巨細胞病毒性肺炎兒童體內淋巴細胞亞群的變化特點

宋恩杰

人巨細胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)是具有雙螺旋結構的DNA病毒，屬于皰疹病毒科中的β亞科。HCMV可以感染成年人但并不發(fā)病，當機體處于免疫功能低下時HCMV可以發(fā)生活動性感染。我國屬于巨細胞病毒(CMV)感染的高發(fā)區(qū)域，特別是兒童由于機體的免疫力低下，容易發(fā)生CMV活動性感染，以CMV肺炎常見[1-3]。當CMV病毒侵入兒童體內并引起活動性感染后，CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞亞群的數(shù)量會發(fā)生相應的變化，因此分析CMV感染的患兒淋巴細胞亞群對于診斷CMV活動性感染情況有著診斷價值[4]。本研究在此基礎上，通過CMV-pp65抗原檢測結果將CMV肺炎患兒分為CMV肺炎高活動性感染組和CMV肺炎活動性感染組，并檢測各組兒童外周血液中CD3+T淋巴細胞、CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞的比例，為臨床輔助診斷CMV肺炎提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年11月至2016年12月在我院收治的幼兒CMV肺炎感染者共102例，其中男67例，女35例，年齡1～2.5歲，平均(1.7±0.2)歲。同時選取健康的兒童外周血液標本15例作為對照組。本研究經(jīng)我院倫理學委員會批準，選擇研究納入人群均獲得其兒童監(jiān)護人的同意并簽署知情同意書。

1.2 試劑及檢測方法 CMV-pp65抗原檢測：采用CMV BriteTM Turbo Kit試劑盒(荷蘭IQ公司)通過ELISA法定性檢測患兒血液中CMV-pp65抗原。CD3、CD4和CD8檢測：CD3、CD4和CD8抗體購買于美國BD公司，使用破膜固定液將白細胞分離后，使用PBS將白細胞密度調整為5×106/mL細胞懸液，取出195 μL，并加入5 μL CD11b流式抗體，避光保存20 min后，采用流式細胞儀檢測。

1.3 CMV活動性感染診斷標準 兒童外周血中CMV-pp65抗原檢測陽性，CMV-pp65抗原檢驗陽性細胞＞100個/5×104WBC為高活動性CMV感染，CMV-pp65抗原檢驗陽性細胞＜100個/5×104WBC診斷為CMV活動性感染。

兒童CMV肺炎的診斷標準參照1998年有中華醫(yī)學會兒科分會制定的《CMV感染診斷方案》[5]：①從兒童受檢的血、尿、唾液或組織等任何一種中分離出CMV。②用特異的單克隆抗體從受檢的組織或細胞中檢測到CMV抗原如IEA、FA或pp65等。③從外周血白細胞中查得CMV抗原(以上3項中有任何一項陽性時，不僅可以診斷CMV感染，并能診斷為產毒性感染)。④用分子雜交或PCR法從受檢材料中檢出CMV-mRNA，表明產毒性感染，如檢出CMV-DNA特異片段，只能表明CMV感染，不能區(qū)分為產毒性或潛伏性感染。

1.4 統(tǒng)計學分析 數(shù)據(jù)分析使用SPSS 19.5軟件完成，以(±s)表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CMV-pp65抗原檢測結果 根據(jù)CMV-pp65抗原檢測結果，將CMV肺炎的患兒分為CMV高活動性感染組和CMV活動性感染組。其中兒童CMV高活動性感染組21例，占實驗組中兒童總數(shù)的20.59%，CMV活動性感染組81例，占實驗組中兒童總數(shù)的79.41%。

2.2 CMV肺炎患兒體內的T淋巴細胞亞群的變化比較 在CMV肺炎高活動性感染組患兒體內，與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；在CMV肺炎活動性感染組患兒體內，與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，表1)。

表1 CMV肺炎患兒體內的T淋巴細胞亞群的變化比較(±s) 單位：%

表1 CMV肺炎患兒體內的T淋巴細胞亞群的變化比較(±s) 單位：%

注：與健康對照組比較，*P＜0.05。

組別 例數(shù) CD3+T淋巴細胞 CD3+CD4+T淋巴細胞 CD3+CD8+T淋巴細胞CMV高活動性感染組 21 71.35±2.58* 30.31±2.47* 41.36±1.24*CMV活動性感染組 81 74.89±1.78* 45.69±3.11* 33.39±2.01*健康對照組 15 85.22±3.13 65.41±4.34 21.58±2.43

3 討論

兒童由于免疫力低下容易誘發(fā)丙肝病毒、柯薩奇B病毒、風疹病毒、流行性腮腺炎病毒、輪狀病毒和CMV等病毒感染[6]。巨細胞病毒是已知的病原微生物中最容易引起兒童急、慢性感染的病毒之一，而且巨細胞病毒具有潛伏-活化的生物學特征，有研究顯示1周歲兒童CMV抗原的陽性檢出率高達80%，一旦兒童的免疫功能低下時，就可以直接誘發(fā)巨細胞病毒的活化并最終導致CMV活動性感染，其臨床表現(xiàn)以兒童CMV肺炎最為常見[7]。在早期由于缺乏特異性的檢測指標，因此極易引起誤診，造成病情延誤。同時，CMV具有泛嗜性的特點，特別是在免疫力低下的患者中，CMV感染可以引起多個器官的病變，而且臨床表現(xiàn)往往不典型，臨床上鑒別診斷CMV感染十分困難。因此，臨床上應對兒童巨細胞病毒性肺炎引起高度重視，及時完善相關檢查，做好鑒別診斷并采用適當治療方案，實現(xiàn)搶先治療，以改善兒童病情及預后，提高兒童生存質量。

