBW(E)100004a；赤蘚紅，100 μg/mL，GBW(E)100191； 亮 藍，0.5 mg/mL，GBW(E)100005a；日落黃，0.5 mg/mL，GBW(E)100003a，中國計量科學研究院出產；誘惑紅，1.0 mg/mL，GBW(E)100164為北京海岸鴻蒙標準物質技術有限責任公司出產；超純水。

1.2 實驗儀器

高效液相色譜儀，SHIMADZU，LC-20AT；電子天平，AB204-N；超純水制備系統，Milli-Q，德國默克密理博公司；色譜柱ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm×5 μm）。

1.3 標準溶液配制

將檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、亮藍、誘惑紅、赤蘚紅標準物質溶液按照一定的比例，用超純水稀釋混合得到質量濃度分別為1.0、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/mL的混合標準工作溶液，置于4 ℃冰箱保存。

1.4 樣品制備

選用的樣品均為市售的雞尾酒：1#朗姆預調酒-荔枝味；2#威士忌預調酒-藍玫瑰味；3#伏特加預調酒-藍莓味；4#威士忌預調酒-芒果味；5#白蘭地預調酒-水蜜桃味；6#白蘭地預調酒-草莓味。

制備方法：稱取15.00 g樣品置于50.0 mL比色管中，直接定容至50 mL渦旋混勻，過0.45 μm水膜，備用，上機。和很多前處理方法相比較，省去了很多繁瑣的過程，但是仍保留了實驗的精準性。

2 實驗結果與討論

2.1 液相色譜條件選擇

2.1.1 檢測波長

利用二極管陣列檢測器采集檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、赤蘚紅7種合成色素在190～800 nm的光譜圖，將其最大吸收波長作為檢測波長：檸檬黃424 nm、胭脂紅508 nm、莧菜紅530 nm、日落黃484 nm、誘惑紅510 nm、亮藍610 nm、赤蘚紅530 nm。

2.1.2 梯度洗脫條件

實驗過程中柱溫為35 ℃，進樣量為10 μL，0.02 mol/L乙酸銨溶液加入5%甲醇+甲醇作為流動相，根據實驗對7種色素的分離情況，最終確定了梯度洗脫的方式。梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件

在最佳色譜條件下，對0.01 mg/mL的標準樣品進行分析，其色譜圖見圖1。

2.2 實驗線性關系及檢出限

在實驗條件下，對7種色素的標準系列混合溶液進行檢測，繪制標準曲線，線性范圍：1～50 μg/mL，得到對應的線性回歸方程，按3倍的信噪比計算出7種色素的檢出限，各色素的保留時間、線性回歸方程、線性相關系數R2以及檢出限見表2。

2.3 實驗回收率及精密度測定

選用樣品1#進行加標回收測定，稱取3份，添加7種色素，添加濃度分別是1、3、5 mg/kg，按照樣品制備方法處理后，進樣測定，結果見表3。從表3中可以看出，樣品加標后的回收率為96.7%～103.3%，相對標準偏差RSD值為0.61%～1.65%。加標濃度為5 mg/kg的1#荔枝味雞尾酒樣品色譜圖如圖2所示。

表3 7種合成色素的加標回收率和精密度

2.4 實際樣品的測定

對市售的不同品牌、不同味道的6份雞尾酒樣品進行了測定，根據各色素峰保留時間以及光譜圖進行定性，外標法峰面積定量分析。其中有5份雞尾酒有不同的色素檢出，日落黃和赤蘚紅沒有檢出。根據國家標準[6]配制酒中合成色素限量值：檸檬黃≤0.1 g/kg、莧菜紅≤0.05 g/kg、胭脂紅≤0.05 g/kg、日落黃≤0.1 g/kg、誘惑紅≤0.05 g/kg、亮藍≤0.025 g/kg、赤蘚紅≤0.05 g/kg。該6種不同品牌的雞尾酒均符合國家規定，屬于合格產品。具體檢出值見表4。

3 結論

本文建立了雞尾酒中檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、赤蘚紅7種合成色素的高效液相色譜測定方法。該方法樣品前處理簡單，在28 min內可以同時分析出7種色素，且檢出限為0.05～0.1 μg/mL，在1.0～50 μg/mL 范圍內線性良好，相關系數R2均大于0.999 88，回收率為96.7%～103.3%，RSD為0.61%～1.65%。從上述結果可知，該方法簡便、快速、經濟高效、有良好的重現性，由此可用于測定雞尾酒中合成的色素。

圖1 7種色素標準品色譜圖

表2 7種色素保留時間、線性方程、相關系數和檢出限

圖2 加標后1#荔枝味雞尾酒樣品色譜圖

表4 雞尾酒樣品中色素含量（g/kg）

[1]中華人民共和國衛生部，中國國家標準化管理委員會. GB/T 5009.29-2016食品中梨酸、苯甲酸的測定[S].北京：中國標準出版社,2016.

[2]沈堅,傅曉,潘旭,等.高效液相色譜法測定動物性食品中合成色素[J].理化檢驗-化學分冊,2011(2)：139-143.

[3]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局,中國國家標準化管理委員會.GB/T 5009.28-2016 食品中糖精鈉的測定[S].北京：中國標準出版社,2016.

[5]趙麗.偏最小二乘法-分光光度法同時檢測6種合成色素的研究[J].福建分析測試,2015(5)：13-17.

[6]張玉萍.食品中合成色素的應用及其檢測技術研究進展[J].農產品質量與安全,2013(5)：44-47.