產ESBLs腸桿菌科細菌檢測及藥敏分析

劉艷潔 張靈利

ESBLs主要由腸桿菌科細菌產生, 這些酶能夠水解青霉素、頭胞菌素、氨曲南等β-內酰胺類抗生素, 是介導陰性桿菌對廣譜β-內酰胺酶類抗菌藥物耐藥的主要機制之一［1,2］。隨著廣譜抗菌藥物廣泛應用, 細菌耐藥性不斷增加, 各地因使用的抗生素種類和習慣的不同, 產ESBLs腸桿菌科細菌分離率和耐藥率可能存在明顯的不同。現對本院2016年1～12月產ESBLs菌株的菌譜分布情況和細菌耐藥情況進行統計分析, 為臨床醫生抗感染治療提供有力的理論依據。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1標本來源 所有標本均來自本院2016年1～12月住院患者送檢的各種標本。

1.1.2培養基 5%兔纖維血培養基、麥康凱瓊脂、巧克力瓊脂、M-H培養基均購自溫州康泰有限責任公司。

1.1.3鑒定及藥敏試條 自動化鑒定及藥敏板購自上海星佰生物技術有限公司；藥敏紙片購自北京天壇。

1.1.4質控標準菌株 金黃色葡萄球菌ATCC29213、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853均購自衛計委藥品和生物制品檢定所。

1.2方法

1.2.1室內質控 微生物人員、儀器和設備、平板、鑒定及藥敏試條和紙片均在質控范圍之內。

1.2.2將送檢標本立即接種于血平板、麥康凱、巧克力平板培養基, 36℃、5%～7% CO2、24～48 h, 分離出可疑菌落。

1.2.3用上海星佰BIOJOSUN-Ⅱ微生物鑒定藥敏分析儀進行細菌鑒定及藥物敏感試驗。

1.2.4對儀器提示為產ESBLs的菌株, 用紙片協同法進行ESBLs的確證試驗。細菌培養鑒定和藥敏試驗嚴格按全國臨床檢驗操作規程(第4版)進行［3］。

1.2.5細菌鑒定及藥敏試驗結果通過WHONET5.6進行統計。

2 結果

2.1細菌分離率 2016年1～12月共檢出大腸埃希菌677株,其中產ESBLs237株, 占 35.0%；檢出克雷伯菌屬276株,產ESBLs116株, 占42.0%；檢出變形桿菌46株, 其中產ESBLs20株, 占 43.5%。

2.2產酶株與非產ESBLs株耐藥率 產ESBLs的大腸埃希菌為237株, 對哌拉西林的耐藥率為98.0%, 對哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為22.6%, 對頭孢吡肟的耐藥率為78.9%, 對頭孢他啶的耐藥率為82.6%, 對美羅培南的耐藥率為1.5%, 對亞胺培南的耐藥率為1.2%, 對慶大霉素的耐藥率為50.6%, 對環丙沙星的耐藥率為80.5%, 對阿米卡星的耐藥率為28.6%。非產ESBLs的大腸埃希菌為440株, 對哌拉西林的耐藥率為78.9%, 對哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為14.3%, 對頭孢吡肟的耐藥率為20.5%, 對頭孢他啶的耐藥率為30.7%, 對美羅培南的耐藥率為0.5%, 對亞胺培南的耐藥率為0.5%, 對慶大霉素的耐藥率為41.2%, 對環丙沙星的耐藥率為39.9%, 對阿米卡星的耐藥率為2.3%。產ESBLs的肺炎克雷伯菌為116株,對哌拉西林的耐藥率為89.1%, 對哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為14.8%, 對頭孢吡肟的耐藥率為70.5%, 對頭孢他啶的耐藥率為80.4%, 對美羅培南的耐藥率為1.8%, 對亞胺培南的耐藥率為0.7%, 對慶大霉素的耐藥率為59.7%, 對環丙沙星的耐藥率為45.1%, 對阿米卡星的耐藥率為21.8%。非產ESBLs的肺炎克雷伯菌為160株, 對哌拉西林的耐藥率為49.4%,對哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為9.6%, 對頭孢吡肟的耐藥率為30.2%, 對頭孢他啶的耐藥率為40.3%, 對美羅培南的耐藥率為0, 對亞胺培南的耐藥率為0, 對慶大霉素的耐藥率為25.4%, 對環丙沙星的耐藥率為26.6%, 對阿米卡星的耐藥率為9.3%。根據藥敏試驗結果顯示, 產酶株比非產酶株的耐藥率高。

