高效液相色譜法檢測治傷膠囊設備表面關附甲素的清潔殘留

徐凱+戚蘭君+張群

【摘要】目的：建立測定治傷膠囊生產設備表面關附甲素的清潔殘留的方法。方法：色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C8柱（4.6mm*250mm，3.5μm），流動相：0.2%庚烷磺酸鈉緩沖液（加入0.2%三乙胺，磷酸調節至pH3）-乙腈（梯度洗脫），流速：0.5ml/min；檢測波長：205nm；柱溫25℃。結果：鹽酸關附甲素質量濃度在0.02mg/ml-0.16mg/ml的范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r=0.9999），其平均加樣回收率（n=9）為101.4%。結論：本方法分離度和重復性良好，簡單易行，可用于治傷膠囊設備表面關附甲素清潔殘留的檢測。

【關鍵詞】高效液相色譜法；關白附；鹽酸關附甲素；擦拭法；清潔殘留

【中圖分類號】R746.5 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）12--01

清潔驗證是為了確定在中藥生產過程中，設備、容器清洗后相關操作規程的可行性和有效性，清潔驗證檢測方法是衡量其清潔操作后是否符合規定的重要手段，公司主要產品治傷膠囊為復方制劑，處方有關白附、白芷、制南星和防風組成，其中關白附為生品毒性藥材，從中藥使用安全性考慮，選擇關白附作為目標殘留物，基于關附甲素最大日允許攜帶量為1.727mg/Kg，與關白附共用設備的與藥品接觸的總的表面積，，結合批量，以單位面積設備表面關附甲素殘留限度為0.139 mg/100cm2。

1 材料與儀器

高效液相色譜儀、電子天平、酸度計、庚烷磺酸鈉、鹽酸關附甲素對照品、治傷膠囊等。

2 檢驗方法與結果

2.1 色譜條件：

色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C8柱（4.6mm*250mm，3.5μm） 流動相B：乙腈。

流動相A：0.2%庚烷磺酸鈉緩沖液（加入0.2%三乙胺，磷酸調節至pH3）

流速：0.5ml/min；檢測波長：205nm；柱溫25℃；進樣量10μl。

2.2 對照品溶液的制備：

精密稱取鹽酸關附甲素對照品，用流動相A溶解并稀釋，制成80?g/ml的溶液。

2.3 供試品溶液的制備：

取治傷膠囊內容物約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入1%鹽酸溶液50ml，稱重，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30分鐘（水溫50℃以下），放冷，加入1%鹽酸溶液補足失重，搖勻，移取上清液，過0.45μm微孔濾膜。

2.4 供試品擦拭樣制備：

取治傷膠囊粉末約0.1g均勻涂布在面積約為100 cm2的不銹鋼板上，待涂勻后，用干凈的棉球（用純化水浸潤）將不銹鋼板擦拭干凈，然后將棉球浸在10ml1%鹽酸溶液中，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30分鐘（水溫50℃以下），放冷，搖勻，取上清液，過0.45μm微孔濾膜，即得。

2.5 系統適用性

按2.1項下的色譜條件，取2.3項下供試品溶液，測得理論板數按鹽酸關附甲素峰計不低于10000，與其相鄰色譜峰分離度大于1.5。

2.6 方法學考察

2.6.1 線性關系考察。

精密量取鹽酸關附甲素對照品儲備液（0.8mg/ml）0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、2.0ml分別至10ml容量瓶中用流動相A稀釋至刻度，制成系列標準溶液，進樣，記錄圖譜。以峰面積（A）為縱坐標，質量濃度（C）為橫坐標進行回歸計算，得回歸方程A=11367C+28.96（r=0.9999）。其質量濃度范圍為：0.0199mg/ml-1.591mg/ml。

2.6.2 重復性試驗。精密稱取同一批治傷膠囊內容物，按2.3處理，制成6份供試品溶液，進樣，記錄色譜圖。測得結果6份樣品的鹽酸關附甲素含量的RSD（n=6）為3%。表明該方法的重復性良好。

2.6.3 回收率試驗。取3個10ml量瓶，加入濃度約為0.4mg/ml鹽酸關附甲素溶液0.5ml及治傷膠囊內容物85mg；取3個10ml量瓶，加入濃度約為0.4mg/ml鹽酸關附甲素溶液1.0ml及治傷膠囊內容物171mg；取3個10ml量瓶，加入濃度約為0.4mg/ml鹽酸關附甲素溶液1.5ml及治傷膠囊內容260mg。9個樣均按2.3處理，進樣，記錄色譜圖。結果50%的回收率為101.2%，100%的回收率為102.3%，150%的回收率為100.8%平均加樣回收率為101.4%，RSD（n=9）為0.9%。

2.6.4 擦拭回收率。50%濃度（約0.04mg/ml）：取治傷膠囊內容物約195mg，按2.4方法制備三份；100%濃度（約0.08mg/ml）：取治傷膠囊內容物約390mg，同法制備；150%濃度（約0.12mg/ml）：取治傷膠囊內容物約585mg，同法制備。結果測得：50%的質量濃度，擦拭回收率為86.9%；100%的擦拭回收率為86.8%；150%的擦拭回收率為86.9%。RSD（n=9）為3%。該擦拭方法可將殘留在設備表面的大部分藥粉擦拭下來。

2.6.5 生產車間設備清潔后，擦拭取樣，按2.4制備供試品溶液。結果未檢出鹽酸關附甲素的殘留。

3 討論

該方法為中藥治傷膠囊中毒性藥材的殘留提供了可靠的方法，此方法的建立，解決了公司中藥產品清潔殘留的問題。關白附、治傷膠囊含量測定一直采用傳統的滴定方法，而且以生物堿關附甲素計算含量，缺少毒性藥材中毒性物質的定量檢測，據文獻[1]記載，關白附中毒性成分主要有關附甲素、關附壬素和關附辛素，其中關附辛素的毒性最高，能抑制骨骼肌系統和呼吸系統，而且含量較高，如何采用有效的方法來定量控制關白附中所含的毒性物質，需要我們采用靈敏度更高、方法簡單易行的高效液相來解決，這也勢必是日后中藥材鑒別和有效成分含量測定的趨勢。

本文所建立的方法分離度和重復性良好，簡單易行，可用于治傷膠囊設備表面關附甲素清潔殘留的檢測，同時該方法也可用于測定治傷膠囊或關白附的含量。

參考文獻

RP-HPLC法同時測定中藥關白附中關附甲素、關附壬素和關附辛素含量；藥學進展；2011，35（5）：230-233。endprint