糖化血紅蛋白檢測(cè)方法研究與觀察

伍娟，陳紅

糖尿病是由于患者血液中的糖含量升高，是胰腺功能逐漸下降而導(dǎo)致的一種疾病，俗稱“富貴病”，主要多發(fā)于中老年患者[1]。該疾病屬于臨床內(nèi)科較頻發(fā)的一類慢性代謝性疾病，其發(fā)病率逐年呈上升趨勢(shì)，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)糖尿病的發(fā)病率高達(dá)15%[2]。發(fā)病后主要表現(xiàn)為“三多一少”癥狀，若不能得到及時(shí)檢查與治療，伴隨著病情的進(jìn)展遷延，容易引發(fā)其它臟器病變，嚴(yán)重影響其日常生活、學(xué)習(xí)和工作。隨著發(fā)病率的逐年升高，得到了社會(huì)及臨床醫(yī)生的廣泛重視。

臨床上對(duì)于糖尿病采用糖耐量試驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，如空腹血糖：＞7.0 mmol/L，或餐后2 h血糖：＞11.1 mmol/L為糖尿病的入選標(biāo)準(zhǔn)。糖耐量試驗(yàn)只能檢測(cè)血糖變異度和血糖水平，還受到體內(nèi)胰島素分泌的影響，存在較多的干擾因素，影響診斷結(jié)果。隨著醫(yī)療科技的發(fā)展，糖尿病的檢測(cè)方式也日漸成熟，其國(guó)際糖尿病協(xié)會(huì)已將糖化血紅蛋白指標(biāo)列入診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。當(dāng)糖化血紅蛋白含量（HbAlc）＞48 mmol/L，可以診斷為糖尿病。臨床上檢測(cè)糖化血紅蛋白的方式較多，包括生化免疫比濁法、陽(yáng)離子交換色譜法、乳膠凝集法及離子捕獲法等。這些檢測(cè)方式對(duì)糖化血紅蛋白含量的測(cè)定均具有一定的臨床意義和價(jià)值[4]。本文主要針對(duì)糖化血紅蛋白的檢測(cè)方式進(jìn)行研究，希望可以為臨床檢驗(yàn)提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇糖化血紅蛋白檢測(cè)儀型號(hào)：MQ－2000 HbAlc分析儀（上海惠中醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)），試劑（上海華臣生物有限責(zé)任公司，批準(zhǔn)文號(hào)20111111）。血液生化檢測(cè)儀（深圳邁瑞800生化分析儀）。通過(guò)第三方質(zhì)物（Bio-Rad）控進(jìn)行質(zhì)控簡(jiǎn)評(píng)，觀察兩個(gè)水平的濃度變化。血液標(biāo)本：選取2014年12月～2017年2月在本院進(jìn)行糖尿病檢測(cè)的患者45例，均抽取2 ml的靜脈血液加入1.5 mg/m LEDTA-K的抗凝劑中，所有血液標(biāo)本均在采集后的12 h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)方式 采用TTAB作為溶血?jiǎng)瑢⒉杉难簶?biāo)本中的紅細(xì)胞溶血，再加入抗HbAlc的抗體緩沖液與可溶性的抗體抗原反應(yīng)，形成可溶性的抗體復(fù)合物，再使用Bio-Rad的配套試劑：全血灌注液、洗脫緩沖液與過(guò)剩的HbAlc抗體進(jìn)行結(jié)合，形成不溶血的多聚半抗原后，再進(jìn)行免疫比濁測(cè)定[5]。

陽(yáng)離子交換色譜法：主要先選定合適的緩沖液，然后在低溫環(huán)境下進(jìn)行洗脫HbAlc再應(yīng)用高濃度的洗脫液清洗出非HbAlc物質(zhì)，然后可以獲得相應(yīng)的血紅蛋白層析譜，根據(jù)HbAlc指標(biāo)變化值在色譜圖中所顯示的HbAlc峰面積占全血紅蛋白面積的百分比來(lái)進(jìn)行表示[6]。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察不同檢測(cè)方式后，第三方質(zhì)控物質(zhì)的2個(gè)濃度變化及質(zhì)評(píng)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較。

2 結(jié)果

2.1 2個(gè)濃度水平的變化 經(jīng)不同的檢測(cè)方式后，測(cè)定的HbAlc指標(biāo)的室內(nèi)變異性＜2%，室間變異性也＜3.5%，且變異系數(shù)（CV）與靶值的差異性較小，見(jiàn)表1。

