免疫固定電泳診斷多發性骨髓瘤的臨床價值

程瑋

多發性骨髓瘤是臨床最為常見的惡性漿細胞疾病, 主要是由單克隆漿細胞增生異常所致, 大量單克隆免疫球蛋白(M蛋白)被釋放, 導致患者產生腎功能損傷、感染等癥狀表現, 嚴重危害患者身體健康［1］。為探討安全高效的診斷方式, 本院對收治的多發性骨髓瘤患者分別采用血清蛋白電泳和免疫固定電泳兩種診斷方式, 具體內容報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015年1月～2017年12月收治的45例多發性骨髓瘤患者為研究對象, 年齡38～76歲, 平均年齡(57.2±8.5)歲；患者臨床癥狀符合多發性骨髓瘤診斷標準, 自愿參與本次研究。

1.2 方法 本組45例患者均分別進行血清蛋白電泳與免疫固定電泳診斷, 具體如下。

1.2.1 血清蛋白電泳 在電泳槽內放入緩沖液, 適當調整,確保兩側位于同一水平面；制備醋酸纖維素薄膜, 于毛面負極側1.5 cm作記號, 標出正負極；在巴比妥鈉緩沖液中充分浸泡薄膜后取出, 吸去多余緩沖液；保持薄膜毛面朝上貼于電泳槽支架, 用醫用無菌吸管取3 μl血清于標記處, 血樣與薄膜邊緣不完全接觸, 觀察到血清滲入薄膜, 將薄膜反轉, 拉直貼于電泳槽支架, 連通緩沖液和薄膜兩端, 靜待片刻；正確接通電源, 電壓120 V, 電流0.5 mA/cm, 通電時長50 min。通電結束后, 放入氨基黑10 B染色液中, 染色時間為10 min, 將多余染料用漂洗液除去, 直至背景無色。定量方法為比色法,吸干薄膜, 剪下染色部分置入相應試管, 放入6 ml 0.4 mol/L氫氧化鈉于白蛋白管, 其他管內加入3 ml, 置入溫度37℃的冰箱內, 停留20 min；用分光光度計在620 nm處讀取吸光度(結果×2), 計算各管血清蛋白電泳水平。

1.2.2 免疫固定電泳 將含有抗原的血清蛋白質置于瓊脂凝膠介質區帶電泳, 使不同蛋白質因凈電荷不同, 帶電微粒因電泳遷移率的差別而分離；在凝膠表面的泳道上加入免疫球蛋白、固定劑和輕鏈抗血清, 確保抗血清和固定劑滲入凝膠并擴散, 若存在抗原, 可形成相應抗體復合物；使用氨基黑著色染色后的蛋白質電泳道和抗原抗體沉淀區, 分離單克隆組分, 分型免疫球蛋白及其輕鏈。

1.3 觀察指標 比較兩種診斷方式對多發性骨髓瘤的檢出率。

1.4 統計學方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行數據統計分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

血清蛋白電泳檢出多發性骨髓瘤患者35例(77.8%), 免疫固定電泳檢出多發性骨髓瘤患者45例(100.0%)；兩種方式的多發性骨髓瘤檢出率比較差異有統計學意義(χ2=11.250,P=0.001＜0.05)。

3 討論

多發性骨髓瘤也被稱為漿細胞瘤, 由漿細胞異常增生所致, 可破壞患者骨骼, 同時使得免疫功能下降、腎功能異常、出現貧血癥狀, 主要特征表現為M蛋白生成過度, 個別患者可能是未分泌型多發性骨髓瘤, 以中老年群體為主要發病對象 , 男性稍高于女性［2］。

目前臨床尚未明確多發性骨髓瘤發病機制, 但都認為與患者自身免疫性疾病、病毒感染、化學品接觸、電離輻射和遺傳等因素有關。生化常規檢測、骨髓檢查、染色體檢查和血清游離輕鏈檢查是比較常用的檢查方式, 血清異常球蛋白增多, 白蛋白數目減少或漿細胞數目異常增加或骨髓染色體17p13缺失或血清游離輕鏈顯示未陽性均可用于檢測多發性骨髓瘤。免疫球蛋白是機體重要組成部分, 在機體內保持固定水平, 一旦免疫球蛋白水平出現異常變化, 便意味著有免疫缺陷病或免疫增殖病產生［3］。電泳通常被用于核酸、蛋白質等生物分子的研究, 操作簡便、選擇性高、分辨率高。血清蛋白電泳往往以醋酸纖維素制成薄膜, 應用原理為：蛋白質分子形狀、大小不同, 等電點存在差別, 不同環境中, 血清蛋白移動方向各不相同。需要注意的是, 通電時應避免接觸薄膜或緩沖液, 血清標本應為現場采取, 無溶血, 盡量選用水溶性好、吸光度敏感、對不同蛋白質親和力無明顯差別, 形成的蛋白質復合物穩定性高且脫色方便的染料。血清蛋白電泳標本用量少、靈敏度和分辨率較高, 所用時間短,不吸附染料, 區帶均勻, 便于比色定量和光度掃描, 但此方案可能出現輕微電滲現象, 薄膜吸水性一般, 電阻變大幾率高, 選擇過大電流時, 蛋白質分子可能因水分蒸發而變性破壞。免疫固定電泳是將免疫特異性和電泳分離效果相結合的特殊診斷方式, 于上世紀70年代中期用于免疫球蛋白研究［4］。與免疫電泳不同的是, 其可以將抗血清直接置于蛋白質區帶表面, 使得凝膠表面的抗原抗體能出現直接性沉淀反應, 形成相應復合物, 便于不同球蛋白和輕鏈的鑒別。瓊脂是目前免疫固定電泳中比較常用的電泳支持物, 檢測靈敏性明顯高于免疫電泳, M蛋白區帶狹窄而界限明確, 正常血清γ球蛋白或多克隆增殖蛋白區帶較為彌散［5-8］。免疫固定電泳最常用來鑒定分型M蛋白, 也是檢測與分型本周氏蛋白質和寡克隆蛋白的主要手段, 具有敏感度高、分辨率明顯、操作簡便、易于分析等優勢［9,10］。本次研究結果顯示, 血清蛋白電泳檢出多發性骨髓瘤患者35例(77.8%), 免疫固定電泳檢出多發性骨髓瘤患者45例(100.0%)；兩種方式的多發性骨髓瘤檢出率比較差異有統計學意義(χ2=11.250,P=0.001＜0.05)。表明免疫固定電泳檢測多發性骨髓瘤準確性高。

綜上所述, 給予多發性骨髓瘤患者免疫固定電泳檢測,有利于提高檢測結果和疾病分型的準確程度, 推廣應用價值高。