3 討論

ESBLs主要由腸桿菌科細菌產生, 大多為質粒介導的ESBLs, 往往是由普通的β-內酰胺酶基因(TEM-1、TEM-2、SHV-1)突變而來［4］。這些酶能夠水解青霉素、頭胞菌素、氨曲南等β-內酰胺類抗生素。隨著廣譜抗菌藥物廣泛應用于臨床, 產ESBLs菌株越來越多。由于ESBLs的編碼基因位于質粒上, 可通過接合、轉化和轉導、轉移、轉整、轉座等形式使耐藥基因在細菌間傳遞, 易造成耐藥菌的流行, 從而導致嚴重醫院內交叉感染［5］。ESBLs可以通過接合、轉化和轉導等形式使耐藥基因在細菌中擴散, 從一個細菌傳遞到另一個細菌, 甚至在不同的菌種之間傳遞。三代頭孢菌素能夠誘導腸桿菌科細菌產生ESBLs, 本院三代頭孢菌素使用已非常普及, 對頭孢菌素類耐藥率都非常高, 可能與這些藥物為本院常規用藥, 誘導產生耐藥有關。以往認為ESBLs主要由克雷伯菌和大腸埃希菌產生, 現研究發現其他腸桿科細菌有明顯上升趨勢。第三、四代頭孢菌素對產ESBLs菌株即使體外敏感, 也不能用于臨床治療［6-9］。目前認為可用于治療產ESBLs菌引起感染的藥物有：碳青霉烯類抗生素、頭霉烯類抗生素、阿米卡星及廣譜頭孢菌素/β-內酰胺酶抑制劑。

隨著廣譜抗菌藥物的大量應用, 細菌耐藥性越來越嚴重,控制耐藥菌株流行刻不容緩, 做好細菌耐藥性監測, 及時切斷傳播途徑, 加強抗生素的合理使用及管理, 對有效控制產ESBLs菌株的流行將起到至關重要作用。因此, 實驗室對革蘭陰性桿菌ESBLs檢測顯得更加重要, 對ESBLs檢測應擴展到腸菌科所有陰性桿菌, 需引起臨床和臨床微生物檢驗工作人員的重視。

［1］ 金輝, 趙旺勝, 翁幸鐾, 等 .2006—2008年大腸埃希菌耐藥基因的研究.中華醫院感染學雜志, 2011, 21(24):5107-5110.

［2］ 李耘, 呂媛, 王珊.2010年度衛生部全國細菌耐藥監測報告:非發酵革蘭陰性桿菌耐藥監測.中華醫院感染學雜志, 2011,21(24):5133-5137.

［3］ 葉應嫵, 王毓三.全國臨床檢驗操作規程.南京:東南大學出版社, 1997:472-531.

［4］ 符永玫, 張永標, 席云, 等 .產 ESBLs肺炎克雷伯菌的流行狀況與藥敏譜調查.中國衛生檢驗雜志, 2010, 20(2):402-403.

［5］ 黃彬, 陳茶, 湯曉麗, 等.肺炎克雷伯菌對喹諾酮類及氨基糖苷類耐藥基因檢測及耐藥機制分析.中華醫院感染學雜志,2011, 21(1):5-7.

［6］ 李玉梅, 安宏志.產ESBLs腸桿菌科細菌檢測及藥敏分析.中外健康文摘, 2014(15):60-61.

［7］ 王卓, 王雨新, 陳強, 等 .產 ESBLs腸桿菌科細菌的檢測及耐藥性.中國微生態學雜志, 2016, 28(5):564-566.

［8］ 周勇, 張晶, 陶霞, 等 .廣州市健康人群腸道攜帶產ESBLs腸桿菌科細菌的耐藥分析.中國衛生檢驗雜志, 2014(14):2104-2107.

［9］ 王喜仁, 薛峰, 朱月秋, 等.腸桿菌科細菌中產超廣譜 β-內酰胺酶菌株的檢測及藥敏分析.中國抗生素雜志, 2003, 28(12):730-732.