魚腥草總黃酮提取工藝研究進(jìn)展

田 洋

（本溪化學(xué)工業(yè)學(xué)校，遼寧 本溪 117004）

魚腥草（Houttuynia Cordata）是三白草科多年生草本植物，其味辛、性微寒，具有清熱解毒、利尿消腫等功效，是傳統(tǒng)的藥食兼用天然植物。現(xiàn)代研究表明，黃酮類化合物是魚腥草的主要活性成分之一，具有降血壓、降血脂、利尿通便、抗菌消炎、抗氧化等功效。國(guó)內(nèi)對(duì)魚腥草總黃酮提取工藝進(jìn)行了大量研究。綜述近幾年魚腥草總黃酮的提取工藝研究進(jìn)展，旨在為魚腥草黃酮提取提供技術(shù)參考。

1 魚腥草總黃酮提取方法

1.1 溶劑提取法

采用溶劑提取魚腥草總黃酮是較為傳統(tǒng)的方法，常用的溶劑是乙醇，常用的方法有常溫提取、加熱提取和索氏回流提取等。

閻紅等以魚腥草為原料進(jìn)行總黃酮提取，篩選優(yōu)化最佳工藝條件，并對(duì)其進(jìn)行抑菌作用研究，確定最佳條件為：提取溫度80℃，料液比1∶10，乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，提取時(shí)間90 min，提取率1.868%。

伍曉春利用響應(yīng)面分析法對(duì)魚腥草中黃酮的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上選取試驗(yàn)因素與水平，根據(jù)中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理分析各個(gè)因素的顯著性和交互作用。確定魚腥草黃酮提取的最佳工藝條件為：乙醇濃度70%，提取時(shí)間52 min，料液比1∶26，魚腥草黃酮含量 15.58 μg/mg。

張素林等在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以總黃酮含量提取率為指標(biāo)，篩選最佳提取條件，再以驗(yàn)證試驗(yàn)確定最佳條件。結(jié)果表明，魚腥草總黃酮的最佳提取條件為：料液比1∶35，以50%乙醇溶液為提取劑、80℃的水浴中萃取 2.0 h，總黃酮得率為 0.369 mg/g。

黃小蕾采用改良流體萃取法提取魚腥草中黃酮類化合物，優(yōu)選最佳提取工藝，并進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果顯示，在乙醇濃度50%，溶液流量1.8 mL/min的條件下，溫度70℃，萃取時(shí)間27 min的條件下，萃取率為3.15%，總黃酮含量為 24.0%，其中蘆丁、金絲桃苷、槲皮苷、 槲皮素的萃取率分別為 0.35，1.52，1.70，0.50 mg/g。

蔣海明等以乙醇為溶劑，采用索氏回流法提取魚腥草全草中的黃酮，優(yōu)化提取溫度、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、固液比等提取條件。確定最佳提取條件為：提取溫度100℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)80%、提取時(shí)間4 h、固液比 1∶30（m/V，g∶mL），在此條件下的黃酮提取率為12.59%。

樓穎等以乙醇為溶劑，采用索氏回流法提取魚腥草葉中的黃酮類化合物，并采用分光光度法測(cè)定黃酮含量。以80%的乙醇水溶液為溶劑，固液比為1∶40，提取溫度80℃，回流提取時(shí)間3 h，在此工藝條件下進(jìn)行試驗(yàn)，黃酮提取率可達(dá)90%以上。

1.2 超聲波輔助法

超聲波輔助提取是在水浸提的同時(shí)加超聲波輔助，此法不僅能縮短提取時(shí)間，提高提取率，同時(shí)避免高溫對(duì)有效成分的影響。

楊文婷等以黃酮含量為檢測(cè)指標(biāo)，考察乙醇濃度、液固比和提取時(shí)間對(duì)超聲提取魚腥草黃酮得率的影響，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過Box-Behnken響應(yīng)面分析法進(jìn)行三因素三水平的試驗(yàn)設(shè)計(jì)。結(jié)果表明：提取魚腥草黃酮的最佳工藝為乙醇濃度74.67%，超聲時(shí)間 69.88 min，液固比 20.20∶1（mL/g），預(yù)測(cè)魚腥草黃酮得率為2.654%，實(shí)際得率為2.663%，說明該模型合理有效。

李湘等通過單因素和正交試驗(yàn)對(duì)魚腥草根總黃酮的超聲波輔助提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明：在超聲功率 200 W 下，按固液比 1∶60（g/m L）加入 60%乙醇，于55℃下提取35 min，總黃酮提取率達(dá)2.00%。

高天曙等探討魚腥草總黃酮提取的最佳方法時(shí)，采用水提法、乙醇浸提法、超聲波法提取魚腥草的總黃酮，對(duì)3種提取液進(jìn)行定性鑒定，利用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定黃酮含量。同時(shí)對(duì)影響超聲波法提取魚腥草中總黃酮的多個(gè)因子進(jìn)行正交試驗(yàn)，以確定最佳提取工藝。結(jié)果表明：采用超聲波法提取魚腥草總黃酮較佳，其最佳提取條件為料液比 1∶10、乙醇濃度50%、提取時(shí)間40 min、功率250W。