表1 2個(gè)濃度水平變化（%）

2.2 兩種檢測(cè)方式的質(zhì)評(píng)結(jié)果統(tǒng)計(jì) 不同檢測(cè)方式后的質(zhì)評(píng)結(jié)果統(tǒng)計(jì)，見(jiàn)表2。

表2 不同檢測(cè)方式后的質(zhì)評(píng)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3 討論

糖尿病是臨床上較常見(jiàn)的內(nèi)科慢性代謝性疾病，病程相對(duì)較長(zhǎng)，病情進(jìn)展緩慢，若不能夠在短時(shí)間內(nèi)預(yù)防及治療，伴隨著病程的遷延，往往會(huì)延誤最佳的治療時(shí)機(jī)，出現(xiàn)較多的并發(fā)癥情況，甚至損害人體的其它器官組織或臟器，嚴(yán)重影響患者的日常生活、工作質(zhì)量及生命健康[7]。在所有糖尿病類型中，2型糖尿病的發(fā)病情況較常見(jiàn)和多發(fā)，約占總發(fā)病率的95%左右，主要是由于2型糖尿病受遺傳及環(huán)境等因素的影響更明顯[8]。糖尿病大多數(shù)是由胰腺分泌胰島素不足或胰島素代謝紊亂所致的一類內(nèi)分泌代謝性疾病。糖尿病的發(fā)病人群較廣，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，主要多見(jiàn)于青少年及中老年人群。臨床上誘發(fā)2型糖尿病的主要因素包括進(jìn)食過(guò)多、運(yùn)動(dòng)量少、肥胖等因素息息相關(guān)。糖尿病發(fā)病后最典型特征是“三多一少”，即多飲、多食、多尿及體重減輕。臨床管理該疾病多采用藥物治療，來(lái)快速控制血糖，并進(jìn)行合理的監(jiān)督或提高患者自我管控能力，從而達(dá)到更好的控制血糖水平的目的，并進(jìn)一步改善其日常生活質(zhì)量[9]。臨床中對(duì)于該疾病的檢測(cè)方式包括糖耐量試驗(yàn)及糖化血紅蛋白含量的測(cè)定。由于在進(jìn)行糖耐量試驗(yàn)的過(guò)程中，容易受胰島素水平等因素的影響，對(duì)血糖水平的測(cè)定具有一定的局限性，限制時(shí)間及飲食等情況。伴隨著醫(yī)療科技的逐漸發(fā)展與成熟，糖化血紅蛋白的測(cè)定也逐漸完善，并應(yīng)用于臨床疾病的診斷。其主要的檢測(cè)方式包括免疫檢測(cè)法、陽(yáng)離子交換色譜法、乳膠凝集法等[10]。從檢測(cè)原理上分析免疫檢測(cè)法，主要是利用抗原抗體結(jié)合的方式，形成特異性反應(yīng)，其抗體具有高度的特異性能夠識(shí)別鏈糖基化多肽中的氨基酸，盡量避免電荷數(shù)的變化，從而減少了干擾因素，同時(shí)該檢查技術(shù)具有檢測(cè)時(shí)間短、成本低、重復(fù)操作性好及操作方式簡(jiǎn)單等臨床檢測(cè)優(yōu)勢(shì)。但也存在一定的缺陷，如可能存在含有結(jié)構(gòu)變異的Hb、容易交叉污染，均會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成一定的影響，從而會(huì)影響整個(gè)疾病的診斷。陽(yáng)離子交換色譜法，其精密度、敏感性及線性均略高于免疫檢測(cè)法，其也有缺點(diǎn)，如不能從HbA1c中分離胎兒型的血紅蛋白，還存在一些稀有異常變化或變種的紅細(xì)胞，均會(huì)對(duì)測(cè)定過(guò)程造成一定的干擾。

綜上所述，對(duì)于糖尿病的檢測(cè)中，各種糖化血紅蛋白的檢測(cè)方法被廣泛的推廣應(yīng)用，其檢測(cè)方式各有利弊，對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響也均不同。免疫檢測(cè)法具有較高的敏感性和特異性，且操作方式簡(jiǎn)單方便，檢測(cè)成本較低，但受紅細(xì)胞的影響較大，形成一定的干擾因素；陽(yáng)離子交換色譜法，特異性略低，受血紅蛋白的影響小。

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