毛細管氣相色譜法同時測定埃索美拉唑鎂原料藥中8種有機溶劑的殘留量

郭 陽，馮 敏，陳玉潔[石藥集團中奇制藥技術（石家莊）有限公司，石家莊 050035]

埃索美拉唑鎂（Esomeprazole Magnesium）商品名為耐信（Nexium），是奧美拉唑的（S）-型異構體，是全球首個治療胃潰瘍方面的手性質子泵抑制劑（PPI），通過特異性抑制胃壁細胞質子泵減少胃酸分泌[1]，其主要用于治療胃食管反流病、幽門螺桿菌（Hp）陽性的消化性潰瘍等疾病；其特點為口服后的首關效應少，生物利用度和血藥濃度較奧美拉唑或其（R）-型異構體高。研究表明，埃索美拉唑鎂療效明顯優于奧美拉唑、蘭索拉唑、雷貝拉唑以及泮托拉唑等[2]。埃索美拉唑鎂在合成工藝中使用了乙醇、乙酸乙酯、異丙苯、甲醇、甲苯、2-苯基-2-丙醇、二氯甲烷和乙腈等有機溶劑，為有效控制該原料藥質量，保證用藥安全，必須對上述有機溶劑殘留量進行有效控制。鑒于此，筆者參考相關文獻[3-5]，采用毛細管氣相色譜法建立了同時測定埃索美拉唑鎂原料藥中上述8種有機溶劑殘留量的方法，以期為該原料的質量控制提供依據。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 7890A型氣相色譜儀，包括自動進樣器、氫火焰離子化檢測器、色譜工作站（美國Agilent公司）；XS105 DualRange型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 藥品與試劑

埃索美拉唑鎂原料藥[石藥集團中奇制藥技術（石家莊）有限公司，批號：20160101、20160102、20160103]；乙醇對照品（天津市光復科技發展有限公司，批號：20161110）、乙酸乙酯對照品（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20140929）、異丙苯對照品（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號：G1530023）、甲醇對照品（ACS Chemicals Supply，批號：63Y1706TE）、甲苯對照品（天津市致遠化學試劑有限公司，批號：20161019）、2-苯基-2-丙醇對照品[薩恩化學技術（上海）有限公司，批號：EA180093]、二氯甲烷對照品（天津市致遠化學試劑有限公司，批號：20161110）、乙腈對照品（RCI Labscan Limited，批號：16010307），純度均＞97%；二甲基亞砜為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-1（60 m×0.53 mm，5.00 μm）；升溫程序：初始溫度為40℃，保持6 min，以20℃/min升溫至160℃，保持3 min，以20℃/min升溫至210℃，保持5 min；進樣口溫度：220℃；檢測器：氫火焰離子化檢測器；檢測器溫度：250℃；載氣：氮氣；流速：4.0 mL/min；分流比：10∶1；進樣量：1 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 精密稱取乙醇對照品500 mg、乙酸乙酯對照品500 mg、異丙苯對照品500 mg、甲醇對照品300 mg、甲苯對照品89 mg、2-苯基-2-丙醇對照品89 mg、二氯甲烷對照品60 mg、乙腈對照品41 mg，置于同一100 mL量瓶中，加二甲基亞砜定容，搖勻，即得混合對照品貯備液。精密量取上述混合對照品貯備液5 mL，置于50 mL量瓶中，加二甲基亞砜定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取樣品0.9 g，置于10 mL量瓶中，加二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 空白對照溶液 取二甲基亞砜適量作為空白對照溶液。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液和空白對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達到基線分離，分離度＞1.5；理論板數以乙醇峰計為40 000，保留時間為7.5 min。結果表明，其他成分對測定無干擾。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

2.4 線性關系考察

精密量取“2.2.1”項下混合對照品貯備液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，加二甲基亞砜定容，搖勻，即得系列混合對照品溶液。取上述系列混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測有機溶劑質量濃度（x，μg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。

表1 回歸方程與線性范圍Tab 1 Regression equations and linear ranges

2.5 定量限（LOQ）與檢測限（LOD）考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。當信噪比為10∶1時，得LOQ；當信噪比為3∶1時，得LOD。結果，乙醇、乙酸乙酯、異丙苯、甲醇、甲苯、2-苯基-2-丙醇、二氯甲烷、乙腈的LOQ分別為4.5、3.0、1.4、2.7、0.6、3.0、3.9、2.8 ng；LOD 分別為 2.2、1.0、0.4、1.4、0.3、1.0、2.0、1.4 ng。

2.6 精密度試驗

精密量取“2.2.1”項下混合對照品溶液1μL，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，乙醇、乙酸乙酯、異丙苯、甲醇、甲苯、2-苯基-2-丙醇、二氯甲烷、乙腈峰面積的RSD分別為1.0%、1.0%、1.0%、1.0%、1.2%、1.0%、1.3%、1.4%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗

取樣品（批號：20160101）適量，共6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算有機溶劑殘留量。結果，只檢出乙醇、甲醇、甲苯，其殘留量的平均值分別為0.08%、0.06%、0.02%；RSD分別為1.8%、1.4%、1.5%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取樣品（批號：20160101）適量，共9份，每份約0.9 g，分別置于10 mL量瓶中，各加入低、中、高質量的待測有機溶劑對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表2。

表2 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 2Results of recovery tests（n＝9）

續表2Continued tab 2

2.9 樣品有機溶劑殘留量測定

取3批樣品各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品有機溶劑殘留量，結果見表3（表中“-”表示未檢出）。

表3 樣品有機溶劑殘留量測定結果（n＝3，%）Tab 3 Results of residual organic solvents in samples（n＝3，%）

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

筆者嘗試使用DB-WAX色譜柱進行試驗，結果乙醇與二氯甲烷不能有效分離，調整升溫程序及載氣流速分離效果均不佳；后選用HP-1色譜柱，結果乙醇與二氯甲烷分離度較好，且其他有機溶劑均分離適宜，因此選擇HP-1為本試驗的色譜柱。

3.2 氮氣流速的選擇

在方法優化過程中逐漸提升載氣流速，結果顯示，流速越高色譜峰越尖銳，靈敏度也越高，并且可縮短分析時間；但是流速過高，柱壓增加，相鄰溶劑峰分離度會變差，綜合考慮，本試驗選擇氮氣流速為4.0 mL/min。

3.3 進樣口溫度的選擇

為了使樣品更快更好地氣化，綜合考慮樣品對熱穩定的特性、溶劑二甲基亞砜的沸點（189℃）以及待測有機溶劑的沸點，最終本試驗選擇進樣口溫度為220℃。

3.4 穩定性試驗

因供試品溶液濃度較高，溶劑二甲基亞砜熔點低于20℃，在低溫環境下易結冰，因此供試品溶液宜現配現用，本文亦不做穩定性試驗。

綜上所述，本方法靈敏度好，操作簡單，適用于埃索美拉唑鎂原料藥中8種有機溶劑殘留量的同時測定。

[1]Koch TR，Petro A，Darrabie M，et al.Effects of esomeprazole magnesium on nonsteroidal anti-inflammatory drug gastropathy[J].Dig Dis Sci.，2005 ，50（1）：86-93.

[2]陳華，王曉蕙，金偉華.耐信[J].中國新藥雜志，2003，12（6）：478-479.

[3]李淑麗，韋林洪，殷義平.埃索美拉唑鈉殘留溶劑苯的測定[J].化學研究與應用，2016，28（3）：366-369.

[4]馮光玲，丁文娟，馮愛國，等.毛細管氣相色譜法測定阿莫曲坦原料藥中8種有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2014，25（5）：453-455.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：127-128.