1.3 微波輔助提取法

微波輔助提取是在水浸提的同時(shí)加入微波。與乙醇提取法相比，其具有選擇性強(qiáng)、操作時(shí)間短、溶劑消耗小、有效成分收率高的特點(diǎn)。

何潔等以70%乙醇為提取劑，在料液比1∶30的條件下，比較索氏提取法、超聲波輔助提取法與微波輔助提取法的總黃酮提取率，并測(cè)定魚腥草總黃酮的還原能力、總抗氧化能力、清除羥基自由基與超氧陰離子自由基的能力。結(jié)果表明，3種提取方法的提取率分別為 3.97%、2.22%和 5.25%；魚腥草總黃酮的抗氧化活性與總黃酮濃度呈良好的量效關(guān)系，其清除羥基自由基與超氧陰離子自由基的能力強(qiáng)于山葡萄籽多酚提取物和VC。

葉春等采用微波輔助提取魚腥草葉中的總黃酮，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，用正交試驗(yàn)進(jìn)行工藝參數(shù)優(yōu)化。優(yōu)化后的工藝條件為：乙醇濃度50%，固液比1∶50，預(yù)浸泡30 min，微波作用時(shí)間30 s，微波功率540 W，總黃酮的提取率可達(dá)95%以上。與傳統(tǒng)乙醇提取法相比，微波輔助提取可使每次提取時(shí)間由3 h縮短為 30.5 min，提取率從 92.14%增加到 95.93%。

1.4 雙水相萃取提取法

雙水相萃取是指兩種高聚物或高聚物與某種高價(jià)無(wú)機(jī)鹽溶于水并靜止一段時(shí)間后形成不相容的上下兩相，其中兩相都含有大量的水分，這一兩相體系稱作雙水相體系。該法具有分離條件溫和、操作簡(jiǎn)單、可連續(xù)操作、易于放大和不使用（或少使用）有機(jī)溶劑等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、酶、氨基酸和天然產(chǎn)物中有效成分的分離純化。

楊靖等利用聚乙二醇（PEG）-硫酸銨雙水相體系對(duì)魚腥草總黃酮進(jìn)行萃取分離，通過單因素試驗(yàn)分別考察PEG分子量、兩相質(zhì)量比、萃取溫度、萃取pH對(duì)魚腥草中總黃酮分離提取的影響，并用正交試驗(yàn)優(yōu)化萃取工藝。 魚腥草總黃酮在以 PEG800∶（NH4）2SO4＝2.0∶2.0 為雙水相體系、萃取 pH 3.0、水浴溫度 50 ℃的條件下，萃取率高達(dá)98.96%。

1.5 復(fù)合酶提取法

酶解法提取魚腥草總黃酮主要利用酶解使魚腥草結(jié)構(gòu)變得松散，降低與原料的結(jié)合力。

黃德娜等采用響應(yīng)面法優(yōu)化復(fù)合酶提取工藝條件，在對(duì)提取時(shí)間、酶用量、提取溫度、pH、料液比5個(gè)影響因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以黃酮提取率為響應(yīng)值，采用Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)方法建立回歸模型；利用軟件Desing Expert V8.0.6作響應(yīng)面分析，得出理論最佳工藝參數(shù)。對(duì)理論參數(shù)進(jìn)行調(diào)整后得到的最優(yōu)工藝參數(shù)為：提取溫度55.0℃，pH 5.5，料液比 1∶60 g/mL， 酶用量 100 μL， 提取時(shí)間 150 min，該條件下的黃酮類化合物提取率為 35.207±1.56 mg/g。

段文錄等研究纖維素酶法提取魚腥草總黃酮的工藝條件，魚腥草原料經(jīng)纖維素酶預(yù)處理后浸提，總黃酮得率可達(dá)到8.182%，酶解最佳條件為：料液中酶質(zhì)量濃度 0.2 mg/mL，酶解溫度 45 ℃，酶解 pH 5.0，酶解時(shí)間90 min。

1.6 乙醇-硫酸銨雙水相聯(lián)合提取法

郝紅英等為優(yōu)化超聲波輔助的乙醇-硫酸銨雙水相聯(lián)合提取魚腥草總黃酮的工藝，通過單因素試驗(yàn)確定影響總黃酮提取率的各因素水平，采用正交試驗(yàn)了解各因素組合的影響程度。結(jié)果表明，各因素的影響排序?yàn)橐掖紳舛取堤崛囟取堤崛r(shí)間〉料液比；最佳提取條件為脫脂魚腥草粉末2.0 g、乙醇用量32.50%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）、硫酸銨用量 16.00%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）、料液比1 g∶20 mL、超聲波頻率300 W、超聲波處理溫度70℃、超聲波處理時(shí)間50 min，在此條件下的魚腥草總黃酮提取率為2.97%。

2 結(jié)語(yǔ)

魚腥草是一類藥食兩用的傳統(tǒng)天然植物，具有一定的藥用價(jià)值和保健作用，而黃酮類成分是魚腥草的有效成分之一。因此，開展魚腥草總黃酮類提取工藝研究，對(duì)于魚腥草資源的進(jìn)一步開發(fā)利用具有重要意義。