目前，對兒童CMV肺性肺炎主要依靠CMV-pp65抗原檢測和CMV基因的PCR檢查，其中CMV基因的PCR檢查是應用最為廣泛的檢查手段，但是這種方法的假陽性率高，因此CMV-pp65抗原檢測逐漸發(fā)展為診斷CMV感染的金標準[8-10]。CMV-pp65抗原檢測的優(yōu)點是可以有效的檢出CMV的活動性感染，而且通過陽性檢出的數(shù)量可以判斷CMV感染的情況，但這種方法耗時長，成本高，而且需要人工計數(shù)。由于CMV病毒在感染機體后，人體內的T淋巴細胞活化并清除體內的CMV，因此患兒體內的T淋巴細胞亞群也隨之發(fā)生改變。這種變化可以從一定程度上反映出機體的免疫功能和病情，為判斷患兒的感染狀況提供參考依據(jù)。

在1～6歲兒童外周血中T淋巴細胞的比例明顯高于成人，約占白細胞總數(shù)40%～70%，而在CMV感染的過程中，T淋巴細胞介導的細胞免疫對CMV的清除發(fā)揮了關鍵作用[11]。其中CD3+的細胞為T淋巴細胞，CD3+CD4+陽性為輔助性T淋巴細胞，CD3+CD8+陽性為抑制性T淋巴細胞[12]。現(xiàn)有的研究顯示[13]，MHCⅡ類分子可以將CMV基因中US2-11編碼的蛋白通過抗原提呈給CD4+和CD8+T淋巴細胞進行識別和殺傷，從而改變T淋巴細胞亞群的免疫功能，因此T淋巴細胞亞群的變化與病毒復制的活動程度密切相關。在CMV肺炎高活動性感染組患兒體內，CD3+T淋巴細胞、CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞的比例分為(71.35±2.58)%、(30.31±2.47)%和(41.36±1.24)%，與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學意義；在CMV肺炎活動性感染組患兒體內，CD3+T淋巴細胞、CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞的比例分為(74.89±1.78)%、(45.69±3.11)%和(33.39±2.01)%，與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。由此可見，當CMV肺炎活動性感染嚴重時，患兒體內CD3+T淋巴細胞和CD3+CD4+T淋巴細胞比例下降，而CD3+CD8+T淋巴細胞則相反，而這種變化特點與CMV-pp65抗原檢測結果相對應，因此可為臨床輔助診斷CMV肺炎提供參考依據(jù)。

[1]史曉薇.兒童各年齡階段人巨細胞病毒感染的研究進展[J].中國婦幼健康研究，2001，12(4)：166-168.

[2]侯安存.兒童CMV感染的中西醫(yī)結合診療[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2012，21(35)：3973-3976.

[3]何強，幺遠，胡艷.Th1/Th2細胞因子在兒童巨細胞病毒感染中的變化[J].臨床兒科雜志，2013，31(3)：280-282.

[4]劉小寧，衡春，李元媛.60例小兒巨細胞病毒感染的血液學檢測分析[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2012，22(4)：733-734.

[5]中華醫(yī)學會兒科學分會感染消化學組.巨細胞病毒感染診斷方案[J].中華兒科雜志，1999，15(7)：441.

[6]Waters A，Jennings K，F(xiàn)itzpatrick E，et al.Incidence of congenitalcytomegalovirus infection in Ireland：implications for screening and diagnosis[J].Journal of Clinical Virology the Official Publication of the Pan American Society for Clinical Virology，2014，59(3)：156-160.

[7]Dreher AM，Arora N，F(xiàn)owler KB，et al.Spectrum of Disease and OutcomeinChildren withSymptomaticCongenitalCytomegalovirus Infection[J].Journal of Pediatrics，2014，164(4)：855-859.

[8]阮光萍，王金祥，姚翔，等.巨細胞病毒pp65抗原檢測的新方法[J].免疫學雜志，2012，28(4)：333-336.

[9]覃海燕，盛瑞媛，張月秋.巨細胞病毒pp65抗原血癥檢測[J].中華傳染病雜志，2002，20(4)：215-217.

[10]段鳳英，吳明昌，閆宗榮.嬰兒巨細胞病毒感染臨床及pp65抗原檢測分析[J].中華全科醫(yī)師雜志，2009，8(9)：669-671.

[11]劉青，楊希晨，華亞軍.反復呼吸道感染兒童T淋巴細胞亞群及免疫球蛋白檢測的意義[J].臨床肺科雜志，2011，16(7)：1024-1025.

[12] 原永明，程麗，張舒，等.白血病治療前后CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T細胞的變化及意義[J].檢驗醫(yī)學，2016，31(5)：387-391.

[13]侯鑄，夏成青，姜永光，等.T淋巴細胞亞群檢測在腎移植排斥反應與巨細胞病毒感染鑒別診斷中的應用[J].臨床泌尿外科雜志，2005，20(6)：337-339.